UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA E.A.P INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
EVALUACIÓN DE ACEITE ACEITE ESENCIAL DEL ³EXTRACCIÓN Y EVALUACIÓN FRUTO DE CHOLOQUE ( Sapindus Saponaria )´
PROYECTO DE TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
AUTOR:
MORENO GONZÁLEZ ALEX SUYÓ N SUYÓ N MARTÍNEZ JUA N
ASESOR: -----------------------------------------------------------------------------------------------------
NUEVO CHIMBOTE ± PERÚ 2011
I.-DATOS GENERALES 1.-GENERALIDADES 1.1.- TITULO DEL PROYECTO ³EXTR ACCI ACCIÓ N Y EVALUACIÓ N DE ACEITE ESENCIAL DEL FR UTO DE CHOLOQU OLOQUE (Sapindus Saponaria)´ Saponaria )´
1.2.-PERSONAL DE INVESTIGACIÓN y
Autor:
y
Moreno Gonzales Alex Suyón Suyón Martínez Juan
Asesor -------------------------------------------------------------------------
1.3.-TIPO DE INVESTIGACIÓN
y
Experimental ± A plicada
1.4.- LUGAR DE EJECUCIÓN DE LA INVESTIGACIÓN
Departamento :
Ancash
Provincia
:
Del Santa
Distrito
:
Nu Nuevo Chimbote
1.4.1.-Diseño de Contrastación De la Investigación:
y
y
Laboratorio de Investigación de Productos Agroindustriales de la Escuela de Agroindustrias de la U NS. Biblioteca Central y Especializada
de la U NS.
1.5.-CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES:
MESES
ACTIVIDADES NOVIEMBRE
DICIEMBRE
ENERO MAYO JUNIO JULIO AGOSTO
SETIEMBRE
OCTUBRE
ELABORACIÓN DEL PROYECTO PRESENTACIÓN Y APROBACIÓN PRUEBAS PRELIMINARES PRUEBAS DEFINITIVAS PROCESAMIENTO DE DATOS ELABORACIÓN DEL INFORME FINAL PRESENTACIÓN DEL INFORME
1.6.-RECURSOS: y
Recursos Humanos:
Alumnos del VII Ciclo ; Moreno Gonzales Alex Suyón Martínez Juan Asesor de Tesis : --------------------------------------------Recursos Materiales:
y
Se utilizara los f ru tos extraídos de la ciudad de Chimbote y de san Jacinto. 1.7.-PRESUPUESTO DEL PROYECTO
NOVIEMBRE
1.6.-RECURSOS: y
Recursos Humanos:
Alumnos del VII Ciclo ; Moreno Gonzales Alex Suyón Martínez Juan Asesor de Tesis : --------------------------------------------Recursos Materiales:
y
Se utilizara los f ru tos extraídos de la ciudad de Chimbote y de san Jacinto. 1.7.-PRESUPUESTO DEL PROYECTO
CODIGO
PARTIDA
SUB-TOTAL (S/.)
5
GASTOS CORRIENTES
5.3 5.3.11
BIENES Y SERVICIOS A plicaciones directas
3218.00
5.3.11.20
Viáticos y Asignaciones
250.00
5.3.11.27
Servicios no Personales
250.00
5.3.11.30
Bienes de Consumo
5.3.11.32
Pasajes
878.00 300.00
5.3.11.33
Servicios de consultoría
280.00
5.3.11.37
Alquiler de Bienes
300.00
5.3.11.39
Otros servicios de terceros
960.00
5.4
OTROS GASTOS CORRIENTES
5.4.11.13
Gastos variables y ocasionales
y gastos de transporte
TOTAL (S/.)
1.8.-FINANCIAMIENTO
Sera f inanciado por recursos propios.
TOTAL (S/.)
