Ana Laporan Glukosa Dalam Darah

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Glukosa Dalam Darah

I. JUDUL PERCOBAAN

: Penentuan Kadar Glukosa Dala Dara!

II. II. "ARI "ARI## TA TANGGA NGGAL L PER PERCO COBA BAAN AN : Mula$ %elesa$ III. TUJUAN PERCOBAAN

: Senin, 24 Oktober 2016, pukul 13.00 : Senin, 24 Oktober 2016, pukul 15.30 :

Menentukan kadar glukosa yang ada pada sampel darah I&. DA%AR TEORI

:

arbohidrat banyak terdapat di alam, diantaranya dalam bentuk pati, kapas, gula pasir, dan kayu. kayu. arbohidrat adalah polihidroksi dari aldehida atau keton. !ama karbohidrat atau "hidrat dari karbon# adalah istilah yang dilontarkan pada masa a$al dipela%arinya kimia karbohidrat. &anyak dari senya$a ini mempunyai bobot molekul kelipatan '(2O, misalnya '6(12O6 dan '5(10O5. arbohidrat digolongkan men%adi monosakarida, disakarida, dan polisakarida. Salah satu )ontoh monosakarida ialah glukosa. *lukosa merupakan senya$a penting di alam karena perannya yang penting dalam proses biologis. *lukosa merupakan molekul paling sederhana hasil hidrolisis dari semua karbohidrat dalam tubuh sebelum proses oksidasi. *lukosa +suatu monosakarida, adalah salah satu karbohidrat terpenting yang digunakan sebagai sumber tenaga bagi he$an dan tumbuhan. *lukosa merupakan salah satu hasil selama -otosintesis dari a$al bagi respirasi. &entuk alami glukosa disebut %uga dekstrosa, terutama dalam industri pangan. *lukosa +' 6(12O6 memiliki berat molekul 10.1, termasuk dalam heksosa yaitu monosakarida yang mengandung enam atom karbon +/ehninger 12. *lukosa merupakan kelompok senya$a karbohidrat sederhana atau monosakarida. i alam, glukosa terdapat dalam buahbuahan dan madu lebah. *lukosa ber-ungsi sebagai sumber energi untuk selsel otak, sel sara-, dan sel darah merah. arah manusia normal mengandung glukosa dalam %umlah atau konsentrasi yang tetap, yaitu antara 0100 mg tiap 100 ml darah. *lukosa darah ini dapat bertambah setelah kita makan makanan sumber karbohidrat, namun setelah kirakira 2 %am setelah makan, %umlah darah akan kembali seperti semula. ada orang yang menderita diabetes melitus, %umlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg100 ml darah. gar gar dapat ber-ungsi se)ara optimal, tubuh hendaknya dapat mempertahankan konsentrasi darah gula +dalam bentuk 1

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Glukosa Dalam Darah

glukosa dalam batasbatas tertentu, yaitu 0120 mgml dalam keadaan puasa. &ila gula darah naik di atas 10 mg100ml, gula akan dikeluarkan melalui urine. Sebaliknya bila gula darah turun hingga 4050 mgml, kita akan merasa gugup, pusing, lemas dan lapar +/estari et al . 2013. alam tubuh manusia, kadar glukosa darah normal adalah 00 mgdl +1 dl7 100 m/. !amun, kadar glukosa darah tersebut tergantung dengan $aktu setelah makan dalam satu %am pertama setelah makan, kadar gula darah meningkat sekitar 130 mgdl darah, lalu menurun setelah 23 %am berikutnya setelah glukosa tersebut digunakan dalam berbagai %aringan. Se%umlah glukosa diubah men%adi men%adi glikogen dan disimpan dalam hati dan otot. &ila glukosa diperlukan untuk energi atau glikogen, kelebihan glukosa akan diubah men%adi lemak. *likogen merupakan sumber energi )adangan yang akan dikon8ersi kembali men%adi glukosa pada saat dibutuhkan lebih banyak energi. Meskipun lemak simpanan dapat %uga men%adi sumber energi )adangan, lemak tidak pernah se)ara langsung dikon8ersi men%adi men%adi glukosa. 9ruktosa dan galaktosa lain yang dihasilkan dari peme)ahan karbohidrat, langsung diangkut ke ke hati yang mengkon8ersinya men%adi glukosa +Suarsana 2010. *lukosa adalah suatu aldoheksosa dan sering disebut dekstrosa, karena mempunyai si-at dapat memutar )ahaya terpolarisasi ke arah kanan. i alam, glukosa terdapat dalam buahbuahan dan madu lebah. arah manusia normal mengandung glukosa dalam %umlah atau konsentrasi tetap, yaitu antara 0 : 100 mg tiap 100 ml darah. *lukosa darah dapat bertambah setelah kita makanmakanan sumber karbohidrat, namun kirakira 2 %am setelah itu, %umlah glukosa darah akan kembali pada keadaan semula. ada penderita diabetes melitus, %umlah glukosa darah lebih besar dari 130 mg per 100 ml darah + oed%iadi, 14. *lukosa merupakan sumber tenaga yang terdapat di manamana dalam biologi. (al itu ter%adi karena glukosa dibentuk dari -omaldehida pada keadaan abiotik, sehingga akan mudah tersedia bagi sistem biokimia primiti-. (al yang lebih penting bagi organisme tingkat atas adalah ke)enderungan glukosa dibandingkan dengan gula heksosa lainnya yang tidak mudah bereaksi se)ara nonspesi-ik dengan gugus amino suatu protein. ;eaksi ini +glikosilasi mereduksi atau bahkan merusak -ungsi berbagai en
2

