CRITICAL APPRAISAL
PROTECTION OF GLYCYRRHIZIC ACID AGAINST AGESINDUCED ENDOTHELIAL DYSFUNCTION THROUGH INHIBITING RAGE/NF-ΚB PATHWAY ACTIVATION IN HUMAN UMBILICAL VEIN ENDOTHELIAL CELLS
Untuk Meenu!" Tu#$% M$t$ &u'"$! D"%(un#%" En)*te'
O'e! MA&HYAN +IBRIL AL FARABI ,,..,,.,,0
PROGRAM PASCASAR+AN PASCASAR+ANA A FA&ULT FA&ULTAS &EDO&TERAN &EDO &TERAN UNIVERSITAS BRAWI+AYA MALANG 1.,2
,3 Pe%$n Ut$$ A4"ke' Artikel ini menceritakan tentang peran Glycyrrhizic acid (GA, atau disebut juga Glycyrrhizin), triterpenoid saponin glycoside sebagai kandugan utama dari Licorice (akar Glycyrrhiza uralensis) terhadap efek AGEs dalam menginduksi disfungsi endotel, meliputi perannya dalam anti-apoptosis, antioidant stress dan respon anti-proinflamasi beserta mekanisme yang mendasarinya! "enelitian ini telah membuktikan bah#a pemberian GA dalam konsentrasi $% -& '$%- mampu menurunkan apotptosis akibat AGEs pada *+Es, meningkatkan enzim antioksidan ./0 dan menurunkan 0A melalui inhibisi jalur 1AGE dan 23-k4! GA juga mampu menurunkan produksi AGE berlebih akibat 1/.! *al ini menunjukkan bah#a GA berpotensi mampu menjadi alternati5e dalam pencegahan dan terapi komplikasi 5askuler diabetes pada dosis yang tepat!
13 &e5ent"n#$n A4t"ke' 6si yang terdapat dalam artikel ini sangat menarik dan penting! 7adar glukosa darah yang tinggi dalam jangka panjang pada penderita diabetes memicu terjadinya proses glikasi lipid dan protein yang mengakibatkan terjadinya peningkatan AGE (advanced glycation end product ) AGE diproduksi melalui aillard reaction yang ditandai dengan adanya asam amino teralkilasi, residu fluorescence dan cross linkage baik intra maupun inter molekul! AGE memegang peran yang cukup sigifikan dalam proses terjadinya berbagai komplikasi pada diabetes, baik AGE yang berada pada jaringan (intraseluler) maupun pada sirkulasi plasma darah (ekstraseluler) 6 nteraksi antara AGE dalam sirkulasi dengan 1AGE (receptor for advanced glycation end product ) akan meningkatkan produksi 1/. intraseluler dan upregulasi dari factor transkripsi 23-84 dan produknya
yakni
endothelin-$,
5ascular
cell
adhesion
molecule-$
(A-$),
intercellular adhesion molecule-$ (6A-$), E-selectin, tissue factor, thrombomodulin, 5ascular endothelial gro#th factor (EG3), sitokin proinflamasi 6L-$9, 6L-, tumor necrosis factor-9 dan 1AGE! 1/. juga menginisiasi proses lipid peroidation yang ditandai dengan peningkatan 0A maupun penurunan akti5itas 2/ in 5itro maupun in 5i5o, atau menyebabkan terjadinya peningkatan regulasi (upregulation) dari i2/. dan penurunan regulasi (downregulation) e2/.! 7esemuanya merupakan faktor yang memicu terjadinya proses komplikasi 5askuler pada diabetes mellitus! Glycyrrhizic acid (GA, atau Glycyrrhizin, :-/-(;-/-beta-0- glucopyranuronosylalpha-0-glucopyranuronosyl)-$&beta-glycyrrhetinic
acid,
hemical
formula<
=;*;/$,molecular #eight>&;;!?=), merupakan triterpenoid saponin glycoside
merupakan kandungan utama dari Glycyrrhiza uralensis! GA telahh dibuktikan memiliki berbagai kemampuan bioakti5itas seperti antioksidan, anti5irus, penrlindungan jantung, penrlindungan li5er, imunomodulator dan efek hipoglikemik! "enelitian ini membuktikan bah#a GA pada dosis $%-& '$%- mampu menghambat terjadinya apoptosis pada *+E yang dipapar ;%% @gml AGEs selama =& jam! 0imana kemampuan tersebut juga terjadi ketika *+E diberi antibody monoclonal
anti
1AGE!