3218.00
300.00 300.00 3518.00
II.- PLAN DE INVESTIGACIÓN
2.1.-ANTECEDENTES: Según José Sánchez Buitrago (2008 ), a partir de otras investigaciones se ha determinado que de la semilla del f r uto Sapindus Saponarias se puede extraer aceite comestibles con rendimientos cercanos al 5.6%. Este aceite, por contener un alto porcentaje de ácidos grasos insaturados, su perior al de los aceites del mercado, y por contener omega 3,6 y 9, es considerado saludable. Así mismo, de la pulpa del f r uto se puede extraer goma con rendimientos cercanos al 45%, aunque debido a su alto contenidos de taninos esta goma no puede ser usada en las industrias alimentarias. Según López (2005), los aceites esenciales se f orman en las partes verdes (con clorof ilas) del vegetal y al crecer la planta son transportadas a otros tejidos, en concreto a los brotes en f lor . Se desconoce la f unción exacta de un aceite esencial en un vegetal; puede ser para atraer los insectos para la polinización o para repeler a los insectos nocivos, o puede ser simplemente un producto metabólico intermedio. Según Juan Castañeda Molina (2005 ), el aumento del f lu jo máximo tiende a elevar el rendimiento de extracción debido a que aumenta la velocidad de extracción, pero al llegar a un punto máximo el rendimiento disminuye, debido a que el tiempo de contacto resulta ser muy pequeño. Según José Sánchez Buitrago (2008) , los eventos f enológicos de de f loración y f r uctif icación en sus dif erentes etapas se destaca bajo la producción de f r utos con respecto a la cantidad de f lores producidas. La determinación del tiempo para cada evento f enológico de árbol de Sapindus Saponarias por número de días se da de la siguiente manera : en f loración 18 días, en f r uctif icación 62 días, cosecha 7 días y é poca crítica 5 días. Según Gonzales Martos Luis (2003) , al destilar una mezcla de dos líquidos inmiscibles, su punto de ebullición será la temperatura a la cual la suma de las presiones de vapor es igual a la atmosférica. Esta temperatura será inf erior al punto de ebullición del componente más volátil. Si uno de los líquidos es agua (destilación por arrastre con vapor de agua ) y si se trabaja a la presión atmosférica, se podrá separar un componente de mayor punto de ebullición que el agua a una temperatura inf erior a 100ºC. Esto es muy importante cuando el compuesto se descompone a su temperatura de ebullición o cerca de ella.
Según Francisco J. Sánchez Castellanos (2006), los f actores que inf luyen en la extracción por vapor saturado son: Presión del vapor. Si la presión del vapor de arrastre es muy alta (máximo 6 psi), presenta hidr ólisis en el aceite disminuyendo su calidad y su rendimiento. Tiempo de secado del material. La materia prima vegetal generan hongos que trans f ieren un olor terroso mohoso al aceite, debido a la f ormación de ácidos grasos; por esto si el material no se procesa pronto ( 3 días) se dispone en literas para su oreo. Tiempo de extracción. Pasado un tiempo ya no sale más aceite y el vapor posterior causa el arrastre por solu bilidad ó emulsión del aceite, presentando una disminución en el rendimiento. Factor de empaquetamiento. Si el material queda muy suelto, el proceso termina muy pronto, presentando un alto consumo energético; si queda muy apretado, el vapor se acanala disminuyendo el rendimiento del aceite, debe de estar entre el 0.15 a 0.25 %
Según Municipalidad Distrital de Nepeña (2010), El clima es de 14ºC a 18ºC En invierno y 18ºC a 27ºC en verano, el clima es cálido y seco y moderadamente lluvioso en é poca de verano Según Municipalidad Distrital de Nuevo Chimbote (2010 ), Su clima es del tipo desértico, cálido, semicalido y sin lluvias. La temperatura varía de acuerdo a la estación del año. En verano entre enero y marzo la temperatura promedio más alta es de 23º C mientras que entre junio y noviembre la temperatura baja es de 17º C. La nu bosidad es alta en el litoral y disminuye a medida que se avanza tierra adentro. La presencia de nieblas en el área llega a restringir la visibilidad a menos de 3 millas especialmente entre las 6 y 8 horas en verano y en casi todo el día en el invierno. Las lluvias no son abundantes según el SENAMHI, en condiciones normales anualmente f luctúan entre 0 y 3 mm, incrementándose di de manera peligrosa con la presencia del f enómeno ³El Niño´. La humedad relativa f luctúa entre 60 a 70 %. La dirección de los vientos son de sur a norte con menor incidencia los provenientes del Sur - Oeste, alcanzando velocidades medias entre 15 a 20 K m. Por hora.
