PRÁCTICA No.3 “DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE UREA EN SUERO”
INTRODUCCIÓN
La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) más abundantes en el cuerpo. Los demás son la creatinina, el ácido úrico, el amonio y los aminoácidos. En otros tiempos todos eran medidos juntos (prueba del NNP), pero debido a que el análisis de cada componente por separado es bastante sencillo y proporciona datos más precisos, las pruebas individuales han sustituido al global casi por completo. La urea es el principal producto nitrogenado de desecho del metabolismo metabolismo de las proteínas y sólo se sintetiza en e l hígado. Su concentración concentración es igual en todos los líquidos corporales, con excepción de la sangre entera debido a la diferencia de valores que existe entre el s uero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere el suero o plasma a la sangre entera para analizar el nitrógeno de urea. Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos de los estudios más solicitados para detecta la capacidad del riñón para excretar desechos metabólicos. La elevación de estos valores s e emplea, junto con otros, como indicador de la necesidad de diálisis en pacientes con insuficiencia renal crónica. La interpretación de los valores del nitrógeno de urea exige el conocimiento de la ingestión de proteína exógena y de líquidos, y las condiciones que pueden incrementar la producción endógena (por ejemplo: la actividad muscular, un traumatismo, la infección de una dieta muy restringida, el ayuno o la inanición). Cualquiera de estas variables pueden aumentar la concentración sanguínea o urinaria que en si mismo no es un reflejo real de la depuración renal de urea. Pueden usarse dos pruebas, con las debidas precauciones e la interpretación, como indicadores aproximados de mejoría o deterioro de la función renal del individuo. Aunque las determinaciones de urea es mucho menos específica que de la creatinina sérica, es de uso común, particularmente en pediatría, como una prueba de rutina para la función renal y para conocer algo sobre el estado de hidratación del individuo. Grados menores de disfunción renal requieren análisis más sostificados como las pruebas de depuración. UREA COMO PRODUCTO FINAL EN EL SER HUMANO
Un ser humano moderadamente activo que consume cerca de 300 g de carbohidratos, 100 g de grasa y 100 g de proteínas diariamente, debe excretar aproximadamente 16.5 g de nitrógeno al día, 95% en al orina y 5% en las heces. Para las personas que consumen dietas occidentales, la urea sintetizada ene l hígado, liberada hacia la sangre y depurada por los riñones, constituye de 80-90% del nitrógeno excretado. FORMACIÓN DE LA UREA
La síntesis de un mol de urea requiere de tres moles de ATP, un mol de amoniaco amoniaco y el nitrógeno de alfa amino del aspartato. Enzimas que catalizan las reacciones: 1. Carbamoil fostafo sintasa I 2. Orinitin transcabamoilasa transcabamoilasa 3. Arginasa 4. Argininosuccinasa Argininosuccinasa 5. Acido argininosuccínico argininosuccínico sintasa. De los seis aminoácidos aminoácidos participantes el N- acetilglutamato acetilglutamato funciona únicamente únicamente como un activador enzimático. Los demás sirven como como portadores de átomos que en última instancia instancia se convierten en urea. En los mamíferos, la función principal principal de la ornitina, la citrulina y al argininosucinato está en la síntesis de urea. La biosíntesis de urea es un proceso cíclico. cíclico. La ornitina consumida consumida en la reacción es degenerada en la reacción 5 y no hay pérdida ni ganancia total total de ornitina, citrulina, argininosuccinato argininosuccinato o arginina. Sin embargo embargo el ion amonio, CO 2 y ATP y aspartato sí se consumen, consumen, algunas reacciones reacciones de la síntesis de urea tiene lugar e n la matriz mitocondrial mitocondrial en tanto que otras se realizan en el citosol.
1
FISIOLOGÍA
La urea se forma a través de un proceso de degradación proteínica, la proteína se transforma a partir de aminoácidos en amoniaco (desaminación oxidatixa), como un producto final y de ahí en urea (ciclo de la ornitina) dentro del hígado. Debido a que el organismo no utiliza urea, es trasportada en la sangre hasta que es excretada por vía urinaria. Sus concentraciones varían fisiológicamente, fisiológicamente, dependiendo de una manera directa del consumo de proteínas en la dieta (exógeno) y del estado de hidratación (proporción de soluto a solvente ene l cuerpo), o de modo indirecto por al tasa del catabolismo tisular (rápida degradación corporal, que incrementa el desperdicio de nitrógeno), o por la tasa de anabolismo tisular (disminución de las concentraciones por un mayor índice de construcción tisular, como sucede durante al gestación o convalecencia. La urea se excreta en el filtrado glomerular y se reabsorbe (probablemente por difusión) en el túbulo de la n eurona. Sólo se excreta una fracción de todo el material de desperdicio contenido en el filtrado glomerular, pero a causa de que la urea se r eabsorbe en los túbulos de manera deficiente, se reabsorbe poca urea, esto es un efecto benéfico.