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA I Penentuan Kadar Glukosa Dalam Darah

*lukosa dapat mereduksi ion kupri men%adi kupro sehingga reaksi ini dapat digunakan sebagai dasar di dalam penentuan glukosa dan dilakukan dengan berbagai metode antara lain= /u-- S)hrool, Munson>alker, /ane?ynon, dan Somogy!elson. Metode Somogy!elson didasarkan pada hasil reduksi ion kupri oleh glukosa +gula reduksi dalam suasana basa dengan arsenomolibdat yang memberikan $arna biru +molybdenium blue. @ntensitas $arna yang terbentuk bergantung pada konsentrasi glukosa. bsorbansi diukur pada pan%ang gelombang ter tentu dengan spektro-otometer. engan menggunakan larutan standar maka konsentrasi glukosa dapat diketahui. Spektro-otometri merupakan metode analisis yang didasarkan pada absorpsi radiasi elektromagnet. 'ahaya terdiri dari radiasi gelombang dengan pan%ang berlainan akan menimbulkan )ahaya yang berlainan sedangkan )ampuran )ahaya dengan pan%ang pan%ang ini akan menyusun )ahaya putih. 'ahaya putih meliputi seluruh spektrum nampak yaitu terdapat pada 40060 mm. Spektro-otometer ini hanya ter%adi bila adanya perpindahan elektron dari tingkat energi yang rendah ke tingkat energi yang lebih tinggi. erpindahan elektron tidak diikuti oleh perubahan arah spin, hal ini dikenal dengan sebutan tereksitasi singlet. rinsip ker%a spektro-otometri berdasarkan (ukum /ambert &eer, bila )ahaya monokromatik melalui suatu media, maka sebagian )ahaya disebut diserap, sebagian dipantulkan, dan sebagian diteruskan +Sabrina 2012. *lukosa darah akan mereduksi ion 'u 2A dalam suasana basa, yang hasil reduksinya akan bereaksi dengan arseno molibdat menghasilkan $arna biru. /arutan ini diukur absorbansi absorbansinya pada pan%ang gelombang maksimum yaitu 660 nm. engan menggunakan /ambert&eer menyatakan= A = k × c× l imana =  = absorbansi +serapan )ahaya k = koe-isien ekstinksi molar larutan l = tebal ku8et ) = konsentrasi sampel &erdasarkan hukum /ambert&eer, serapan )ahaya berbanding lurus dengan konsentrasi. onsentrasi glukosa darah merupakan -aktor yang sangat penting untuk kelan)aran ker%a tubuh. adar normal glukosa dalam darah adalah 00 mg100 m/.

3


eadaan dimana kadar glukosa berada diba$ah 00 mg 100 m/ disebut hipoglisemia, sedangkan diatas 0 mg 100 m/ disebut hiperglisemia. Metode pemeriksaan darah meliputi metode induksi en
4