Según Costa-Batllori (2003), la densidad de los aceites varía dependiendo de la especie y del lugar de origen. Según Sangran , (2002 ), La variación genética de las especies regula la composición de los aceites esenciales y otros metabolitos de importancia como son compuestos f enolitos y f lavonoides. Según Keskitalo, (2001), señalo que la variación genética es un f actor ligada al origen geográ f ico ( K eskitalo edit. 2001) Según Armes y singh, (2008): las variables climáticas como temperatura, luminosidad, f recuencia de lluvias y evaporación de los dif erentes estados de desarrollo tienen un ef ecto signif icativo en la producción de biomasa y en consecuencia en la cantidad de aceites esenciales. Según Azcón y Talón, (2000 ), a Temperaturas elevadas (>45ºC) la planta suf re desequilibrios en el metabolismo primario y secundario y en consecuencia disminuye la producción de aceites esenciales. Según Wang y Lincoln (2004), Las plantas que crecen bajo buena iluminación muestran un aumento en el rendimiento de aceites esenciales que las cultivadas bajo sombra. Según (Maffei, Edit. 1994): determino que existe una clara dif erenciación en la composición química debida al origen geográ f ico, por modif icación f enotípica. Según Amzallag, 2005): Observo que las variaciones en la composición del aceite esencial esta inf luidas por el contenido de micronutrientes, el contenido de sodio y la textura del suelo. Según Khazaie, (2008) en regiones con condiciones de sequía, la f recuencia de lluvia y el riego se constituyen como f actores limitantes del rendimiento y composición de aceites esenciales, estos f actores inducen en cambios f isiológicos y metabólicos.
2.2.-JUSTIFICACION E IMPORTANCIA:
Perú es un país que se caracteriza por la diversidad de sus zonas agroecológicas,
sus riquezas naturales y que posee una gran variedad de plantas nativas. Existe inf inidad de plantas a explotar , pero en este caso en particular se basa la investigación en el f r uto de la Sapindius Saponaria -Choloque-, dado que el recurso está disponible y no ha sido investigado sus bondades que posee como espesante, detergente biodegradable por sus contenidos de saponinas y su contenido en aceite esencial. La investigación que se presenta se enf oca a su contenido de aceite esencial debido a la demanda que existe actualmente en nuestro país. Se observó que las exportaciones per uanas han mostrado un crecimiento de 214% desde el año 2002 al 2007 en cuyo año ascienden a12.22 millones de dólares teniendo como principal mercado de destino a EE.UU que signif ico el 74,6 % de las exportaciones. El inter és de extraer aceite esencial del f r uto de choloque radica en su variedad de utilidades como es para dar sabor y aroma al café, té, los vinos y las bebidas alcohólicas. Son los ingredientes básicos en la industria de los per f umes y se utilizan en jabones, desinf ectantes y productos similares. También tienen importancia en la medicina, tanto por su sabor como por su ef ecto calmante del dolor y su valor f isiológico. Los métodos utilizados para su extracción f ueron determinados debido a la disponibilidad de equipos, instr umentos y reactivos necesarios para llevar a cabo la investigación, también por ser métodos conocidos que se adaptan per f ectamente al tipo de producto que se desea investigar , a la vez of reciendo conf iabilidad en los resultados y f acilidades para poder discutirlos al momento de evaluar los resultados.
2.3.-OBJETIVOS
2.3.1.-Objetivos Generales
EXTR AER Y EVALUAR EL RENDIMIENTO DE ACEITE ESENCIAL EN LA SEMILLA Y CASCAR A DEL FR U TO CHOLOQUE EN DIFERENTES ESTADOS DE MADUREZ Y LUGAR DE COSECHA MEDIA NTE MÉTODOS DE ARR ASTRES DE VAPOR Y SOLVENTE.
2.3.2.-Objetivos Específicos y
Determinar los
y
Determinar y
y
rendimientos obtenidos de aceite esencial según su estado de madurez y lugar de procedencia. evaluar el f lu jo de vapor adecuado para la extracción de aceite esencial de la cascara de choloque por el método de arrastre de vapor . Extraer y evaluar el aceite esencial de la semilla y cascara de choloque por método de arrastre por solvente.
2.4.-ENUNCIADO DEL PROBLEMA
¿Cómo
inf luye el lugar de procedencia y estado de madurez del f r uto de choloque (Sapindius Saponaria ) en la evaluación y rendimiento para la extracción de aceite esencial por métodos de arrastre por vapor a dif erentes f lu jos (A y B ) y arrastre por solvente de su cascara y semilla?