PATOLOGÍAS RELACIONADAS:
HIPERATOZEMIA
Azotemia: es el exceso de urea o de otros productos nitrogenados en la sangre. Sólo se producen elevaciones consistentes de la concentración del nitrógeno de urea cuando la función renal, específicamente el IFG, está disminuido de 40-60 por ciento. El índice de filtración glomerular puede alterarse no sólo por disfunción renal sino por también por desviación prerrenal de agua (pérdida de volumen circulante por una causa cualquiera), la cual conduce a un aumento de retención de la urea. Por lo general, la azotemia se presenta debido a pérdida de volumen circulante, catabolismo proteínico excesivo o deterioro de la función renal. La interpretación del incremento en la urea sanguínea depende del conocimiento de ambos grupos de factores, renales y extrarrenales, extrarrenales, y su importancia im portancia relativa. Sólo puede considerarse ciertamente ciertamente como tal la que supere los 50 mg, a no ser que no se conozcamos para el individuo cifras anteriores más bajas. Hay que tener e n cuenta también, como en otro análisis, comprendidas entre 30 y 50, serán claramente patológicas. Según el grado, puede hablarse de una retención incipiente la que llega hasta 80, moderada y 100, grave entre 100 y 150, y gravísima por encima de 150.
Urea alta neuropática y urológica (uremia renal y posrenal).
La hiperazotemia es el signo humoral más simple de la insuficiencia renal orgánica y constituye la uremia genuina en clínica. Pero hay que tener bien clara la idea de que no toda la urea alta significa uremia ni nefropatía, muchas veces la elevación de la urea obedece a causas extrarrenales.
2
Uremia aguda
Va acompañada de anuria o oliguria con orina densa. Aunque rápidamente se alcanzan cifras muy altas o muy altas de urea, el cuadro es, a veces irreversible. En la glomerulonefritis aguda en la que, a diferencia de la crónica, la reacción xantroproteica es normal, pues salvo la anuria absoluta no existe retención de sustancias aromáticas. En la nefropatía anúrica (nefrosis de neurona distal, anuria traumática, etc), el en shock, necrosis muscular isquémica, shocks hemolíticos o transfusionales. En la nefrosis necrotizante necrotizante por el sublimado y otros tóxicos.
Uremia Crónica
Con una cantidad normal de orina o con poliuria compensadora. La orina tiene una densidad densa. Corresponde a lesiones renales avanzadas e irreversibles, de ahí la razón pronostica para separar este grupo del anterior. En la glomérulonefritis glomérulonefritis crónica, aquí la reacción xantoproteica xantoproteica de cifras altas. En la esclerosis renal primaria o secundaria. En las nefropatías quirúrgicas (hidronefrosis, (hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis, riñón poliquístico, etc.) En la nefropatía calcéra de la osteítis fibrosis quística avanzada, avanzada, también en el mieloma múltiple se observa a menudo insuficiencia renal, en un caso neutro, la retención ureica alcanzó 360 mg.