"enghambatan
apoptosis
meningkat
seiring
dengan
meningkatnya dosis GA! .elain itu, GA juga menurunkan kadar 4a protein marker apoptosis! +ntuk akti5itas anti-oksidan, *+E di e5aluasi kadar 1/., ./0 dan 0A! 0imana GA terbukti mampu menurunkan kadar 1/. dan 0A, diikuti dengan peningkatan kadar ./0! GA juga dibuktikan mampu menghambat peningkatan kadar BG3-C$ pada *+E yang terpapar AGEs! 0imana mekanisme ini juga ditunjukkan pada pemberian antibody monoclonal anti-1AGE! .elain itu, GA juga mampu menghambat amplifikasi 1AGE dan akti5asi 23k4 pada *+E! "eningkatan transkripsi 23-84 diakibatkan karena interaksi AGE dengan 1AGE yang meingkatkan signaling seperti 2A0(")* /ksidase, ";, p:&, GB"ases dc=; dan 1ac! 0engan hambatan akti5asi 23-84 maka akan terjadi penurunan ekspresi endothelin-$, 5ascular cell adhesion molecule-$ (A$),
intercellular
adhesion
molecule-$
(6A-$),
E-selectin,
tissue
factor,
thrombomodulin, 5ascular endothelial gro#th factor (EG3), sitokin proinflamasi 6L-$9, 6L-, tumor necrosis factor-9 dan 1AGE! *al ini menunjukkan bah#a GA memiliki potensi untuk digunakan sebagai terapi dan pencegahan disfungsi endotel! 0iduga mekanismenya sama dengan metode untuk inhibisi 1AGE dengan anti-1AGE igG atau soluble 1AGE sebagai ligan ekstraseluler yang mampu menginhibisi akti5asi 23-84!
63 +en"% A4t"ke' Artikel ini merupakan suatu original article suatu hasil penelitian eksperimental laboratorik secara in vitro menggunakan sampel sel *+E dari American Bype ulture ollection (AB)! "enelitian ini dilakukan untuk membuktikan pengaruh GA terhadap *+E yang dipapar AGEs!
03 V$'")"t$% 03, V$'")"t$% Ek%te4n$' "enelitian ini memiliki 5aliditas eksternal yang rendah! *al ini dikarenakan sulitnya untuk melakukan generalisasi dari hasil penelitian yang menggunakan model in
vitro kepada populasi! "ada penelitian ini dilakukan pembatasan dalam berbagai macam aspek sehingga bias yang terjadi dapat dikontrol dengan baik! 7ondisi pembatasan ini tentu saja tidak mencerminkan kondisi sebenarnya yang terdapat pada kondisi di dalam tubuh atau in vivo! *asil yang didapatkan pada penelitian ini masih belum tentu akan menghasilkan hasil yang sama ketika dilakukan secara in vivo! *al ini dikarenakan akti5asi dari disfungsi *+E ini dipengaruhi oleh berbagai macam faktor, seperti sitokin proinflamasi atau anti-inflamasi, interaksi dengan sel lain, dan lingkungan mikro yang terdapat di dalam tubuh! "enelitian yang dilakukan secara in vitro ini dilakukan pembatasan sehingga faktor-faktor perancu tersebut tidak memberikan pengaruh terhadap hasil penelitian! .elain itu, peneliti juga menyebutkan bah#a GA dapat menghambat apoptosis sel *+E, peningkatan akti5itas antioksidan ditandai dengan penurunan 1/., 0A dan peningkatan ./0,! Akan tetapi, peneliti di sini menggunakan AGE yang berasal dari glikasi 4.A sesuai metode 3ranke et al., (;%%?)D "adahal, beberapa penelitian lain menyebutkan bah#a AGE pada manusia akan berasal dari *uman .eru m Albumin (*.A) dan protein lain yang terglikasi! *al ini menunjukkan adanya kemungkinan perbedaan hasil ketika AGE yang digunakan adalah AGE yang berasal dari *.A, bukan 4.A! .elain itu, AGE memiliki berbagai macam subtype seperti pyrallene, methylglycoal, carboymethyl-lysine dan subtype lainnya! /leh karena itu, untuk mengaplikasikan hasil penelitian ini pada populasi penderita diabetes tentu saja masih sangat jauh karena AGE yang digunakan tentu saja akan berbeda!
031 V$'")"t$% Inte4n$' "enelitian ini memiliki 5aliditas internal yang baik! *al ini dikarenakan hubungan sebab akibat yang didapatkan memiliki nilai yang kuat! "enelitian ini melakukan pembatasan terhadap faktor-faktor eksternal yang mempengaruhi hasil dengan menggunakan suatu desain penelitian in vitro! "engaruh eksternal yang dapat mempengaruhi hasil penelitian ini antara lain sitokin dan interaksi dengan sel lain serta kondisi lingkungan mikro yang telah dimodifikasi sedimikian rupa sehingga menjadi kondisi yang netral dan tidak mempengaruhi hasil penelitian! Apabila penelitian dilakukan dengan desain in vivo tentu saja pengaruh-pengaruh eksternal akan sulit untuk dihilangkan, seperti kondisi diet maupun emosional yang tentu saja dapat mempengaruhi kondisi microen5ironemtn 5askular dari satu indi5idu!
.el *+E yang digunakan telah disiapkan dengan metode yang standar dand didapatkan dari American Bype ulture ollection! *asil dari produksi AGE di laboratorium juga telah dilakukan konfirmasi terlebih dahulu kadarnya dengan menggunakan EL6.A sehingga memiliki nilai kepastian yang tinggi! +ntuk mendapatkan kesimpulan bah#a GA dapat menghambat apoptosis dan memiliki efek anti-oksidan pada sel *+E yang terpapar AGEs, peneliti melakukan beberapa pengukuran 5ariabel! ariabel yang diukur merupakan 5ariabel yang rele5an dalam menghasilkan kesimpulan tersebut! ariabel juga diukur menggunakan metode yang telah dilakukan dalam penelitian sebelumnya sehingga merupakan metode yang standar!
