V. UJI TETRAZOLI TETRAZOLIUM UM A. Pend Pendah ahul ulua uan n 1. Latar atar Bel Belak akan ang. g. Salah satu metode yang digunakan untuk menduga kualitas benih
adalah adalah uji tetrazo tetrazoliu lium. m. Uji tetrazo tetrazoliu lium m bertuj bertujuan uan dalam dalam mengak mengaktif tifkan kan sel/jaringan benih dan membedakan antara sel atau jaringan yang hidup atau mati. Uji tersebut sangat cepat dan tepat apabila diaplikasikan pada benih yang yang mengalami dormansi dan mengalami pemasakan lanjutan (after ripening . . !engujian benih dengan tetrazolium merupakan salah satu uji yang efek efekti tif. f. Uji Uji tetra tetrazo zoli lium um mema memanf nfaat aatka kan n prin prinsip sip dehi dehidr drog ogen enase ase yang yang merupakan group enzim metabolism pada sel hidup" yang mana mudah diamati perubahan #arnanya. Selain uji $%" uji hydrogen peroksida (& '' juga merupakan uji yang efektif. Uji ini merupakan uji )iabilitas yang lain" yang membentuk transisi menjadi pengujian kecambah. Uji tetr tetrazo azoli lium um juga juga dise disebu butt uji uji biok biokhe hemi miss beni benih h dan dan uji uji cepa cepatt )iabilitas. *isebut uji biokhemis karena uji tetrazolium mendeteksi adanya proses biokimia yang berlangsung di dalam sel+sel benih khususnya sel+sel embrio. *isebut uji cepat )iabilitas karena indikasi yang diperoleh dari pengujian tetrazolium bukan berupa per#ujudan kecambah" melainkan pola+pola pe#arnaan pada embrio yang akan terbentuk dalam beberapa saat saat saja saja setel setelah ah diter diterap apka kan" n" sehin sehingg ggaa #akt #aktu u yang yang dipe diperlu rluka kan n untu untuk k pengujian tetrazolium tidak sepanjang #aktu yang diperlukan untuk pengujian yang indikasinya berupa kecambah yang memerlukan #aktu berhari+hari. ,lorida/bromida yang larut dalam air digunakan untuk mengindikasi adanya sel+sel yang hidup. Bila indikator diimbibisi oleh benih ke dalam sel+sel benih yang hidup dengan bantuan enzim dehidrogenase akan terjadi proses reduksi sehingga terbentuk zat yang disebut trifenil formazan" suatu endapan yang ber#arna merah. !ada sel+ sel yang mati tidak terjadi reduksi dan tidak terbentu trifenil formazan sehingga #arnanya tetap. -danya pola+pola #arna merah pada bagian+
56
57
bagian penting pada embrio benih mengindikasikan bah#a benih mampu menumbuhkan embrio menjadi kecambah yang normal. ,eguna ,egunaan an uji tetrazol tetrazolium ium cukup cukup banyak banyak yaitu yaitu untuk untuk menget mengetahu ahuii )iabilitas benih yang segera akan ditanam" untuk mengetahui )iabilitas benih dorman" untuk mengetahui hidup atau matinya benih segar tidak tumbuh dalam pengujian daya berkecambah benih. Uji tetrazolium sebagai uji )igor bisa dilakukan" dengan cara membuat penilaian benih lebih ketat untuk katagori benih )igor diantar benih )iabel.etode ini dapat dilakukan dengan dengan cepat. *alam metode metode ini benih tidak dikecambahkan dikecambahkan tetapi hanya dirend direndam am dengan dengan larutan larutan tetra tetra zolium zolium selama selama satu jam dan kemudi kemudian an dinilai embrionya. !rinsip dari metode ini adalah terjadi pengecatan bagian embrio" sebagai hasil oksidasi larutan tetrazolium. sehingga bagian embrio yang hidup akan ber#arna merah sedangkan yang mati atau cacat akan ber#arna putih. '. $uju $ujuan an !rak !raktik tikum um.. $ujuan dari praktikum acara tentang Uji $etrazolium adalah untuk menguji )iabilitas benih secara cepat dan tidak langsung.