Urea alta extrarrenal o prerrenal
Es decir, sin nefropatía demostrable, demostrable, aunque puede existir, por lo menos en algunos casos, una insuficiencia renal funcional. funcional. Es un trastorno trastorno irreversible en al eliminación renal y no da lugar ala uremia propiamente propiamente dicha. Se presenta siempre en forma aguda o subaguda, alcanzándose rápidamentea veces cifras muy altas, superiore superioress a la azotemia azotemia neuropát neuropática. ica. Suele Suele acompañars acompañarse e de oliguria, oliguria, con orina de densidad densidad normal normal o concentrada y de color oscuro. La urea en orina se encuentra en proporción normal, mientras mientras que decrece la concentración concentración de sodio (<15 mEq/l). Estos hallazgos hallazgos permiten diferenciar diferenciar la uremia prerrenal de la debida insuficiencia renal. Existen dos grandes mecanismos, mecanismos, a menudo coincidentes en un mismo enfermo, enfermo, de uremia prerrenal, por déficit de oferta de sangre al riñón y por hiperproducción. hiperproducción. La creatinina plasmática plasmática es alta en la uremia prerrenal circulatoria circulatoria y normal en al debido a hiperproducción (sangre retenida en intestino,infartos intestino,infartos o neumonías masivas, etc) En En
la insuficiencia circulatoria: se trata de una retención prerrenal por déficit déficit de oferta hemática al riñón. la insuficiencia cardiaca congestiva. Como uno más de los signos de estasis estasis visceral. Se alcanzan alcanzan valores de 60,80 y hasta 100 mg de urea. En la insuficiencia periférica, en al hipotensión del shock, colapso tóxico o infecciosos, etc. En la deshidratación natropénica (uremia por falta de sal) por vómitos, diarreas, lavadosgástricos, íleo, sudoración profusa, profusa, quemaduras quemaduras extensas, extensas, etc. Responde Responde rápidamente rápidamente a la recloruración del del enfermo. Recuérdese que en los pacientes renales pueden complicar su uremia y aumentar exageradamente la retención ureica por este factor extrarrenal debido a los vómitos. En las infecciones, aunque no existen las circunstancias circunstancias anteriores, anteriores, por el hecho de la proteólisis mística mística aumentada. aumentada. Suele tratarse de cifras moderadas, moderadas, inferiores a los 100 mg. Esto se ve especialmente en la neumonía, en ciertas sepsis, sepsis, a veces en la difteria o escarlatinas escarlatinas graves, en el tifus exantemático, exantemático, etc. En las hemorragias digestivas con retención y desintegración desintegración el intestino de grandes cantidades de sangre. En los cuadros neurológicos agudos: en los ictus por por hemorragia cerebral, en al al intoxicación por óxido de carbono, en traumatismos cerebrales, etc. En el coma diabético: a veces se trata de una verdadera uremia neuropática neuropática por glomerulosclerosis diabética, pero generalmente generalmente se debe a una insuficiencia renal renal funcional con pérdida de la función de ahorro de base base y natropenia subsiguiente. subsiguiente. Interesa conocer conocer este hecho para no diagnosticar el coma urémico urémico por el simple hallazgo de una urea alta y para tratarlo con suero salino, además hacerlo hacerlo con la insulina. Tiroxicosis, debido al catabolismo proteínico excesivo, el cual permite aumentar aumentar el el nitrógeno de urea en diabetes sacarina no controlada, hiperfunción hiperfunción suprarrenocortical suprarrenocortical y algunas enfermedades neoplásicas. neoplásicas. Rechazo de trasplante de un riñón, debido ala reducción reducción de la filtración urinaria. Los atletas después de una actividad extraordinaria, debido a la degradación muscular excesiva. Obstrucción intestinal, intestinal, debido a una pérdida de volumen circulante por el tercer espacio, para líquidos en el intestino.
