Cromatografia en Papel

CROMATOGRAFIA EN PAPEL CONCEPTO 

Cromat Cromatogr ografí afía a es un proced procedimi imient ento o fisico fisicoquí químic mico o que permit permite e separa separarr los componentes a sustancias integrantes de una mezcla en movimientos por adsorción o separación diferencial de estos componentes sobre la superficie estacionaria o inmóvil. Existen 2 clases bajo ese concepto: la de papel y la de capa fina.

Comparación entre la cromatografía del papel y la de capa fina f ina o delgada PAPEL uestra en miligramos !a resolución depende

de

CAPA FINA uestra en miligramos la uy r"pida desde minutos #asta + a 2

conc concen entr trac ació ión n y el di"m di"met etro ro de la #oras. manc#a.

(uen (uena a

$"pida desde %&min '%&#r.

#idrofóbicas e #idrofílicas.

(uen (uena a

separ eparac ació ión n

de

sepa separa raci ción ón

de

sust sustan anci cias as

sust sustan anci cias as uede usar disolvente an#idro.

#idrófilas) para #idrofilita se requiere  /scendente raramente) #orizontal o papel especial. !os

circular.

disolventes

satu satura rad dos

de

desc descen ende dent nte) e)

deben

agua gua circ circul ular ar

estar uede ser flexible o rígido.

asc ascende endent nte e) $equ $equie iere re

aplic plicac ació ión n

especi pecia al

de

#ori #orizzonta ontal)l) absorbente.

soporte flexible.

*istancia a recorrer de 0'2&cm.

(asta cortar el papel

1umerosos adsorbentes.

*istancia a recorrer de 2&'+&& cm.

,til ,til para para segu seguir ir el proc proces eso o de una una

!imitado a papel y derivados

reac reacci ción ón

o sepa separa raci ción ón de de plat platos os

,til ,til para para segu seguir ir el proc proces eso o de una una puede ser cuantitativo. reac reacci ción ón

o sepa separa raci ción ón de de plat platos os  /decuado

puede ser cuantitativo.

para

seleccionar

diso disolv lven ente tess para para crom cromat atog ogra rafí fía a en

-nad -nadec ecua uada da para para la sele selecc cció ión n de columna. diso disolv lven ente tess para para crom cromat atog ogra rafí fía a en columna.  ASPECTOS TEORICOS Y MECÁNICOS DE LAS CROMATOGRAFÍAS EN PAPEL Y CAPA DELGADA

El proceso cromatografico) empieza con la distribución diferencial de un soluto o sustancia a absorber) entre dos fases) una de las cuales esta inmóvil o estacionaria y la otra móvil. *isolvente o portaciones osea corresponde al paso sucedido a contracorriente de

un

soluto)

entre

numerosos

embudos

de

separación

unidos

secuencialmente a una seria de platos de destilación que contiene el disolvente.  /sí la fase móvil se pone en equilibrio en una porción de fase estacionaria donde vuelve a ponerse en equilibrio y a continuación fluye #acia la tercera fase estacionaria y así sucesivamente alcanzando el equilibrio de reparto en cada una de ellos. 1erst resume esto en lo llamado coeficiente de reparto 3) que es el cociente de la concentración del soluto en una fase móvil / y su concentración en la fase estacionaria () una vez alcanzando el equilibrio a una temperatura determinada.

CARACTERÍSTICAS DEL PAPEL •

4ormas comunes) son las marcas 5#atman en especial el numero +

•

Existe tambi6n 7c#leid#er y 7c#8ell y ac#erey' 1agal. !as características de transporte es gravitatoria de capilaridad) de

•

adsorción) de reparto e intercambio iónico.

Caracterítica de alg!no papele Marca

Grado

Peo

Epeor

$if!ión

%!perficie

5#atman

+

gr"m# <

mm &.+=

;

7uave

5#atman

2

;<

&.+

+2.0

7uave

5#atman

%

+0

&.%

;

$ugosa

5#atman

%m

+0

&.%%

;

7uave

5#atman

9

;2

&.2&

0

7uave

5#atman

9&

;0

&.2+

$ugosa

5#atman

09&



&.+

uy 7uave

7'7

0; verde c

&.%2

$ugoso

7'7

0; naranja c

&.22

7uave

7'7

0; blanco c

&.+0

7uave

!os papeles 8#atman + y % contienen ;';;> celulosa) &.%'+.&> celulosa o &.9'&.> de pentosanas) &.&+0'&.&%> de material soluble 6ter y &.&'&.=> de material inorg"nico.