58
B. Tinja Tinjauan uan Pusata Pusataka. ka. Ujii te Uj tetra trazo zoli lium um ju juga ga di diseb sebut ut uj ujii bi biok okhe hemi miss be beni nih h da dan n uj ujii ce cepa patt
)iabilitas. *isebut uji biokhemis karena uji tetrazolium mendeteksi adanya proses biokimia yang berlangsung di dalam sel+sel benih khususnya sel+sel embrio. emb rio. *is *isebu ebutt uji cep cepat at )ia )iabil bilitas itas kar karena ena ind indiks iksii yan yang g dip dipero eroleh leh dari pengujian tetrazolium bukan berupa per#ujudan kecambah" melainkan pola+ pola pe#arnaan pada embrio" sehingga #aktu yang diperlukan untuk pengujian tetrazolium tidak sepanjang #aktu yang diperlukan untuk pengujian yang indikasinya berupa kecambah. ,egunaan uji tetrazolium cukup banyak 0 untuk mengetahui )iabilitas benih yang segera akan ditanam" untuk unt uk men mengeta getahui hui )ia )iabil bilitas itas ben benih ih dor dorman man"" unt untuk uk men mengeta getahui hui hid hidup up atau matinya benih segar tidak tumbuh dalam pengujian daya berkecambah benih (&ayat '12. *alam penyimpana penyimpanan n benih" benih" khususnya khususnya benih ortodok ortodok pemilihan pemilihan materi kemasan kemasan sangat penting" penting" agar kadar air benih tidak mengalami mengalami perubahan selama penyimpanan dan )iabilitas benih dapat dipertahankan. !emilihan jenis kemasan yang baik harus disesuaikan dengan tipe benih" suhu dan 3& ruang simpan" kadar air a#al" lama simpan dan tujuan akhir penyimpanan. Spesies Brassica termasuk kelompok benih ortodoks yaitu benih yang memerlukan kadar air rendah agar
)iabilitas
benih
dapat
dipertahankan selama di penyimpanan (4sti '5. Suhu ruang simpan berperan dalam mempertahankan )iabilitas benih selama selama penyim penyimpan panan" an" yang yang diperu diperunga ngaruh ruhii oleh oleh kadar kadar air benih" benih" suhu suhu dan kelemba kelembaban ban nisbi nisbi ruanga ruangan. n. !ada !ada suhu suhu rendah rendah"" respiras respirasii berjala berjalan n lambat lambat diba diband ndin ing g suhu suhu ting tinggi gi.. *alam *alam kond kondisi isi terse tersebu but" t" )iab )iabil ilita itass beni benih h dapa dapatt dipertahankan lebih lama. ,adar air yang aman untuk penyimpanan benih kedelai dalam suhu kamar selama 6+1 bulan adalah tidak lebih dari 117 (Setyastuti '8. Uji iabilitas pada berbagai umr embrio bisa dilakukan dengan uji tetrazolium. $etrazolium adalah zat yang akan ber#arna merah muda pada jaringan yang hidup atau ber+respirasi. &asil pengujian dibedakan atas jaringan yang ber+respirasi dan jaringan yang tidak ber+respirasi dan hasilnya
59
cukup mengejutkan karena embrio yang lebih muda dari 91 hsa ternyata tidak membertikan respon yang positif tehadap tetrazolium (9yung '6. Uji tetrazolium adalah cara biasa yang digunakan untuk menentukan garis berdasarkan dari buku tetrazolium dan buku pengujian )igor benih. Uji tetrazolium sering dipertimbangkan pada sebagian besar uji keakuratan untuk !enentuan a#al dari kerusakan pembekuan di biji jagung. Uji ini memerlukan penganalisa yang terlatih dan tenaga kerja yang lebih dari uji perkecambahan yang biasa" tetapi uji ini menang dalam hasil yang cepat (indy '6.