2.5.-HIPOTESIS
2.6.-VARIABLES
2.6.1.-VARIABLES INDEPENDIENTES
y
Flu jo másico de vapor de agua
y
Estados de madurez
y
Lugares de procedencias
y
Métodos de extracción del aceite esencial
2.6.2.-VARIABLES DEPENDIENTES
y
Rendimiento de aceite esencial
y
Evaluación de los aceite esencial
III.- METODOLOGÍA 3.1.-DISEÑO EXPERIMENTAL 3.1.2.-DIAGRAMA DE FLUJO EXPERIMENTAL RECEPCIÓ N Y CLAS IFICACIÓ N DE LA MATER IA PR IMA
PESADO
SUMER GIR EN AGUA
LAVADO
EXTR ACCIÓ N MA NUAL DE LA CASCAR A
CASCAR A
SEMILLA PESADO
PESADO
MOLIDO EXTR ACCIÓ N POR DESTILACIÓ N
TAMIZADO PESADO
DECA NTACIÓ N
Suspensión de
Agua acidulada o floral
aceite destilado
EXTR ACCIÓ N POR SOLVENTE
1hora
RECUPER ACIÓ N DEL SOLVENTE
CENTR IFUGACIÓ N
Agua
FILTR ADO AL VACIO
CONCENTR AR EN EVAPOR ADOR ROTATOR IO
PUR IFICACIÓ N
EVALUACIÓ N 84ºC-30 min
EVALUACIÓ N
DESHIDR ATAR
ENFR IAR
5 horas
3.1.3.-EZQUEMA DEL DISEÑO EXPERIMENTAL
El diseño que se va usar para el Método de extracción por corriente de vapor consiste en un diseño de diagrama de cuadrado Latino (DCL), con 2 repeticiones, es decir 16 experimentos, cuyos resultados será el mejor rendimiento de aceite a dif erentes f lu jos másicos de vapor .
L: Lugar de Procedencia E: Estados de madurez (día 50 y 70 después de la f loración) F: Flu jo másico de vapor (5kg/h - 3.5 bar , 7 kg/h -5 bar )
MODELO ESTADÍSTICO:
Modelo Lineal:
El diseño siguiente es para el Método de extracción por solvente la cual es en un diseño de bloque completo azar (DBCA), tanto para cascara y semilla cada uno con 2 repeticiones.
CASCARA
L: Lugar de Procedencia E: Estados de madurez (día 50 y 70 después de la f loración)
MODELO ESTADÍSTICO:
Modelo Lineal:
SEMILLA
L: Lugar de Procedencia E: Estados de madurez (día 50 y 70 después de la f loración)
MODELO ESTADÍSTICO:
Modelo Lineal:
3.1.4.-ANALISIS ESTADÍSTICOS
EXTRACCIÓN CON CORRIENTE DE VAPOR F.V Ef ecto del Bloque latino (L) Ef ecto de la columna (E) Ef ecto del tratamiento o f actor (F) Error Total
G.L
C.M
F0
Ft
Significancia
1 1 1 12 15
Estadios
Lugar de Procedencia
E1
E2
L1
F1
F2
L2
F2
F1
EXTRACCIÓN CON ARRASTRE POR SOLVENTE CASCARA F.V Ef ecto del Bloque (L) Ef ecto del f actor (E) Error Total
G.L
C.M
F0
1 1 5 7
ESTADIOS LUGAR DE PROCEDENCIA
L1 L2
F1 F2
F2 F1
Ft
Significancia
SEMILLA F.V Ef ecto del Bloque (L) Ef ecto del f actor (E) Error Total
G.L
C.M
F0
Ft
Significancia
1 1 5 7
ESTADIOS LUGAR DE PROCEDENCIA
L1 L2
F1 F2
F2 F1
3.2.-MATERIALES Y MÉTODOS
3.2.1 MATERIALES 3.2.1.1.-MATERIA PRIMA Para la materia prima se utilizo el f r uto del Árbol de Choloque (Sapindius Saponaria ) conocido en el Perú como Choloque o Bolilla aparece entre 2, 662 y 2,000 a.C. en La Galgada, en el departamento de Ancash.