3 enggunaan Obat adar glukosa darah %uga dapat dipengaruhi oleh penggunaan obat hipoglikemia oral maupun dengan insulin. Mekanisme ker%a obat dalam menurunkan kadar glukosa darah antara lain dengan merangsang kelen%ar pankreas untuk meningkatkan produksi insulin, menurunkan produksi glukosa dalam hepar, menghambat pen)ernaan karbohidrat sehingga dapat mengurangi absorpsi glukosa dan merangsang re)eptor. @nsulin yang diberikan lebih dini dan lebih agresimenun%ukkan hasil klinis yang lebih baik terutama berkaitan dengan masalah glukotoksisitas yang ditun%ukan dengan adanya perbaikan -ungsi sel beta pankreas. 4 Stress Stress dapat meningkatkan kandungan glukosa darah karena stress menstimulus organ endokrin untuk mengeluarkan ephine-rin, ephine-rin mempunyai e-ek yang sangat kuat dalam menyebabkan timbulnya proses glikoneogenesis di dalam hati sehingga akan melepaskan se%umlah besar glukosa ke dalam darah dalam beberapa menit +*uyton and (all, 200. (al ini yang menyebabkan peningkatan kadar glukosa darah pada saat stress atau tegang. enyakit ini hanya dapat dikendalikan sa%a tanpa bisa diobati dan komplikasi yang ditimbulkan %uga sangat besar seperti penyakit %antung, stroke, dis-ungsi ereksi, gagal gin%al dan kerusakan sistem syara-. iabetes ter%adi %ika tubuh tidak menghasilkan insulin yang )ukup untuk mempertahankan kadar gula darah yang normal atau %ika sel tidak memberikan respon yang tepat terhadap insulin. iabetes tipe 1 adalah diabetes yang bergantung pada insulin dimana tubuh kekurangan hormon insulin, dikenal dengan istilah @nsulin ependent iabetes Mellitus +@M. (al ini disebabkan hilangnya sel beta penghasil insulin pada pulaupulau langerhans pankreas. iabetes tipe 1 banyak ditemukan pada balita, anak anak, dan rema%a +Munadi dan rdinata 200. Sedangkan diabetes tipe 2 ter%adi %ika hormon insulin dalam tubuh tidak dapat ber-ungsi dengan semestinya, dikenal dengan istilah !on@nsulin ependent iabetes Mellitus +!@M. (al ini dikarenakan berbagai kemungkinan seperti ke)a)atan dalam produksi insulin, resistensi terhadap insulin atau berkurangnya respon sell dan %aringan tubuh terhadap insulin yang ditandai dengan meningkatnya kadar insulin di dalam darah +dnan et al . 2013.. edua %enis diabetes ini mengakibatkan terlalu banyaknya glukosa yang terdapat dalam tubuh. 5


roses sintesis glikogen dari glukosa disebut glikogenesis, Se)ara garis besar proses pembentukan glikogen sebagai berikut. Bahap pertama adalah pembentukan glukosa6-os-at dari glukosa, dengan bantuan en
Spektronik 20

1 set

Sentri-uge

2 buah

Babung reaksi

 buah

;ak tabung

1 buah

enangas air

1 buah

*elas ukur 10 m/

1 buah

ipet 8olume

1 buah

*elas kimia

1 buah

/abu ukur 10 m/

1 buah

ipet tetes

5 buah

Ba!an :

Sampel darah

6


/arutan &a+O(2 0,3 ! /arutan 'ualkalis /arutan EnSO 4.(2O 5F /arutan standar glukosa ereaksi arseno molibdat /arutan +!(42SO4

&I. ALUR KERJA: '. De(rotenas$ )$ltrat Dara!

1 ml darah Dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge yang telah berisi 3 ml aquades Dicampur dengan baik menggunakan pengaduk Ditambah 1 ml Ba(O!2 "#3 $ Ditambah 2 ml %n&O4'2O Ditambah 2 ml ($4!2&O4 Didiamkan selama 15 menit Disentrifuge selama 15 menit 35"" rpm Didekantasi dan disaring

*iltrat

)esidu

Diambil 1 ml Ditambah 15 tetes reagen Biuret +arna larutan




*. Penentuan Kadar Glukosa dala Dara!

1 ml ,ltrat darah bebas pr-tein Dimasukkan dalam tabung reaksi Ditambah 2 ml pereaksi .u alkalis Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam air dingin s Ditambah 5 tetes pereaksi arsen-m-libdat Diaduk hingga merata Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

bs-rbansi sampel

+. Penentuan Kadar %tandar

1 ml larutan gluk-sa1 k-nsentrasi ml larutan gluk-sa "#3 mgml 1 k-nsentrasi ml larutan gluk-sa "#5 mgml 1 k-nsentrasi ml larutan gluk-sa "# mgml k-nsentrasi "# m

Dimasukkan dalam tabung reaksi Ditambah "#5 pereaksi .u alkalis Dimasukkan dalam air mendidih selama 5 menit kemudian dimasukkan dalam air ,ngin Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat Diaduk hingga merata Dibaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm 2 ml aquades Dimasukkan dalam tabung reaksi bs-rbansi Ditambah 1 ml pereaksi .u alkalisbs-rbansi

bs-rbansi

bs-rbansi

Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam air dingin s Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat ,. Penentuan A-sor-ans$ Larutan Blanko

Diaduk hingga merata

Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm 

bs-rbansi blank-





&II.

"A%IL PENGAMATAN

No.

Prosedur Pero-aan

Per

1.