 /lgunos papeles se pueden lavar con ?Cl para eliminar material inorg"nico que tienden a dar colas con // y alcaloides. 7e debe #acer una selección correcta de papel y disolvente para que sean óptimos la: a@ *ifusión molecular  b@ !a difusión turbulenta c@ $esistencia a la transferencia de liquido  / veces es necesario modificar la naturaleza del papel y lograr: •

apel acetilado: Atil para sustancia #idrófoba

•

apel impregnado: Atil para sustancias moderadamente #idrófoba o #idrófila Bpuedo usar aceite de parafina) cauc#o) dimetil formida o aminos de alto peso molecular@.

•

apel cargado: Atil para sustancias org"nicas o inorg"nicas. oco polares o iónicas. 7e logra por dispersión

de resinas

poliestiremicas. -ntercambiadores de iones en la fibra celulosica. •

apel de vidrio: se usa para condiciones extremas de temperatura y acidez.

•

apeles tratados: Atil para sustancias anfóteras o con muc#os #idroxilos.

SELECCIÓN DEL DISOLVENTE  •

*eterminada la selectividad del sistema cromatografico.

•

ara la selección debo considerar la naturaleza química de la sustancia que deseo separar y la viscosidad y polaridad del disolvente.

TA&LA $E $I%OL'ENTE%( OR$ENA$O% POR POLARI$A$ $iol)ente

Contante $iel*ctrica

'icoidad en

ter petróleoB%&'=&@

+E, +.

centipoie #-.C %.2;&

?exano

+.

%.2;0

(enceno

2.2;

+.0=9

ter etílico

9.9<

+.222

Cloroformo

0.2

+%.092

 /cetato etilo

=.++

+.99+

*icloroetano

+&.9

+.99;

(utanol'2

+0.0

9.2+&

 /cetona

2+.0

+.2;0

Etanol

2=

+.&&%

etanol

%+.2

+.09<

?2&

&.%<

+.&&&

iridina

+2.<

&.;<9

 /c. Drg"nicos  /cidez y alcalis inorg"nico •

!os disolventes generalmente son de 2 fases la org"nica y la acuosaBesto ultimo implica saturación) para un buen desarrollo del cromatograma@

•

!a separación) se debe en especial por la interacción del soluto en ambos líquidos.

SISTEMA DE DISOLVENTES SEGÚN FAMILIA DE SUSTANCIAS 

Familia de !tancia %itema de diol)ente +. 7ustancia fuertemente #idrófila ezcal del disolvente miscibles con insoluble

en

etanol

BEjm. agua limitada o con solo un +&'9&>

 /mino"cidos) azAcares@ valores $f o de ?2D. posiblemente con adición de en butanol. 2. 7ustancias

sales) "cidos. moderadamente !o mismo que en + adem"s de

#idrofila) mas soluble en etanol que mezclas con menor >de ?2D que en ?2D valores de $f & en butanol y contengan disolventes pero polares) $f + en ?2D %.7ustancias

como cloroformo) benceno) 6ter de arom"ticas

petróleo) acetato de etilo. y !o mismo que el + y 2 de mezcla de

#eterocíclicas valores de $f &.&0 y &.; disolventes con ?2D +:+) 2:+ e en ?2DBsi es necesario previa adición incorporación de variaos sales ) ?F y de "cidos) sales o amino"cidos@

alcaloides para disminuir valores de

$f. 9. !ípidos solubles en 6ter de petróleo a@ -gual que + Bel contenido de ?2D insoluble en ?2D.Galores de $f & en reduce los valores de $f@ al igual que ?2D a cero en butanol saturado en 2) ?2D.

el

6ter

de

petróleo

y

otro

#idrocarburo pueden reducir valores de $f pero por lo general forman colas. b@ ezcla el disolvente) donde el ?2D se sustituye parcial o totalmente para formar glicel) etc. c@ 7istema de fase invertida papel

0.Hcidos y bases

#idrofobizado con siliconas) aceites) a@ !o mismo que + y 2 para impedir disociación) se aIade "cido o alco#ol fuerte. b@ !o mismo que + se aIade "lcalis o "cidos para producir sal #idrofila.