La materia prima se extrajo de San Jacinto en el Valle de Nepeña, y Chimbote, en índices de estados de madurez requeridos para la investigación y de tamaño homogéneo para la extracción de aceite esencial. Se trabajara en los Laboratorios de Productos Agroindustriales de la escuela académico prof esional de Ingeniería Agroindustrial de la Universidad Nacional Del Santa.
3.2.1.2.-MATERIALES Y REACTIVOS DE LABORATORIO
3.2.1.2.1.-DESTILACIÓN POR CORRIENTE DE VAPOR MATERIAL
Agua de circulación y baño María
Vasos Pipetas Probeta Micropipetas Vasos de Precipitación Matracez Tu bos de ensayo con tapa roscada Termómetro Frascos oscuros con tapas para muestras Embudo Buchner Alcohol Etanol (a distintas diluciones ) Pera de decantación Ref ractómetro de mesa Picnómetro Decantador
REACTIVOS Agua destilada Acetato de etilo Sulf ato de Sodio anhídrido
Yodo Metálico Etanol
Verde de Bromocresol
Rojo de Metilo (
3.2.1.2.2.-DESTILACIÓN POR SOLVENTE MATERIALES
Molino Universal Manual Embudo Bushner Papel Filtro Tamiz de de 1mm - 4mm Vasos de Precipitación Matraz
Tu bos de ensayo con tapa roscada Frascos oscuros con tapas para muestras
REACTIVOS
Éter de Petr óleo o Hexano
3.2.1.2.3.-INDICE DE YODO MATERIALES
1 Matraz de 500 ml 2 Matraz de 1000 ml 1 Pipeta de 10 ml 2 Pipeta de 25 ml Papel Filtro Whatman Nº 41 H o equivalente
REACTIVOS Acido acético glacial Yoduro de Potasio Cloro 99.8%
Tetraclor uro de carbono Acido Clorhídrico Almidón Solu ble Bicromato de Potasio Tiosulf ato de Sodio Yodo puro Monoclor uro de Yodo Acido Sulf úrico
3.2.1.2.4.-INDICE DE ACIDEZ MATERIALES
1 erlenmeyer de 250 ml 1 vaso precipitación de 50 ml
REACTIVOS Alcohol etílico 95% Isopropanol 99%
Solución indicadora de f enolf taleína, 1% Solución de hidr óxido de sodio Acido Sulf úrico Solución al 0.025% de azul de anilina
3.2.1.2.5.-INDICE DE SAPONIFICACIÓN MATERIALES Bureta
de 25c
Pipeta
Matraz erlenmeyer de 200 ml
REACTIVOS
Solución 0.5 N de acido clorhídrico Hidr óxido de potasio Alcohol etílico 95% Azul alcalino Sulf ato de Sodio anhídrido Solución de f enolf taleína al 1% en alcohol etílico de 95% Solución de azul alcalino 6B al 0.1% en alcohol etílico de 95% Solución alcohólica de Hidr óxido de potasio
3.2.1.3.-EQUIPOS Unidad de Destilación discontinua por corriente de vapor automatizada para la extracción de aceites esenciales de hierbas of iciales modelo UDCA-2/EV. Estuf a Marca Memmert, modelo R -30, Alemania. Ref ractómetro tipo A bbe, USA. Viscosímetro digital, Marca Brook f ield DV-II, USA pH meter digital, Marca Hanna Instr uments, modelo HI 9017K , USA. Centrif uga Angular , Marca Selecta, modelo Nº 143053, España. Muf la, Thermolyne Sy bron, modelo Nº FB1310 M -26 Ty pe 1300, USA. Analítica, Denver Instr uments Company, Balanza modelo AA-200, USA. Cronómetros. Equipo Soxf let. Cromatograf o de Gas Shimadzu modelo 2010: con detector de ionización de f lama (GC-FID), equipado con columna capilar de sílice f undida PAG Restek , de carácter multi polar , con las siguientes dimensiones: (30m de comprimido x 0.25 mm de diámetro interno). Se
usara el helio como gas de arrastre, gas de hidrogeno y aire de todos con alto grado de pureza (99.999%)
3.2.2.-METODOS DE ANÁLISIS 3.2.2.1. ANÁLISIS FÍSICO ± QUÍMICOS 3.2.2.1.1 Metodología para el análisis químico proximal de la materia prima Para el análisis químico proximal de la materia prima se realizara los siguientes procedimientos :
A. Determinación de la Humedad Se determinara mediante el método de secado de estuf a, utilizando el método de la AOAC, 930.15 (1990). B. Determinación de cenizas Se determino utilizando la incineración en muf la, utilizando el método de la AOAC, 7009.14 (1984).
