EXTRACCIÓN DE LIPIDOS DE CEREBRO LIPID EXTRACTION BRAIN Mónica Fernández (2020!"# $aren Manzi%%a (2020&'2# Lina Ni) (2020&# Laboratorio de Bioquímica II, Escuela de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad Pedagógica !ecnológica de Colombia, !un"a# moni$ernande%&'(gmail#com
RES*MEN+ En esta )ráctica de laboratorio, se utili%ó una muestra de cerebro de res )ara la e*tracción de los )rinci)ales lí)idos que com)onen el te"ido cerebral, entre los cuales están el colesterol, colesterol, acilgliceroles, acilgliceroles, glucolí)idos, es$ingolí)idos, es$ingolí)idos, $os$olí)idos $os$olí)idos lecitinas+ los cuales $ueron e*traídos se)arados entre sí )or di$erentes )rocesos, )rinci)almente e*tracción con disolventes, de acuerdo a las di$erencias en sus )ro)ieda )ro)iedades des químicas químicas,, obteni obtenindos ndose e como materia materia )rima )rima )ara )ara el análisis análisis tres e*tractos, e*tractos, el )rimero, rico en colesterol, el segundo e*tracto rico en acilgliceroles acilgliceroles $os$olí)idos, el tercero en glucolí)idos es$ingolí)idos# Una ve% obtenidos, se llevaron a cabo una serie de )ruebas cualitativas )ara el reconocimiento de dic-os lí)idos, de acuerdo a sus )ro)iedades químicas#
Pa%a,ra- c%a.e-/ lí)idos, e*tracción, te"ido cerebral, e*tracto# ABSTRACT+ . sam)le o$ bee$ brain $or e*tracting e*tracting li)ids com)osing com)osing t-e main brain tissue , among /-ic- c-olesterol , aclglcerols , glcoli)ids , s)-ingoli)ids , )-os)-oli)ids and lecit-ins used in t-is lab + /-ic- /ere e*tracted and se)arated b di$$erent )rocesse )rocesses s , )articu )articularl larl solvent e*tract e*traction ion,, accordin according g to di$$eren di$$erences ces in c-emica c-emicall )ro) )ro)er erti ties es , iel ieldi ding ng $eed $eedst stoc oc0 0 $or $or anal anal sis sis t-re t-ree e e*tr e*trac acts ts , t-e t-e $irs $irstt , -ig-igc-olesterol , t-e second e*tract ric- in aclglcerols and )-os)-oli)ids , and t-e t-ird t-ird in glcoli) glcoli)ids ids and s)-ingoli) s)-ingoli)ids# ids# 1nce obtain obtained, ed, it conduct conducted ed a series series o$ qualitative tests $or t-e recognition o$ t-ese li)ids , according to t-eir c-emical )ro)erties#
$e1)rd-/
li)id, e*traction, brain tissue, e*tract#
+ INTR INTROD OD*C *CCI CIÓN ÓN El
cereb erebro ro,,
)art )arte e cons consti titu tuti tiva va del del enc$alo, el cual a su ve% es la )orción del del sist sistem ema a nerv nervio ioso so cent centra rall de los los vertebrados vertebrados contenida contenida dentro del cráneo,
está en íntima relación con el resto de las )artes del enc$alo, es decir, el cerebelo tro tronco cereb rebral ral# El cereb rebro en la es)ecie -umana )esa 2,3 0g es una masa de te"ido gris4rosáceo com)uesto )or )or unos unos 2&& 2&&&& && millon millones es de clul clulas as
nerviosas o neuronas, conectadas unas con otras res)onsables del control de todas las $unciones mentales# El cereb cerebro ro tiene tiene un alto alto conte contenid nido o de lí)idos, tanto como 5&6 de su )eso en seco# Los ácidos grasos de los $os$olí) $os$olí)idos idos del cerebro, cerebro, es)ecia es)ecialmen lmente te de cadena cadena larga larga monoins monoinsatur aturado ados, s, son res)onsables de mantener la estructura de las las memb membra rana nas, s, mien mientr tras as que que los los )olii )oliinsa nsatu turad rados os a contr controla olarr su $luide $luide%# %# Esto Estos s con" con"un unto tos s comb combus usti tibl bles es está están n su"etos su"etos a una continua continua renovaci renovación# ón# 7e -ec-o, los cambios en los lí)idos de la dieta materna durante el embara%o