23 B$!$n )$n Met*)e "enelitian yang dilakukan ini menggunakan *+E yang didapatkan dari American Bype ulture ollection! "eneliti tidak menyebutkan bagaimana standar *+E yang digunakan dan jumlah sel nya dalam tiap #ell! "ada artikel ini juga tidak disebutkan ethical clearance mengenai penelitian ini, mengingat penelitian menggunakan *+E sebagai representasi dari sel manusia tentu saja harus membutuhkan persetujuan dari komisi etik terlebih dahulu! "enelitian ini dilakukan dengan jumlah sampel triplicate untuk menjamin 5aliditas dari hasil yang didapatkan! etode yang dilakukan untuk produksi AGE merupakan metode standar produksi AGEs dari 4.A! AGEs yang dihasilkan dari reaksi ini merupakan crude AGEs yang tersusun dari berbagai macam subtype AGE! alidasi kadar AGEs dengan menggunakan EL6.A dengan blanko standar 4.A menjamin kadar yang tepat untuk AGEs yang dipaparkan *+E! .ayangnya, AGE yang digunakan disini tidak dianalisis lebih lanjut subtype apa yang dominan dalam kandugannya! etode pengukuran apoptosis dengan menggunakan Acridine orangeethidium bromide (A/E4) merupakan metode standa yang cukup baik! .ayangnya hasil yang didapatkan masih hasil semi kuantitatif dari analisis 6mage-"ro "lus soft#are! eskipun demikian, hasil apoptosis ini ditunjang dengan adanya hasil analisis #estern blot yang menunjukkan adanya peningkatan kadar 4a, protein yang akan muncul pada apoptosis sel! etode pengukuran ./0, 0A, BG3-C$, 23k4 telah dijelaskan dengan cukup jelas, dimana semuanya dilakukan dengan kit yang telah dipersiapkan khusus untuk e5aluasi 5ariable tersebut! *asil yang didapatkan merupakan hasil kuantitatif sehingga cukup baik untuk digunakan sebagai referensi!
etode statistik yang digunakan merupakan metode yang standar menggunakan analisa komparasi menggunakan A2/A yang menggunakan nilai p %,%F untuk perbedaan yang signifikan dan p %,%$ untuk perbedaan yang sangat signifikan!
3 H$%"' Pene'"t"$n *asil yang didapatkan disajikan dalam bentuk tabel dan gambar
sehingga
memudahkan untuk membaca hasil tersebut! Akan tetapi, hasil yang menunjukkan interpretasi berbagai macam #arna marker pada e5aluasi apoptosis di mikroskop fluoresens (Gambar $) tidak diberikan keterangan langsung, sehingga membuat pembaca cukup kesulitan! *al ini dapat diatasi dengan membuka 5ersi #eb dari jurnal yang memaparkan detail interpretasi #arna dengan lebih jelas! "eneliti juga menyimpulkan bah#a pemberian GA mampu menghambat apoptosis dan memiliki efek antioksidan pada *+Es yang dipapat AGE! *al ini sudah didasarkan dari analisa statistik dan telah ditunjukkan perbedaan yang signifikan antar kelompok penelitian! "eneliti juga telah menggunakan antibody monoclonal anti-1AGE untuk membandignkan efeknya dengan terapi yang sudah ada! *asil lain yang didapatkan dalam penelitian ini sudah rele5an dan terkait dengan tujuan dari penelitian ini!
3 Pe7$!$%$n A4t"ke' 0alam artikel ini, peneliti tidak menyebutkan kekurangan dalam penelitian yang dilakukannya! 7ekurangan dalam penelitian ini justru penting untuk disebutkan karena dapat dijadikan sebagai saran untuk penelitian selanjutnya! .ecara garis besar, pembahasan yang dituliskan oleh peneliti sudah sangat bagus dimana peneliti mencari mekanisme kerja GA dalam menghambat disfungsi endotel ini sudah rele5an! 4anyaknya data yang didapatkan dalam penelitian ini juga mendukung pembahasan dan kesimpulan yang dikemukakan oleh peneliti! 0ata dari penelitian terdahulu juga mendukung hasil yang didapatkan oleh peneliti sehingga membuat pembahasan yang dikemukakan oleh peneliti ini 5alid! Akan tetapi, limitasi dari pembahasan dalam artikel ini adalah tidak adanya pembuktian secara langsung dari reseptor apa dari *+E yang berperan dan dipengaruhi oleh pemberian GA! 0engan demikian, peneliti mencari mekanisme ini berdasarkan studi pustaka dari hasil penelitian lainnya! .elain itu, dengan membuktikan bah#a efek pemberian GA memiliki efek yang mirip dengan pemberian antibody anti1AGE, maka disimpulkan bah#a kemunkginan GA akan bekerja pada jalur AGE-1AGE!