3.2.2.1.2. Métodos de Análisis Físicos del Producto Final. A. Determinación de la Densidad por el Método de la Probeta ( Nch 176/2. of 86 Mod. 1998)
B. Determinación del Índice de Refracción Se determinara con el ref ractómetro manual HA NNA y de mesa ABBY.
C. Determinación del índice de Saponificación Se determinara de acuerdo a las Norma ITI NTEC 209.058
D. Determinación del índice de Yodo. Método Wijs Se determinara de acuerdo a las Norma ITI NTEC 209.008
E. Determinación del índice de Acidez Se determinara de acuerdo a las Norma ITI NTEC 209.005
IV.-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS FERNÁNDEZ FAYA YOLANDA. 1951 . Estudio químico bromatológico del aceite de ³Sapindus saponaria´ (Boliche). J.B.S Braverman 1980 . Bioquímica de los Alimentos. Nueva Edición. Editorial Manual Moderno S.A. Pag. 400 E. BERNDENIDI. 1986 Tecnologia de Aceites y Grasas . Primera Edición original Editorial ALHAMBR A S.A. Pag. 500 Revista de Colombia Forestal Volumen 11 ±pág.:71-81 José Alejandro Sánchez Buitrago ±Diciembre del 2008
ESTUDIO SILVIC ULTUR AL DE LA ESPECIE SAPINDUS SAPONARIA L. (JABONCILLO) COMO BASE PAR A SU APROVECHAMIENTO SILVOI NDUSTR IAL
Revista de la Facultad de ciencias básicas Universidad de Pamplona ± Colombia 2007, Volumen 5. Nº1 Estudio del aceite esencial de la cascara de la naranja dulce (Citr us sinensis, variedad Valenciana cultivada en Labateca ( Norte de Santander , Colombia)
Revista de Colombia Forestal Volumen 12 Henr y A. Flechas ±Diciembre del 2009 I NVESTIGACIÓ N Y DESARROLLO DE TRES PRODUCTOS DEL JABONCILLO (SAPINDUS SAPONARIA L.) COMO BASE PAR A SU I NDUSTR IALIZACIÓ N
TESIS APROVECHAMIENTO DEL R ALEO Y PODA DEL BOSQUE DEL PI NABETE ( ABIES GUATEMALENSIS R HEDER ), PAR A LA EXTR ACCIÓ N Y CAR ACTER IZACIÓ N DEL ACEITE ESENCIAL A NIVEL PLA NTA PILOTO Y SU ESCALONAMIENTO I NDUSTR IAL, PAR A ELABOR ACIÓ N U N PRODUCTO DE LIMPIEZA Y U NA ESENCIA Autor : Juan Carlos Castañeda Molina ±Para Titulo Ing. Químico ±Guatemala 2005
³Extracción de aceite esencial de limon(vir us limonum) utilizando destilación discontinua por corrientes de vapor ´ Autor : Bach. Guzman Saldaña Luis Felipe - Bach. Quiliche Arnao Juan Darling
Nuevo chimbote, 2010
³Ensayo de extracción de aceite de semilla de maracuya´ Autor : Bach. Pablo Genaro Jimenez Ventura
Lima,1972
II Segundo Congreso Internacional De Plantas Medicinales y Aromáticas Extracción De Aceites Esenciales -Experiencia Colombiana Francisco J. Sánchez Castellanos Universidad Nacional de Colombia . Bogotá D.C.-2006
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira NORMA ³Instituto de investigación Tecnológica industrial y de normas técnicas ´ITI NTEC
Lima - Perú Fertilización orgánica e inorgánica en la producción y calidad de aceites esenciales en manzanilla , menta y tomillo´ ³
http://www. biblio.colpos.mx:8080/jspui/bitstream/10521/107/1/Juarez_Rosete_ CR_ DC _Ed af ologia_ 2010. pdf Cecilia Rocio Juárez Rosete
Montecillo, Texcoco, Edo. De México 2010 Tesis Pag 10 - 13