o la lactancia )rovocan cambios en el )er$il de ácidos grasos en el cerebro de las crías al nacer en su desarrollo )ostnatal tem)rano# .demás, el cerebro adult adulto o )ued )uede e ser in$lue in$luenci nciad ado o )or )or las contribuciones e*ógenas, estos cambios im)l im)lic ican an no solo solo la cant cantid idad ad de .8 )oli )oliin insa satu tura rado dos s admi admini nist stra rado dos s sino sino tambin la relación 95:93# Por lo tanto, la ingesta de grasas en la dieta dieta determin determina a la com)osici com)osición ón F. del cerebro, , )or lo tanto )uede in$luir en la $unció $unción n neuro neuroló lógic gica a la ca)ac ca)acida idad d de a)rendi%a"e, como se -a demostrado en algunos animales, con menos $recu $recuen encia cia en -uman -umanos# os# !ambin mbin los lí)idos cerebrales )ueden ser alterados )or )or di$e di$ere rent ntes es )ato )atolo logí gías as## Estu Estudi dios os actuale actuales s sobre sobre como el enve"eci enve"ecimien miento to )red redis) is)one al cereb rebro a la neuro; ro; dege degene nera raci ción ón es sin sin duda duda de gran ran im)ortancia# Para abordar estas cues cuesti tion ones es,, se revi revisa san n los los as)e as)ect ctos os $unc $uncio iona nale les s de los los lí)i lí)ido dos s que que está están n es)e es)eci cial alme ment nte e enri enriqu quec ecid idos os en las las membranas cerebrales los cambios en la concentración locali%ación de estos lí)idos que se )roducen en la ve"e%# .sí
mismo discutir la consecuencia de estos cambios )ara la )lasticidad neuronal la su)e su)erv rviv iven enci cia# a# Con Con suer suerte te,, un me"o me"or r conocimiento de estos as)ectos durante el enve" enve"eci ecimie miento nto norma normall del del cereb cerebro ro acercara a la com)rensión de las causas los mecanismos de sus )atologías#
2+ RES*L RES*LT TADOS DISC DISC*SI *SIÓN ÓN
3
E45r E45rac acci ción ón -e6 -e6ar arac ació ión n de %76id)-+
Para Para la e*tr e*trac acci ción ón de los los lí)i lí)ido dos s del del cerebro se utili%aron di$erentes )rocesos de e*tracción con disolventes centri$u centri$ugac gación ión
Peso (g)
%Efciencia
Cerebro
4,0069 g
;
Extracto I
0,0909 g
2,27%
Extracto II
0,2224 g
5,55%
Extracto III
0,0144 g
0,36%
Pruebas específcas reconocimiento Prueba Colester ol
Prueba Acilglicerol es y Fosolíi!os $ecitinas
Prueba Fosor o
de
Prueba "lucolií!os y Esfngolíi!o s# R#Molis
Positivo
Positivo
Positiv o
Positivo
Prueb rueba a de cole colest ster erol ol & Para el recon econoc ocim imie ient nto o del del cole colest ster erol ol se utilia utilia el test !ie"ema !ie"eman# n#$ur $urcar card, d, el cual consta de un reactivo colo colori rim& m&tr tric ico o 'ue 'ue gene genera ra un colo colorr verde verde intens intenso o como como se(al se(al osit ositiva iva.. Este color comiena con un color rosa# violeta, el cual rogresa a trav&s de un verd erde clar claro o * lue luego un verd erde oscuro. El +undamento 'umico radica en 'ue el gruo idro-ilo del colesterol reacciona con los reactivos generand generando o la instaur instauraci acin n del anillo anillo ad*acente. /e esta manera, el colester colesterol ol es o-idado o-idado gradualm gradualmente ente,, +ormndose una mol&cula de cole coles stao aolien ieno. !a etaa aa inici nicia al consiste consiste entonces entonces en la roton rotonaci acin n del del gru gruo o con con el cons consec ecue uent nte e desrendimiento de agua, * o"teni o"teni&n &ndos dose e el ion ion car"on car"onio io cu*a cu*a o-idacin or el 2 roduce un cido colesta# colesta#ee-ano ano sul+ni sul+nico co crom+or crom+oro, o, roduci&ndose la tonalidad verdosa.