60
C. Metod Metodolo ologi gi Pakt Paktiku iku!. !. 1. :aktu dan $empat empat !ratik !ratikum um.. !raktikum acara tentang Uji $etrazolium di laksanakan pada hari
,ami ,amiss tangg tanggal al 6 ;o)e ;o)emb mber er '1< '1< puku pukull 18. 18.+ +16 16. . bert bertem empa patt di Laboratorium 4!$" =akulatas !ertanian" Uni)ersitas Sebelas aret. '. -lat -lat dan Baha Bahan n. a. -lat. 1 >ela >elass piala iala.. ' !inset. 2 Silet. < Stop Stop#a #atc tch. h. b. Bahan. 1 Beni Benih h kac kacan ang g ked kedel elai ai (Glycine (Glycine max max ' Beni Benih h ?agu ?agung ng ( Zea mays mays 2 >aram >aram $etraz trazoli olium um.. < ,&'!< dan ;a'&!<.'&'. c. @ara ,e ,erja. 1 embua embuatt larutan larutan penyang penyangga ga dengan dengan cara larutka larutkan n A.5 A.5 g ,& '!< ' 2 < 8
dan 11.56 g ;a '&!<.'&' (masing+masing dalam 1 ml air encampurkan encampurkan < ml ml larutan pertama pertama dan 6 6 ml larutan kedua. kedua. $est $est p& laru larutan tan deng dengan an p& meter. meter. elarutkan elarutkan 1 g garam tetrazolium tetrazolium dalam dalam larutan larutan penyan penyangga. gga. Semen Sementa tara ra itu" itu" meren merenda damm mm beni benih h yang yang akan akan diam diamati ati deng dengan an air
dingin selama 1' jam guna melunakkan benih. 6 Belah Belah benih yang yang telah lunak lunak melalui melalui embryo embryonic nic aCis" aCis" dapat beruap beruap irisan melintang ataupun membujur" membujur" namun irisan jangan sampai terlepas. 5 erenda erendam m benih dalam laruta larutan n garam garam tetrazoli tetrazolium um tersebut tersebut sampai sampai 2 menit. encu encuci ci bers bersih ih dan dan melak melakuk ukan an peng pengam amat atan an"" hitu hitung ng beni benih h yang yang )iabel maupun yang non+)iabel dengan pe#arnaan dari lembaga. A enggambar enggambar struktur struktur benih benih beserta bagian+bagi bagian+bagianny annya. a.
61
". #asil #asil dan dan Pe!$a Pe!$ahas hasan. an. 1. &asi &asill !en !enga gama mata tan. n. $abel 8.1 !engamatan Uji $etrazolium pada Benih ?agung ( Zea ( Zea mays mays dan ,edelai (Glycine (Glycine max. max.
,omoditas
?agung ( Zea Zea mays mays
,edelai (Glycine max max
Ulangan
9ndikasi :arna
1
erah ?ambu
'
erah @erah
2
erah @erah
1
erah @erah
>ambar
62
'
erah @erah
2
erah @erah
Sumber 0 Laporan Sementara. '. !embahasa asan. Uji tetrazolium adalah pengujian terhadap )iabilitas benih secara cepat dan bersifat tidak langsung. Bahan yang digunakan dalam pengujian ini adalah garam tetrazolium. >aram tetrazolium ini merupakan senya#a kimia yang dapat direduksi direduksi secara enzimatis enzimatis didalam jaringan jaringan benih yang masih masih hidup. hidup. 3eduks 3eduksii ini akan akan mengha menghasilk silkan an senya#a senya#a formaz formazan an yang yang ber#arna merah cerah. Sedangkan )iabilitas benih adalah kemampuan benih untuk berkecambah dan tumbuh dalam kondisi lingkungan yang optimum. iabilitas benih diartikan sebagai kemampuan benih untuk tumbuh menja menjadi di kecam kecamba bah. h. 9stil 9stilah ah lain lain untu untuk k )iab )iabili ilitas tas beni benih h adal adalah ah daya daya kecamb kecambah ah benih" benih" persent persentase ase kecamb kecambah ah benih benih atau daya daya tumbuh tumbuh benih. benih. !erkecambah !erkecambahan an benih mempunyai mempunyai hubungan hubungan erat dengan dengan )iabilitas )iabilitas benih dan jumlah benih yang berkecambah dari sekumpulan benih merupakan indeks dari )iabilitas benih. !ada praktikum ini" benih hasil dari uji tetrazolium ini adalah pada ulangan 1 benih jagung" benih ber#arna merah jambu setelah direndam
63
selama 2 menit menunjukan bah#a )iabilitas jagung tersebut rendah / daya kecambah dari jagung tersebut lemah. !ada ulangan yang ke ' dan 2 untuk untuk benih benih jagung jagung"" benih benih ber#ar ber#arna na merah merah cerah cerah yang yang berarti berarti bah#a bah#a )iabil )iabilita itass jagung jagung terseb tersebut ut tinggi tinggi / daya daya kecamb kecambah ah dari dari jagung jagung tersebu tersebutt bagus. Lain halnya pada uji tetrazolium menggunakan benih kedelai" hasilnya adalah pada ke+2 ulangan benih kedelai ber#arna merah cerah" yang berarti semua benih kedelai mempunyai )iabilitas yang tinggi dan daya perkecambahan dari benih tersebut juga bagus. Uji tetrazolium merupakan salah satu pengujian )iabilitas benih secara cepat dan tidak langsung. &al ini dikarenakan" uji tersebut dapat dilakukan tanpa mengecambahkan benih terlebih dahulu" tetapi dengan meng menggu guna naka kan n zat zat kimi kimiaa '" 2" 8 Triphenyl Triphenyl Tetrazolium Tetrazolium Kloride Kloride (garam tetr tetraz azol oliu ium m..
eto etode de ini ini
tid tidak lan langsun gsung g
didas idasar ark kan pada ada
pro proses ses
metabo metabolism lismee benih benih serta serta kondis kondisii fisik fisik yang yang merupa merupakan kan indika indikasi si tidak tidak langsung.