"as$l Pen/aatan %e-elu

eproten asi 9iltrat arah

− arah= larutan

1 ml darah

− arah A aGuades=  adar glukosa normal larutan ber$rna

dalam darah antara

darah dengan

pekat

merah bata

0100 mgm/

reagen &iuret

larutan tidak

Ditambah 2 ml ($4!2&O4

ber$arna − +!(42SO4= larutan

Didiamkan selama 15 menit

tidak ber$arna − Guades= tidak

Disentrifuge selama 15 menit 35"" rpm Didekantasi dan disaring

ber$arna

*iltrat

engu%ian -iltrat

ber$arna merah

tidak ber$arna − EnSO4.(2O=

Ditambah 2 ml %n&O4'2O

Kes$(ulan

%esuda!

Dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge yang telah berisi 3 ml aquades − &a+O( − itambah 2= larutan Dicampur dengan baik menggunakan pengaduk Ditambah 1 ml Ba(O!2 "#3 $

Du/aan 0 Reaks$

)esidu

Diambil 1 ml

menghasilkan

&a+O(2 A

-iltrat darah bebas

EnSO4.(2O A

protein

+!(42SO4= larutan ber$arna merah bata +A

− isentri-uge= terdapat dua lapisan. 9iltrat= )airan tidak ber$arna ;esidu= endapan

Ditambah 15 tetes reagen Biuret

merah

− 9iltrat ditambah

+arna larutan

15 tetes reagen &iuret= larutan

1"


tidak ber$arna 2.

enentuan adar *lukosa dalam arah

sedikit keruh. − 9iltrat darah bebas − 9iltrat darah

protein= )airan 1 ml ,ltrat darah bebas pr-tein tidak ber$arna

Dimasukkan dalam tabung reaksi

ditambah 'u alkalis= larutan

− 'u alkalis= larutan

 'u2A A HsMo 12O4I3 J − bsorbansi darah 'u2A A HsMo12O4I3  *lukosa akan mereduksi ion 'u2A

ber$arna biru yang menghasilkan − ipanaskan= ber$arna biru − ereaksi Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam dingin selama 1" hasil menit 'u2O dari larutanair ber$arna

Ditambah 2 ml pereaksi .u alkalis

Ditambah 5 tetes pereaksi arsen-m-libdat

arsenomolibdat=

reduksi yang bereaksi


biru muda larutan ber$arna − itambah pereaksi

Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

kuning

arsenomolibdat=

arsenomolibdat dan

larutan ber$arna

menghasilkan $arna

biru muda

bebas protein sebesar 0,546

− adar glukosa darah sebesar 0,6 mgml

dengan

hi%au  ersamaan reaksi = glukosa A 2'u2A J

bs-rbansi sampel

asam glukonat A 'u2O A 3(2O

11


tidak ber$arna sedikit keruh. 2.

enentuan adar *lukosa dalam arah

− 9iltrat darah bebas − 9iltrat darah

protein= )airan 1 ml ,ltrat darah bebas pr-tein tidak ber$arna − 'u alkalis= larutan

Dimasukkan dalam tabung reaksi

ditambah 'u alkalis= larutan

 'u2A A HsMo 12O4I3 J − bsorbansi darah 'u2A A HsMo12O4I3  *lukosa akan mereduksi ion 'u2A

ber$arna biru yang menghasilkan − ipanaskan= ber$arna biru − ereaksi Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam dingin selama 1" hasil menit 'u2O dari larutanair ber$arna


Ditambah 5 tetes pereaksi arsen-m-libdat

arsenomolibdat=

reduksi yang bereaksi


biru muda larutan ber$arna − itambah pereaksi

Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

kuning

arsenomolibdat=

arsenomolibdat dan

larutan ber$arna

menghasilkan $arna

biru muda

bebas protein sebesar 0,546 − adar glukosa darah sebesar 0,6 mgml

dengan

hi%au  ersamaan reaksi = glukosa A 2'u2A J asam glukonat A

bs-rbansi sampel

'u2O A 3(2O

11


3.

enentuan adar Standar

− /arutan glukosa

− /arutan glukosa

− Semakin besar

konsentrasi 0,

konsentrasi 0, C

konsentrasi maka

mgml= larutan

0, C 0,5 C 0,3

semakin besar

tidak ber$arna

mgml ditambah

nilai absorbansi

1 ml larutan gluk-sa dengan k-nsentrasi "#3  "#5  "#5  "# mgml

Dimasukkan dalam tabung reaksi Ditambah "#5 ml pereaksi .u alkalis

− /arutan glukosa konsentrasi 0,

'u alkalis=

gra-iknya

− &erdasarkan gra-ik

larutan ber$arna

mgml= larutan Dimasukkan dalam air mendidih selama 5 menit kemudian dimasukkan dalam air dingin selama 5 menit biru − ipanaskan dalam tidak ber$arna A 2'u2A+aG A 5O( Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat /arutan glukosa − air mendidih= Diaduk hingga merata +aG J konsentrasi 0,5 − /arutan Dibaca abs-rbansinya pada /066" nm mgml= larutan