DISMINUCIÓN DE UREA
La disminución de urea tiene escaso significado clínico, ya que no es una sustancia necesaria para el funcionamiento funcionamiento del organismo. Los valores bajos se encuentran con menos frecuencia que los elevados. Se ha sugerido que una concentración concentración disminuida de nitrógeno de urea puede ser signo de un pronóstico favorable, favorable, debido a que indica una función renal normal con excreción adecuada. adecuada. 3
1. Cualquier trastorno trastorno con aumento de la secreción de hormonas andrógenas o del crecimiento, crecimiento, tal vez debido al efecto anabólico de estas hormonas. 2. Embarazo normal, relacionado con: · Aumento de la circulación renal plasmática y del IFG, secundario a la expansión del volumen plasmático. · El estado anabólico del cuerpo. 3. Insuficiencia hepática hepática grave, en particular la que acompaña ala obstrucción de de la circulación en al vena porta, debido a la incompetencia incompetencia del hígado hígado para convertir convertir el amoniaco en urea. Cabe esperar esperar un incremento concomitante concomitante en la concentración concentración sanguínea sanguínea de amoniaco. 4. Cambios rápidos en la hidratación hidratación como: Rehidratación rápida rápida cuando se han agregado compuestos compuestos no nitrogenados ala solución solución intravenosa. El paciente que ha estado sobrehidratado sobrehidratado y después sometido sometido a una diuresis rápida. La disminución disminución del nitrógeno d e urea que se relaciona con cambios cambios rápidos en al hidratación, hidratación, es en si misma temporal temporal y por lo común sólo tiene interés académico. académico. 5. Es un hallazgo raro que puede ocurrir en: · Ingesta elevada de bebidas o administración endovenosa abundante de líquidos. · Durante El embarazo, por aumento de filtrado glomerular. · En hepatopatias hepatopatias graves, graves, fulminantes, fulminantes, con con insuficiencia de síntesis síntesis de urea. 6. Tambi También én en: · Acromegalia. · Uso de esteroides anabólicos. · Enfermedad celíaca. Aviso clínico: Si un paciente se encuentra confuso, desorientado desorientado o como convulsiones, se debe verificar La urea, ya que su elevación puede explicar los síntomas. En la nefropatía crónica, el BUN se correlaciona mejor con los síntomas de uremia que la creatinina sérica. El valor pánico del BUN es mayor de 100 mg / dl. EN ANÁLISIS CLÍNICOS La urea Es el principal metabolito de las proteínas. Los valores oscilan entre 16 y 45 mg/dl . Se suele expresar como BUN o nitrógeno ureico sanguíneo (urea = BUN x 2,146). Se cuantifica mediante una prueba espectrofotométrica espectrofotométrica cinética. Su aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a aumento del catabolismo proteico, a disminución de la perfusión renal (shock, deshidratación, insuficiencia cardiaca, síndrome hepatorrenal), a insuficiencia renal parenquimatosa aguda o crónica o a insuficiencia renal postrenal por obstrucción. Aunque la urea sanguínea es un parámetro muy utilizado en la valoración de la función renal, es poco sensible, ya que sólo se eleva cuando se ha perdido más de la mitad de la función renal, y no demasiado específica. La urea sanguínea disminuye en situaciones de hemodilución y en la insuficiencia hepática, ya que se sintetiza en el hígado. La uremia es mejor evaluada en conjunto con la creatinina. Tanto en la azotemia prerenal y postrenal el BUN está más elevado que la creatinina. Sin embargo en el 88% de los niños deshidratados por gastroenteritis quienes presentan una acidósis metabólica presentan concentraciones concentraciones de BUN < de 18 mg/dl.En la enfermedad renal progresiva crónica, cerca del 75% del parémquima renal es destruido antes de que se desarrolle la azotemia. El nitrógeno ureico refleja el radio entre la producción de urea y su depuración. El BUN aumentado puede ser debido al aumento o disminución de la producción de excreción. A pesar de que la creatinina es considerada la prueba más específica para evaluar la función renal, se utilizan la mayoría de las veces juntos.
Valores normales: 16-45 mg /dl Preparación del paciente: ayuno de 8 hrs Muestra: Suero o plasma. Metodología: Espectrofotometría Espectrofotometría1
INTERFERENCIAS: Se puede reducir el nivel del BUN si se combina con una dieta con pocas proteínas y abundantes carbohidratos. El BUN normalmente es bajo en niños y mujeres debido a que en su masa muscular es menor que la del varón adulto. Al final del embarazo y durante al lactancia el BUN se eleva ya que aumentan el uso de proteínas. Los ancianos pueden padecer BUN elevado cuando su riñón no concentra al orina de manera adecuada. Al principio del embarazo el BUN puede disminuir también por hidremia fisiológica.
4
Medicamentos: Aumentado: Allopurinol, aminoácidos, anfotericina B, captotril, carbamacepina, cimetidina, aspirina, cisplatino, ciclosporina, furosemida, gentamicina, neomicina, tetraciclina, hidroclorotiazida, hidroclorotiazida, interleukina 2, pentamidina, tertratolol, ketoprofeno. Disminuido: Hormona de crecimiento, prednisona, ácido ascórbico, heparina, amikacina, iodoacetato, parametasona, fenotiazinas. 1
PRINCIPIO DEL METODO
La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftalaldehido en medio ácido originando un complejo coloreado que puede cuantificarse cuantificarse espectrofotométricamente: espectrofotométricamente:
H Urea o ftaldehído Isoindolina
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada. ensayada. SIGNIFICADO CLÍNICO La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción. Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. MATERIAL 4 sistemas vacutainer (aguja y jeringa) 4 ligaduras 4 tubos vacutainer con heparina 1 gradilla 4 tubos de ensaye (13x100ml)
Palillos 2 pipetas 1 3
Pasteur con bulbo pipeta de 100L pipetas de 1ml
EQUIPO Espectrofotómetro Espectrofotómetro o analizador para Cubetas
lecturas a 340 nm.
de 1,0 cm de paso de l uz.