64
E. %esi!& %esi!&ula ulan n dan dan 'aan. 'aan. 1. ,esim simpulan. *ari *ari peng pengam amat atan an acar acaraa tent tentan ang g Uji Uji $etraz trazol oliu ium m dapa dapatt di
simpulkan bah#a 0 a. Uji tetrazo tetrazolium lium adalah adalah penguj pengujian ian terhadap terhadap )iabi )iabilita litass benih secara secara cepat dan bersifat tidak langsung. Bahan yang digunakan dalam pengujian ini adalah garam tetrazolium. b. iabilitas iabilitas benih adalah kemampuan benih untuk berkecambah dan tumbuh dalam kondisi lingkungan yang optimum. c. !ada !ada percobaan percobaan ini" ini" iabil iabilitas itas diukur diukur dari dari #arna benih benih yaitu dengan dengan #arnah merah cerah dan merah muda. d. Benih Benih yang memilik memilikii #arna #arna merah merah cerah berarti berarti )iabilit )iabilitasny asnyaa tinggi tinggi.. Sedan edang gkan kan
benih enih
yang ang
mem memilik ilikii
#arn #arnaa
merah erah
muda uda
berar erarti ti
)iabilitasnya lemah. e. !ada !ada benih kedelai kedelai mempuny mempunyai ai )iabilita )iabilitass yang yang tinggi tinggi karena karena #arnany #arnanyaa setelah diuji ber#arna merah cerah. '. Saran. Sebaiknya pada percobaan Uji $etrazolium ini adalah 0 a. *ilakukan *ilakukan pada pada ruangan ruangan dengan dengan cahaya cahaya yang cukup. cukup. ,arena ,arena praktikuan praktikuan sulit membedakan #arna dengan pencahayaan yang kurang. b. *iberikan panduan #arna / indikator #arna pada hasil percobaan uji tetr tetrazo azoli lium um ini. ini. ,aren ,arenaa prak prakti tika kan n bing bingun ung g anta antara ra memb membed edak akan an #arnanya.
65
"A(TAR PU'TA%A
,hairiyah" &ayat '12. D$etrazoliumE si !embeda &idup atau ati. (online. (http://biotek.bppt.go.id/index.php/artikel-sains/!-tetrazolium-si pembeda-hidup-atau-mati"" diakses pada tanggal 1' ;o)ember '1< pukul pembeda-hidup-atau-mati 1.82 :9B. 3ahayu" 4sti dan 4ny :idajati '5 . !engaruh ,emasan" ,ondisi 3uang Simpan dan !eriode Simpan terhadap iabilitas Benih @aisin @aisin "#rassica chinensis $.%. $.%. &urnal 'gronomi 'gronomi.. (28(2 0 1A1F1A6. (online. (http://(esl.(ournal.ipb.ac.id/index.php/(urnalagronomi/article/)ie*+ile/,, /," /," diakses pada tanggal ta nggal 1' ;o)ember pukul 1A.86 :9B !ur#anti" Setyastuti '8. ,ajian Suhu 3uang Simpan $erhadap ,ualitas Benih ,edelai ,edelai &itam *an ,edelai ,edelai ,uning. ,uning. &urnal &urnal lmu 0ertanian. 0ertanian. 11(10 ''+21. (online. (http://agrisci.ugm.ac.id/)ol (http://agrisci.ugm.ac.id/)ol1/n 1/no1kdlaihtm2knng.pdf o1kdlaihtm2knng.pdf " diakses pada tanggal 1' ;o)ember '1< '1< pukul '01< :9B :9B !ahan" 9yung '6. 0anduan '6. 0anduan $engkap $engkap Kelapa 3a*it . Bogor0 !enebar S#adaya. *e)ries" indy L '6. 4ethods '6. 4ethods for dentifying dentifying +rost n(ury in mmature 4aize 3eed . United States @ode0 !roGuest 9nformation -nd Learning @ompany.