konsentrasi 0,

tidak ber$arna

mgml= larutan

− /arutan glukosa bs-rbansi

+A

mgml= larutan

− /arutan

tidak ber$arna

− 'u alkalis= larutan ber$arna biru

− ereaksi

pada kur8a standar diperoleh persamaan regresi y 7 0,33 K A 0,322 ; 2 7 0,

)oklat kehi%auan

konsentrasi 0,3

yang terbentuk

konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan

A 'u2O+s A 3(2O+l

+ arsenomolibdat= − /arutan larutan ber$arna

konsentrasi 0,5

kuning

mgml= larutan

12


3.

enentuan adar Standar

− /arutan glukosa

− /arutan glukosa

− Semakin besar

konsentrasi 0,

konsentrasi 0, C

konsentrasi maka

mgml= larutan

0, C 0,5 C 0,3

semakin besar

mgml ditambah

nilai absorbansi

1 ml larutan gluk-sa dengan k-nsentrasi "#3  "#5  "#5  "# mgml

Dimasukkan dalam tabung reaksi Ditambah "#5 ml pereaksi .u alkalis

tidak ber$arna /arutan glukosa − konsentrasi 0,

'u alkalis=

gra-iknya

− &erdasarkan gra-ik

larutan ber$arna

mgml= larutan Dimasukkan dalam air mendidih selama 5 menit kemudian dimasukkan dalam air dingin selama 5 menit biru ipanaskan dalam − tidak ber$arna A 2'u2A+aG A 5O( Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat − /arutan glukosa air mendidih= Diaduk hingga merata +aG J /arutan − konsentrasi 0,5 Dibaca abs-rbansinya pada /066" nm mgml= larutan

konsentrasi 0,

tidak ber$arna

mgml= larutan

− /arutan glukosa bs-rbansi

+A

mgml= larutan

− /arutan

tidak ber$arna

pada kur8a standar diperoleh persamaan regresi y 7 0,33 K A 0,322 ; 2 7 0,

)oklat kehi%auan

konsentrasi 0,3

yang terbentuk

konsentrasi 0,

− 'u alkalis= larutan

mgml= larutan

ber$arna biru ereaksi −

)oklat kehi%auan

A 'u2O+s A 3(2O+l

+ arsenomolibdat= − /arutan larutan ber$arna

konsentrasi 0,5

kuning

mgml= larutan

12


)oklat kehi%auan + − /arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan hi%au

− idinginkan dalam air dingin=

− /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan

− /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan

− /arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan 13


)oklat kehi%auan +

− /arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan hi%au

− idinginkan dalam air dingin=

− /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan

− /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan

− /arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan )oklat kehi%auan ada endapan 13


− /arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan biru ada endapan

− itambah pereaksi arsenomolibdat=

− /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +AA

− /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +A

− /arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan biru kehitaman

− /arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan 14


− /arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan biru ada endapan itambah pereaksi − arsenomolibdat= − /arutan konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +AA /arutan − konsentrasi 0, mgml= larutan biru kehitaman +A

− /arutan konsentrasi 0,5 mgml= larutan biru kehitaman − /arutan konsentrasi 0,3 mgml= larutan 14


biru

− (arga absorbansi= − 0, mgml= 0,6 − 0, mgml= 0,53 − 0,5 mgml= 0,464 − 0,3 mgml= 0,423

4.

enentuan bsorbansi /arutan &lanko

2 ml aquades Dimasukkan dalam tabung reaksi

− Guades= )airan tidak ber$arna − 'u alkalis= larutan ber$arna biru

− rsenomolibdat=


/arutan blanko

/arutan blanko

alkalis= larutan

digunakan sebagai

digunakan sebagai

ber$arna biru

pembanding

pembanding yang

− Guades A 'u

− ipanaskan= larutan ber$arna

ber$arnake dalam Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian larutan dimasukkan biru air dingin selama 1" menit − idinginkan= kuning Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat larutan ber$arna

Diaduk hingga merata Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

merupakan larutan ber$arna biru + dan tidak mengandung glukosa.

biru − rsenomolibdat= larutan ber$arna biru

bs-rbansi blank-

15


biru

− (arga absorbansi= − 0, mgml= 0,6 − 0, mgml= 0,53 − 0,5 mgml= 0,464 − 0,3 mgml= 0,423

4.