MUESTRAS BIOLÓGICAS Suero o plasma heparinizado: No usar
sales de amonio o fluoruro como anticoagulantes. anticoagulantes. Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilución); Evitar el crecimiento bacteriano, bacteriano, manteniendo el pH < 4. *La urea es estable 5 días a 2-8ºC. REACTIVOS Orina:
R1 R2 UREA CAL
o-Ftalaldehido Solución borato
4,8 mmol/L 87 mmol/L Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL
PRECAUCIONES R2: Corrosivo (C). R35: Provoca quemaduras graves .S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediatamente inmediatamente y abundantemente con agua y acuda a su medico. S30: No echar jamás agua a este producto .S45: En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico (si es posible, muéstrele muéstrele la etiqueta).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. UREA CAL: Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. contaminación. Indicadores de deterioro de los reactivos:
5
- Presencia de partículas y turbidez. - Absorbancia (A) (A) del Blanco a 510 nm > 0,20. 0,20. PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . 510 nm (500-550) Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... .1 cm paso de luz Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. A) Cinética
1. Pipetear en tubos de ensayo: R 1 (mL) Patrón (μL) Muestra (μL)
Blanco 1,0 ---
Patrón 1,0 50 --
Muestra 1,0 -50
2. Mezclar e incubar 1 minuto y añadir: R 2 (mL)
1,0
1,0
1,0
3. Mezclar, incubar a 37ºC y leer las absorbancias a 1 minuto (A 1) y a los 2 minutos (A 2). 4. Calcular el incremento de la absorbancia ΔA= A2 – A1 . ( A) Muestra ( A)Calibrador
50(Conc.calibrador ) mg / dl de Urea en la muestra.
B) Punto final
1. Pipetear en una cubeta: Blanco 1,0 ---
R 1 (mL) Patrón (μL) Muestra (μL)
Patrón 1,0 25 --
Muestra 1,0 -25
2. Mezclar y añadir: R 2 (mL)
1,0
1,0
1,0
3. Mezclar e incubar 15 minutos a 37ºC. 4. Leer la ( A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo. ( A) Muestra 50(Conc.calibrador ) mg / dl de urea en la muestra ( A)Calibrador
10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
.
CONTROL DE CALIDAD Es
conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA
Suero: de 15 a 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L) mmol/L) Orina: de 20 a 35 gr/24 horas Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. 6
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO Rango de medida: Desde el límite de detección detección de 0,70 mg/dL hasta hasta el límite de linealidad de 200 mg/dL. mg/dL. Si la concentración concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con NaCl NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisión:
Media(mg/D) SD CV (%)
Intraserie (n=20) 43,2 145 1,51 1,10 3,49 0,76
Intraserie (n=20) 41,9 147 0,80 2,83 1,92 1,92
Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0.00459 A. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron las siguientes: siguientes: Coeficiente de correlación (r):0.9884 Ecuación de la recta de regresión: y=0.975x+0.6 Las características características del método pueden variar según el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningún caso deben utilizarse sales de amonio o fluoruro. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la urea NOTAS 1. UREA CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con facilidad. 2. El material empleado así como el agua destilada que se utilice deben estar libres de amoniaco y/o sus sales. 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en métodos automáticos. automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores séricos. 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias limpias para su dispensación. 5.SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores.2 RESULTADOS RESULTADOS Y DISCUSIONES DISCUSIONES
Tabla de resultados: 13 sujetos
Sujetos Braulio Braulio Zaraí Jazz Miriam Claudia Silvia Mirna Marian Paco Nayelly Grecia Josue Media Desv esviac iación ión est estánda ándarr C.V. x+σ
x-σ 2σ x + 2σ
Urea mg/dl 25 19.45 23.5449 20.8994 16.9312 4.7619 14.76 17.61 25.71 15.25 23.21 21.42 25.05 19.5074923 5.79 5.7972 727 7617 617 29.718203 25.3047685 13.7102161 11.5945523 31.1020446 7
x - 2σ
7.91293997 58.5224769 78.0299692 -39.0149846
3σ x + 3σ
x - 3σ
Gráfica de linealidad linealidad de determinación de de Urea En esta tabla y gráficos se integraron tanto los resultados obtenidos en sangre como en orina. Como se puede observar en la tabla y en el gráfico los datos se encuentran muy dispersos. Se realizó la gráfica de Levey-Jennings también y ahí se pude ver como uno de los datos incluso rebasa el límite de σ , por lo cual este dato se eliminará 2 σ para tener un dato de referencia de intervalo más confiable. Pero antes se analizaran los resultados de sangre y orina por separado.