En esta esta reacc eacci in n se usa usa un cid cido o +uerte ara 'ue ocurra una correcta desi desidra dratac tacin in,, el medio medio de"e de"e ser anidro con el n de evitar 'ue las mol&cu mol&culas las de agua agua inter interer eran an en la reaccin, constitu*endo olmeros de idrocar"uros no saturados de intenso color verde aulado.
En la )ráctica, se observó la $ormación de dos ca)as, con un anillo en el medio, una de ellas de color trans)arente la otra de color verde oscuro# En general esta )rueba será )ositiva )ositiva )ara gru)os gru)os esteroles )resentes en una muestra, en este caso, el colesterol# Prueba de Acilgliceroles y Fosfolìpidos: En el e*tr e*trac acto to II, II, se )resenta )rinci)almente glice glicero$ ro$os$ os$olí olí)id )idos os como como la leciti lecitina na,, la cual está constituida )or ácido $os$órico, glicerol glicerol,, colina colina $undame $undamental ntalment mente# e# 7e este este modo modo,, cuan cuando do se obti obtien ene e una una solu soluci ción ón de leci leciti tina na en alco alco-o -oll se agrega cloruro de cadmio, se )resentó una )reci)it )reci)itació ación n de coloració coloración n blanca blanca que es debida a que la solución de"o de ser insoluble en etanol, a que la lecitina $orma un com)uesto con el cadmio# En esta reacción el cadmio )ermite recon reconoce ocerr los $os$ol $os$olí)i í)ido dos s que que tiene tienen n colina como sustituente a continuación del gru)o $os$ato en el tercer carbono#
Prueba para Fósforo: En esta )rueba se busca busca reco recono nocer cer si -a )resen )resencia cia de $os$oglicridos, indicando así la )resen )resencia cia de $ós$o $ós$oro ro inorg inorgán ánico ico## Las Las sustanci sustancias as orgánic orgánicas, as, en este este caso los lí)id lí)idos, os, deben deben )resen )resentar tar )rimer )rimero o una una -idrol -idrolisi isis s )revia )revia con auda auda del =>13, =>13, )ara )ara que que se )ued )ueda a dar dar un resu result ltad ado o )osi )ositi tivo vo,, el cual cual se mani mani$i $ies esta ta )or )or la $ormación de un )reci)itado amarillo de $os$omo $os$omolibd libdato ato de amonio, amonio, mediante mediante la siguiente reacción?
@ientras que la reacción de combustión )ara el etanol es?
En general, esta )rueba es )ositiva )ara los lí)idos lí)idos que contien contienen en $os$oro $os$oro,, tales tales como como Fos$o Fos$olí) lí)id idos os Fos$o Fos$ogli glicr crido idos s Fos$oes$ingolí)idos Fos$oes$ingolí)idos,, los cuales )resentan una estructura similar es esta?