enentuan bsorbansi /arutan &lanko

2 ml aquades Dimasukkan dalam tabung reaksi

− Guades= )airan tidak ber$arna − 'u alkalis= larutan ber$arna biru

− Guades A 'u alkalis= larutan ber$arna biru − ipanaskan=

− rsenomolibdat=


/arutan blanko

/arutan blanko

digunakan sebagai

digunakan sebagai

pembanding

pembanding yang merupakan larutan

larutan ber$arna larutan ber$arna Dimasukkan ke dalam air mendidih selama 1" menit kemudian dimasukkan ke dalam biru air dingin selama 1" menit idinginkan= − kuning Ditambah 2 tetes pereaksi arsen-m-libdat larutan ber$arna

Diaduk hingga merata Dibaaca abs-rbansinya pada / 0 66" nm

ber$arna biru + dan tidak mengandung glukosa.

biru − rsenomolibdat= larutan ber$arna biru

bs-rbansi blank-

15


16


16


&III. ANALI%I% PEMBA"A%AN er)obaan Lenentuan adar *lukosa alam arah ini bertu%uan untuk

menentukan kadar glukosa pada sampel darah yang di u%i.. D%i dilakukan dengan menggunakan pereaksi 'ualkalis dan pereaksi arseno molibdat. Sedangakan untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah dapat dilakukan dengan menggunkan u%i spektro-otometer DNNis. De(rote$nas$ 1$ltrat dara! ertama, melakukan perr)obaan deproteinasi pada sampel darah yang diambil. (al tersebut dilakukan untuk mendapatkan sampel darah yang bebas protein, sehingga ketika diu%i dengan spektro-otometer DNNis hasil yang terba)a hanya kompleks glukosa sa%a. /angkah pertama yaitu mengambil sampel darah sebanyak 1 m/, dan dimasukkan dalam tabung sentri-uge yang berisi 3 m/ aGuades. Guades ber-ungsi untuk mengen)erkan darah dan melarutkan albumin dalam darah. lbumin merupakan protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas dan biasanya terdapat dalam serum darah. emudian ditambah dengan 2 m/ EnSO4.(2O 5F dan 2 m/ +!( 42SO4 0,5M. Setelah semua larutan ter)ampur rata, didiamkan selama 15 menit, kemudian disentri-uge selama 15 menit dengan ke)epatan 3500 rpm. 9ungsi penambahan &a +O( yaitu untuk memberikan suasana basa pada larutan


&III. ANALI%I% PEMBA"A%AN er)obaan Lenentuan adar *lukosa alam arah ini bertu%uan untuk

menentukan kadar glukosa pada sampel darah yang di u%i.. D%i dilakukan dengan menggunakan pereaksi 'ualkalis dan pereaksi arseno molibdat. Sedangakan untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah dapat dilakukan dengan menggunkan u%i spektro-otometer DNNis. De(rote$nas$ 1$ltrat dara! ertama, melakukan perr)obaan deproteinasi pada sampel darah yang diambil. (al tersebut dilakukan untuk mendapatkan sampel darah yang bebas protein, sehingga ketika diu%i dengan spektro-otometer DNNis hasil yang terba)a hanya kompleks glukosa sa%a. /angkah pertama yaitu mengambil sampel darah sebanyak 1 m/, dan dimasukkan dalam tabung sentri-uge yang berisi 3 m/ aGuades. Guades ber-ungsi untuk mengen)erkan darah dan melarutkan albumin dalam darah. lbumin merupakan protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas dan biasanya terdapat dalam serum darah. emudian ditambah dengan 2 m/ EnSO4.(2O 5F dan 2 m/ +!( 42SO4 0,5M. Setelah semua larutan ter)ampur rata, didiamkan selama 15 menit, kemudian disentri-uge selama 15 menit dengan ke)epatan 3500 rpm. 9ungsi penambahan &a +O( 2 yaitu untuk memberikan suasana basa pada larutan serta mengendapkan albumin yang terlarut dalam air. enambahan EnSO4.(2O ber-ungsi untuk mengendapkan protein dalam darah, sehingga -iltrat darah bebas protein. EnSO4 bertindak sebagai katalisator untuk memper)epat reaksi albumin oleh &a+O(2. 9ungsi dilakukannya sentri-uge yaitu agar endapan albumin yang terbentuk se)ara sempurna dan larutan tidak ber$arna yang dihasilkan merupakan -iltrat darah yang bebas protein. ?ndapan merah bata yang terbentuk merupakan protein yang terkoagulasi. Dntuk mengu%i -iltrat yang bebas protein, ditambahkan 2 tetes biuret. (asilnya berupa larutan ridak ber$arna dan sedikit keruh, hal ini menun%ukkan bah$a larutan +-iltrat telah bebas dari protein. Penentuan kadar /lukosa dara! ertama, ambil 1 m/ darah yang telah bebas dari protein +dari per)obaan sebelumnya dimasukkan dalam tabung reaksi. emudian ditambahkan dengan 3 m/ pereaksi 'ualkalis dan dipanaskan selama 10 menit, lalu dimasukkan air dingin selama 10. 9ungsi 'ualkalis yaitu sebagai pereduksi glukosa dalam sampel. /arutan dipanaskan bertu%uan untuk memper)epat la%u reaksi, dan dimasukkan air dingin untuk menghentikan la%u reaksi 'ualkalisSetelah itu ditambah dengan pereaksi arsenomolibdat dan diba)a absorbansinya pada  660 nm. . ereaksi arseno molibdat 1