Determinación cuantitativa de Urea (Datos completos) 27.66709
22.66709
17.66709
l d / g m a e r U
12.66709
7.66709
2.66709 B ra ra ul io io
B ra ra ul io io
Z ar aí
J az z
M irir ia m
C la ud ia ia
S il vi vi a
M ir na
M ar ia ia n
P ac o
N ay el ly ly
G re ci a
J os ue
Sujetos
Gráfica de Levey-Jennings de determinación de Urea Gráfica de Levey-Jennigs de determinación de Urea 40 UCL
36.8993
CL
19.5075
LCL
2.1157
35
30
25 l d / g m20 a e r U
15
10
5
0 Braul io
Braulio
Zaraí
Jazz
Miriam
Claud ia
Sil vi via
Mir na na
Mari an an
Paco
Nayell y
G re recia
Josue
Sujetos
Tabla de resultados de suero: Gráfica de Urea en sangre (datos completos)
Suero
Sujetos Braulio Zaraí Jazz Miriam Claudia Silvia Mirna Josue Media Desv esviaci iación ón est están ánd dar C.V. x+σ x-σ 2σ
Urea mg/dl 25 23.5449 20.8994 16.9312 4.7619 14.76 17.61 25.05 18.569675 6.785 .7854 4679 6792 36.5405852 25.3551429 11.7842071 13.5709358
27.73309
22.73309
17.73309 l d / g m a e r U 12.73309
7.73309
2.73309 Braulio
Zaraí
Jazz
Mir iam
Claudia
Silvi a
Mir na
Sujetos
8
Josue
32.1406108 4.99873915 20.3564038 38.9260788 -1.78672877
x + 2σ
x - 2σ 3σ x + 3σ
x - 3σ
Gráfica de Urea en Sangre (Datos completos) 41.4275 UCL
38.9261
CL
18.5697
LCL
-1.7867
36.4275 31.4275 26.4275 21.4275
l d / g m16.4275 a e r U
11.4275 6.4275 1.4275 -3.5725 -8.5725 Braul io
Zaraí
Jazz
Miriam
Claudia
Si lvia
Mirna
Josue
Sujetos
En los datos de sangre completos (de todos los sujetos, incluyendo el que se salió de parámetros), se pude observar como el dato del sujeto Claudia, se sale por completo de la tendencia de los datos que van de aproximadamente 14 a 25mg/dl de glucosa, incluso al realizar el gráfico de Levey-Jennings con estos datos, se puede observar como este dato alcanza a llegar al límite de -2 σ σ, razón por la cual se realizará un nuevo gráfico con estos datos eliminando el dato que se sale de los parámetros como se había mencionado anteriormente para obtener datos más precisos.