Prueba para Glucolípidos y Esfingolípidos: Para el reconocimiento de estos lí)idos, se -icieron )ruebas de @olis- Fe-ling# En la )rue )rueba ba de @oli @oliss-,, como como a es conocido, conocido, ocurre una des-idratación des-idratación de carbo-idratos, $ormándose los res)ecti res)ectivos vos $ur$ural $ur$urales es
-idro idroli lisi sis s de la muestra stra,, dando la res)e res)ecti ctiva va color coloraci ación ón## En gene general ral,, los lí)i lí)id dos que dan resu resulltad tado )ositi sitiv vo
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Por med medio de las las di$e di$ere ren ntes tes )ruebas )ruebas cualita cualitativa tivas, s, $ue )osible )osible -acer el res)ectivo reconoci reconocimien miento to de los di$eren di$erentes tes lí)idos lí)idos )resent )resentes es en el cerebro, cerebro, de acuerdo rdo a sus sus di$ere $eren ntes tes )ro)iedades químicas+ conociendo además los $undame $undamentos ntos químicos químicos de cada )rueba, el mane"o de los reactivos#
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/e acue acuerd rdo o a la ani anida dad d del del disolvente con el lido a e-tra e-traer, er, se o"tuv o"tuvier ieron on tres tres e-tra e-tracto ctos, s, E-trac E-tracto to , rico rico en cole colest ster erol ol,, de"i de"ido do a 'ue 'ue los los est estero eroles son son sol solu"les en acet aceton ona, a, a di+e di+errenci encia a de los los dem ems l lido idos com comle leo os, E-tracto , rico rico en +os+olidos +os+olidos * algu algunos nos glice glicero ro+os +os+ol +olii iidos dos como como las las leci leciti tina nas, s, 'ue 'ue son son solu"l solu"les es en &ter &ter etli etlico, co, ero ero insolu"les en acetona, * E-tracto ricos en glucol glucolido idos, s, 'ue se disuelv disuelven en en alcool caliente * son insolu"les en acetona * &ter. eg8n el orcentae de eciencias calculado ara cada uno de los e-tractos o"tenidos, se esta"lece 'ue las eciencias eciencias +ueron "aas, con un orcentae de e-tra e-tracci ccin n m-im m-ima a de 5% ara el e-tracto estos resultados ueden ser atri"uidos a un mal roceso de e-traccin * maneo de reactivos.
En la )rueba de Fe-ling, igualmente se veri veri$i $ica ca la )res )resen enci cia a de una una secc secció ión n carbo-idratada, carbo-idratada, más es)ecí$icamente es)ecí$icamente la )resencia de a%ucares reductores, <)or la )resencia del ion Cu que es reducido )or estosA+ )or esta ra%ón, la muestra debe )resentar una -idrolisis )revia# En esta )rueba se )uede decir que se obtuvo un resu result ltad ado o )osi )ositi tivo vo <)re <)reci ci)i )ita tado do ro"o ro"oA, A, aunque en mu )oca cantidad al $ondo del del tubo tubo de ensa ensao, o, lo cual cual se )ued )uede e sustentar en la )oca )resencia de estos glucoli)idos, glucoli)idos, o a la mala reali%ación de la -idrolisis#
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En esta sección, )ara -acer el recon reconoci ocimie miento nto de Es$in Es$ingo golí) lí)ido idos, s, se )odr )odría ía llev llevar ar a cabo cabo la reac reacci ción ón de )re )resenc sencia ia de $os$ $os$or oro, o, )ues )ues esto estos s lo contienen, mientras que los glucolí)idos no#
'+ CONCL* NCL*SI SIO ONES
8+ BIBL BIBLIO IO9R 9RAF AF:A :A ;
!E:E;, <., E! /. =>, =>, ?. 2004. !eninger Princiles o+ $iocemistr*. $iocemistr*.
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?acmillan iger Education, 4a ed. @EA, /., @EA, B. 2002. $ioce $iocemis mistr* tr*.. Cile* Cile* D ons. ons. 2 ed. =anada.
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