ber-ungsi untuk melarutkan endapan 'u2O. !ilai absorbansi yang diperoleh yaitu 0,546. ari nilai absorbansi, dapat dihitung kadar glukosa dari sampel darah, didapat sebesar 0.6 mgm/ atau 6. mg100 m/. Pe-uatan kur2a standar dan larutan -lanko /angkah pertama yaitu larutan standar diambil dari larutan baku yang mengandung glukosa sebanyak 2 mgm/. emudian larutan dien)erkan dengan )ara pengen)eran bertingkat sehingga diperoleh larutan standar dengan kadar glukosa 0,C 0,C 0,5C 0,3 mgm/. Selan%utnya, masingmasing larutan standar dimasukkan ke tabung reaksi dan ditambahkan dengan 0,5 m/ pereaksi 'ualkalis. Ber%adi perubahan $arna, dari larutan tidak ber$arna men%adi larutan ber$arna biru. enambahan dengan 'ualkalis mengakibatkan ion 'u A akan direduksi oleh glukosa men%adi 'u2A dan mengendap sebagai 'u 2O. Setelah itu semua tabung reaksi dipanaskan selama 10 menit, sampai timbul endapan ber$arna %ingga. *lukosa akan bereaksi dengan 'u2A membentuk senya$a kompleks. emudian larutan didinginkan dan ditambah dengan pereaksi arseno molibdat sehingga $arna larutan berubah men%adi biru +0,3 mgm/, biru kehitaman +0,5 mgm/, biru kehitaman +A +0, mgm/, biru kehitaman +AA +0, mgm/. andungan glukosa dapat dilihat dari tingkat kepekatan $arna larutan. Semakin pekat $arna larutan maka kandungan glukosa semakin besar. emudian semua larutan diu%i dengan spektro-otometer DN 8is sehingga didapat nilai absorbansi sebesar= onsentras

bsorbans

i 0,3 0,5 0, 0,

i 0,423 0,464 0,53 0,6

Grafk Absorbansi 1 f(6! 0"'5 "'336 7 "'32 )8 0 "'

Absorbansi

" "

"'5

1

Konsentrasi

1


ari gra-ik di atas, didapat persamaan garis lurus yang dapat digunakan untuk menentukan kadar glukosa pada sampel darah = y 7 0,33K A 0,322, dengan ; 27 0,3. engan = y 7 nilai absorbansi K 7 konsentrasi glukosa I3. KE%IMPULAN ari per)obaan ini, dapat disimpulkan bah$a kandungan glukosa yang terdapat pada

sampel darah yang diu%i sebesar 6. mg100m/. 3. JA4ABAN PERTAN5AAN 1. Bentukan kadar glukosa darah dalam mg glukosa100m/ darahP Qa$ab = y 7 0,33K A 0,322 dengan y7nilai absorbansi sampel, diperoleh = y 7 0,33K A 0,322 0,546 7 0,33K A 0,322 K 7

0,546−0322 0,33

K 7 0,6 mgm/ %ika dalam 100 m/, kadar glukosa dalam sampel darah sebesar 6. mg100m/.

2. pa -ungsi proses pendidihan pada per)obaan di atasR Qa$ab = roses pendidihan +dimasukkan air mendidih pada per)obaan ini ber-ungsi untuk memper)epat la%u reaksi 'ualkalis dan ber-ungsi untuk menghidrolisis adanya kandungan gula.

3. Qelaskan peranan hormon insulin dalam proses pengaturan kadar gulaP Qa$ab = (ormon insulin berperan pada proses perpindahan glukosa dari darah ke dalam sel tubuh. i dalam sel tubuh, glukosa kemudian dimetabolismekan sehingga menghasilkan kalori +energi. Menurunnya e-ekti-itas hormon insulin mengakibatkan menurun pula kadar glukosa yang masuk ke dalam sel. kibatnya sel tubuh kekurangan glukosa dan berusaha mendapatkan kalori