Tabla de resultados de orina: Orina
Sujetos Braulio Marian Paco Nayelly Grecia Media Desv Desvia iaci ción ón están stánda darr C.V. x+σ
x-σ 2σ x + 2σ
x - 2σ 3σ x + 3σ
x - 3σ
Gráfico de Urea en Orina
Urea mg/dl 19.45 25.71 15.25 23.21 21.42 21.008 3.95 3.9594 9459 5956 56 18.8473894 24.9674596 17.0485404 7.91891912 28.9269191 13.0890809 11.8783787 32.8863787 9.12962132
28.204
26.204
24.204
l 22.204 d / g m a e r U20.204
18.204
16.204
14.204 Brauli o
Marian
Paco
Nayel ly
Grecia
Sujetos
En los datos de urea se puede observar como uno de los datos (el de Paco) se sale de la línea de tendencia, sin embargo en este caso no se eliminará el dato debido a que se cuenta con muy pocos datos en total y en la 9
gráfica de Levey-Jennings se puede puede observar que este dato apenas se sale de de los datos de -1 σ y aún entra dentro de los datos de -2 σ σ , por lo que se podrá decir que entra en los parámetros, sin embargo en la hoja de datos de especificación para los análisis dice que la orina que se debe utilizar para la determinación de orina en sangre debe de ser de una muestra muestra de por lo menos 24hrs 24hrs debido a que lo que se analiza en esta prueba es el sedimento para determinar la presencia de células o cristales (elementos tradicionales), razones por las cuales estos datos no son válidos y por lo cual en la gráfica final no se tomarán en cuenta tampoco. Gráfico de Levey-Jennigs de Urea en Orina (Datos completos) 35.15 UCL
32.89
CL
21.01
LCL
9.13
30.15
25.15 l d / g m20.15 a e r U
15.15
10.15
5.15 1
2
3
4
5
Sujetos
Tabla de resultados corregidos de Urea en sangre:
GRÁFICA DE UREA EN SUERO 25.731
Sangre (Suero)
Sujetos Braulio Zaraí Jazz Miriam Silvia Mirna Josue Media Desv Desvia iaci ción ón están stánda darr CV X + 1σ
X - 1σ 2σ X + 2σ
X - 2σ 3σ X + 3σ
X - 3σ
Urea mg/dl 25 23.5449 20.8994 16.9312 14.76 17.61 25.05 20.5422143 4.01 4.0174 7466 6624 24 19.5571236 24.5596805 16.5247481 8.03493247 28.5771468 12.5072818 12.0523987 32.594613 8.48981558
23.731
21.731 L d / g m19.731 A E R U
17.731
15.731
13.731 Braulio
Zaraí
Jazz
Mi ri am
Silvia
Mi rna
Josue
SUJETOS
10
Cálculos (ejemplos): MUES MUESTR TRA A PATRÓN BRAULIO
Urea
ABSO ABSORB RBAN ANCI CIA A (1MIN (1MIN)) 0.312 0.572
0.009 0.018
ABSO ABSORB RBAN ANCI CIA A (2MIN (2MIN)) 0.330 0.581
DIFERENCIA DE A ( Δ A) 0.018 0.009
50 25mg / dl
Como se pude observar en la gráfica de linealidad algunos datos varían, sin embargo en la gráfica de Levey Jennings se pude observar como todos los datos entran en el rango de ± 2σ y cumplen con las reglas de Schewart para la gráfica de control control de calidad de Levey Levey Jennings, por lo que nuestro límite de confianza en el 12.51 – 28.58 28.58 ± 19.56% intervalo de ± 2σ al 95% de confianza sería de 12.51
GRÁFICA DE LEVEY JENNINGS DE UREA EN SUERO 38.856
33.856
UCL
33.0566
CL
20.5422
LCL
8.0278
28.856
L 23.856 d / g m A E R U 18.856
13.856
8.856
3.856 1
2
3
4
5
6
7
SUJETOS
Comparación de datos datos con la t de student:
H 0 mg/dl 0 = 15 – 45 mg/dl H 1 = 12.51 – 28.58 ± 19.56% (mg/dl)
Hipótesis Nula: H 0 = H 1 Hipótesis Alterna: H 0 ≠ H 1
Aplicación:
= 20.54 = n–1 =7 –1 =6 σ = 4.017 del inserto ( ) = 30 υ
t
x
n
20.54 30 4.017
5.768527002
6
Despejando: 11
Además sabiendo que la función t de Student es simétrica respecto respecto al eje x = 0, la probabilidad acumulada a la izquierda de -x es igual a la probabilidad acumulada a la derecha de x: Sustituyendo Sustituyendo en la expresión anterior, nos da el resultado: Donde Donde el valor: valor: 3
Por lo tanto: la probabilidad de que una variable t de Student de 6 grados de libertad deja a la izquierda de -5.77: P (t 6 5.77) Los valores negativos no vienen en la tabla, pero según lo anterior: P (t 6 5.77) 1 P (t 6 5.77) En la tabla encontramos:
Si observamos en la tabla para 6 grados de libertad 5.7685 se encuentra cerca de 0.0005 y si se aplica regla de 3 entonces tenemos que:
5.7685 0.0005 5.9588
4.8403 10 4 0.0004803
Así que:
P (t 5.77) 4.8403 10 4 Por lo tanto:
P (t 5.77) 4.8403 10 4 1 0.0004803 Con lo que obtenemos obtenemos:: P (t 6 5.77) 0.9995 Lo que indica que la probabilidad de que el intervalo del inserto sea igual a la de nuestros datos es del 99.95%, por lo tanto se acepta la hipótesis nula y por lo tanto se aplicara nuestro intervalo para el análisis análisis de los datos el cual como se observó en las tablas de linealidad y sobre todo en la de Levey-Jennings se pude observar como todos los datos entran dentro de nuestro rango en una probabilidad del 95% para 2 σ CONCLUSIONES
En esta práctica se logró hacer la determinación de urea ( la cual es el resultado final del metabolismo de las proteínas) en suero (debido a que si se utiliza la sangre entera, entera, es decir plasma + suero, en estos estos hay una gran diferencia de valores que existe existe entre el suero y los eritrocitos, eritrocitos, por lo que se prefiere el suero suero o en su defecto el plasma para esta determinación) determinación) mediante una reacción colorimétrica colorimétrica en donde la urea presente en las muestras muestras reaccionó reaccionó con el o-ftalaldehido en medio ácido (solución de boratos, que son sales o ésteres de ácido bórico) originando originando así un complejo complejo coloreado coloreado (rosa) (rosa) que se cuantificó cuantificó espectrofotométricamente espectrofotométricamente dando así como producto a la isoindolina, la cual le proporcionó la coloración a la muestra y de esta manera la intensidad del color formado formado por la reacción fue proporcional a la concentración concentración de urea en la muestra ensayada. De esta manera al realizar realizar la lectura en el espectrofotómetro espectrofotómetro logramos logramos obtener las absorbancias absorbancias en el espectro de luz visible visible en verde (que va va de 500 – 560nm y nuestra nuestra lectura fue fue en 510nm) de urea de cada muestra y con ayuda de las fórmulas para los cálculos. También con la práctica se logró observar como para cada análisis se deben realizar los procedimientos adecuadamente adecuadamente y de la forma determinada determinada para cada análisis análisis para que no tengamos tengamos discrepancias discrepancias en nuestros resultados como ocurrió con las muestras de orina. Ya que ninguno de los sujetos a prueba presentaron datos de urea elevada se pueden descartar entonces casos de uremia y por lo tanto de enfermedades renales, renales, insuficiencia insuficiencia cardíaca, hemorragias hemorragias gástricas, gástricas, 12
hipovolemia y obstrucciones obstrucciones renales. En el caso del dato que fue eliminado por su baja concentración concentración de urea (4.7619), (4.7619), no es de de gran importa importanci ncia a clínica clínica ya que la urea urea no es una sustanc sustancia ia necesaria necesaria para para el funcionamiento del organismo y según la literatura se ha sugerido que una concentración disminuida de nitrógeno de urea puede ser signo de un pronóstico favorable, favorable, debido a que indica una función renal normal con excreción adecuada. REFERENCIAS
1
Ballcells, G.A. La clínica y el laboratorio 18ª Edición, Editorial Masson, México, 2001. Fisbach, T.F. Manual de pruebas diagnosticas, 5ª Edición, Editorial McGrawhill interamericana, México, 1997. Govantes, B.J. Dr, Lorenzo, V.P Dr, Manual Normon , 8ª Edición, Editorial laboratorios Normon S.A, Departamento de publicaciones científicas, España, 2007. Koolman, Color Atlas of Biochemistry, 2nd edition © 2005 Thi eme Murray, R.K, Bioquímica de Harper, 14ª Edición, 2ª reimpresión, Editorial el manual moderno, México, 1997. Tietz N. W. Cli nical Guide to Laboratory test, edited by W.B. Saunders Company, third edi tion, United States of America ,2002. Treseler, K.M. Laboratorio clínico y pruebas de diagnostico, 1a Edición, traducida de la 3ª edición en ingles, Editorial el manual moderno, México, 1999. http://bq.unam.mx/~evazquez www.farestaie.com.ar 2 Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437 and 418. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Cli nical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. C linical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. 3 http://es.wikibooks.org/wiki/Tablas_estad%C3%AD http://es.wikibooks.org/wiki/Tablas_estad%C3%ADsticas/Distribuci%C3%B3n_t_de_S sticas/Distribuci%C3%B3n_t_de_Student tudent
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