1


dari peme)ahan lemak. eme)ahan lemak akan menghasilkan benda keton yang dapat mengakibatkan ter%adinya ketoasidosis. 3I. DA)TAR PU%TAKA

dnan M, Mulyati B, @s$oro QB. 2013. (ubungan indeks massa tubuh dengan kadar gula darah penderita diabetes mellitus tipe 2 ra$at %alan di rumah sakit tugure%o semarang. Jurnal Gizi Universitas Muhammadiyah Semarang . 2 +1= 11. (a$ab (M. 2005. Pengantar Biokimia. Malang +@= &ayu Media. /ehninger, . 12. Dasardasar Biokimia. Ber%emahan Maggy Bhena$id%aya. Qakarta = ?rlangga /estari , ur$anto S, aligis S(M. 2013. *ambaran kadar glukosa darah puasa pada mahasis$a angkatan 2011 -akultas kedokteran uni8ersitas sam ratulangi dengan indeks massa tubuh 1,5 22, kgm 2. Jurnal e Biomedik . 1 +2= 14. oed%iadi, . 14. DasarDasar Biokimia. Qakarta +@= D@ ress. Sabrina . 2012. erbandingan metode spektro-otometri DNNis dan 'B +romatogra-i 'air iner%a Binggi pada analisis kadar asam ben
2"


LAMPIRAN A. PER"ITUNGAN

y 7 0,33K A 0,322 dengan y7nilai absorbansi sampel, diperoleh = y 7 0,33K A 0,322 0,546 7 0,33K A 0,322 K 7

0,546−0322 0,33

K 7 0,6 mgm/ %ika dalam 100 m/, kadar glukosa dalam sampel darah sebesar 6. mg100m/. B. DOKUMENTA%I

!o

okumentasi

eterangan

. eprotenasi 9iltrat arah

21


1.

Sampel darah ber$arna merah pekat.

2.

Sampel darah setelah ditambah &a+O(2, EnSO4. (2O dan +!(42SO4 ber$arna merah bata +A.

3.

Setelah disentri-uge selama 15 menit dengan ke)epatan 3500 rpm terbentuk 2 lapisan, yaitu =  9iltrat = larutan tidak 

ber$arna ;esidu = endapan merah +beku

22


4.

9iltrat diambil 1 m/ ditambah dengan 15 tetes reagen biuret larutan tidak ber$arna sedikit keruh yang menun%ukkan bah$a -iltrate darah bebas protein.

1.

enentuan adar *lukosa alam arah 1 m/ -iltrat larutan tidak ber$arna bebas protein dimasukkan dalam tabung reaksi.

2.

itambah dengan 2 m/ 'u alkalis larutan berubah $arna men%adi biru.

23


3.

/arutan dipanaskan dalam air mendidih selama 10 menit larutan ber$arna biru muda.

4.

Setelah dipanaskan dalam air mendidih kemudian didinginkan dengan air dingin selama 10 menit tidak ter%adi perubahan.

5.

itambah dengan 3 tetes arseno molibdat larutan ber$arna biru muda dan di absorbansi pada 7660 nm, hasil absorbansi 0.546

24


1.

enentuan adar Standar 1 m/ larutan glukosa konsentrasi 0,3C0,5C0,C0, mgm/ dimasukkan dalam tabung reaksi.

2.

/arutan standar ditambah dengan 'u alkalislarutan berubah $arna men%adi ber$arna biru muda.

3.

Setelah dipanaskan 5 menit ter%adi perubahan $arna =  0, mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +A  0, mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +  0,5 mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +  0,3 mgm/ = larutan ber$arna hi%au

25


4.

Setelah didinginkan 5 menit ter%adi perubahan $arna =  0, mgm/ = larutan )oklat kehi%auan, ada endapan.  0, mgm/ = larutan )oklat kehi%auan+, ada endapan  0,5 mgm/ = larutan )oklat kehi%auan +, ada endapan. 0,3 mgm/ = larutan ber$arna biru, ada endapan.

5.

itambah dengan 3 tetes arseno molibdat, ter%adi perubahan $arna =  0, mgm/ = larutan biru kehitaman +AA  0, mgm/ = larutan biru kehitaman +A  0,5 mgm/ = larutan biru kehitaman 0,3 mgm/ = larutan ber$arna biru,.

6.

iba)a absorbansinya pada 7660 nm, harga absorbansi =

− 0, mgml= 0,6 − 0, mgml= 0,53 − 0,5 mgml= 0,464 − 0,3 mgml= 0,423

26


enentuan bsorbansi /arutan &lanko 1.

2 m/ aGuades dimasukkan dalam tabung reaksi.

2.

itambah dengan 'u alkalis larutan berubah $arna men%adi biru muda.

3.

Setelah dipanaskan dan didinginkan tidak ter%adi perubahan $arna, larutan tetap ber$arna biru.

4.

Setelah ditambah arseno molibdat larutan ber$arna biru muda.

2

Ana Laporan Glukosa Dalam Darah

Recommend Documents