VALORES DE Rf, Rx, hRf 

Cromatografía unidimensional o radial el conjunto migratorio de una sustancia se describe en función de la relación $f) ósea el cociente de la distancia recorrida por la manc#a de la sustancia y la distancia recorrida al mismo tiempo por el disolvente. 7e considera una sustancia patrón este J$fK se llama J$xK 7i estos J$fK y J$xK se multiplica por +&&) se llama J#$fK y J#$xK respectivamente.

$f del componente C  cLa #$4 del componente C  cLa M +&& REPRODUCTIBILIDAD DEL Rf 

ara poder llegar a una reproductibilidad del an"lisis debo: •

antener la c"mara de desarrollo con cambios de temperatura 0N C

•

ezclar bien el disolvente y mantenerlo 2'% días a la ON C que se #ar" la cromatografía

•

7eleccionar el papel adecuado con marca y grosor.

•

Comprobar correctamente las características del disolvente por compuesto de referencia.

•

Pna vez aplicada la manc#a deja que el papel se equilibre 29#r con la atmósfera de la c"mara.

•

antener la c"mara cerrada.

•

*ejar que el disolvente entre 2&'%&cm

•

7eguir

instrucciones de

minuciosamente.

secado

y

visualización

de manc#as

PROCEDIMIENTO DE DESARROLLO 

a, $ecendente

/, Acendente

c, Cromatoca0a

d, &idimenional

e, C!niforme

f, Radial

MÉTODO PARA LOCALIZAR MANCHAS

a@ Químico: ejm: cromógenos b@ 4ísico: ejm: P.G c@ $adioactividad: ejm: uso de palcas fotogr"ficas Pso de contador  d@ 6todos biológicos y enzim"ticos: ejm: detección de antibióticos !ocalizar amilasas

CROMATOGRAFIA EN CAPA $ELGA$A O FINA INTRODUCCION 

El absorvente se mezcla en aglutinante a menudo yeso) esta mezcla se suspende en ?2D y se deposita en placa de vidrio o superficie rígida met"lica o material pl"stico) al secarse la sustancia queda ad#erida a la placa de vidrio y efecto del aglutinante como capa delgada y rugosa de &.+ a &.2 mm.  ADSORVENTES Y CANTIDAD DE HO !UE SE A"ADE 

Nom/re

Pro)eedor

Ador/ente"ag!a

Rel sílice R

erc3

+g"ml, %&L=&'=0

Rel sílice 1

erc3

%&L=&'=0

Rel sílice ?

erc3

%&L=&'<&

Rel sílice <=

(a3er 

%&L=&

Rel sílice  y s

Relsman

*0&L+&& *7=&L+&&

Rel sílice 7R9+

$eeve /ngel

%&L=&

Rel sílice * y *7

5alm

%&L+0

Rel sílice O!C

allinroc3olt

%&B=&'<&@

Rel sílice (io'7ilo

(io TGad

%&L=&

Rel sílice /*

 /p#ed 7cience

%&L90

Dxido de aluminio R

erc3

%&L9&

Dxido de aluminio ?

erc3

%&L&';&

Dxido de aluminio 

erc3

%&L&

Dxido de aluminio *

Relman

2&L=0

Dxido de aluminio /=

(io'$ad

%&L%&

Celulosa %&&y %&&=

erc3

+0L;&

Celulosa CC9+

5#atman

%&L=&

Celulosa 

(io'$ad

+0L;&

Seiselgur R

erc3

+0L;&

Estos absorventes pueden ser usados tambi6n a nivel industrial peor en condiciones diferentes.  /lgunos absorbentes contienen sustancias fluorescentes como el silicato de zinc para ser visto en el P.G.

ara reforzar la ad#esión se usa en general yeso yLo almidón) la celulosa aglutinante. El m"s comAn es el gel de sílice. ara escoger el absorbente) puede tomar en consideración: a@ para lipofilos) se separan sobre oxido de aluminio) gel de sílice) celulosa acetilada y poliamida. b@ para #idrófilos) sobre celulosa) celulosa con combinación de iones Sleselger y poloamida. Existe excepciones pues es regla empírica por ejemplo. •

igmentos de cloroplastos que son liposolubles y se separa f"cil en gel de sílice) lo mismo que celulosa y oxido de aluminio.

•

Rel de sílice) separa bien alde#idos) cetonas) alcaloides) azucares) fenoles) esteroides) terpenoides) "cidos grasos) amino"cidos.

•

El óxido de aluminio es absorbente alcalino) pero puede prepararse como alAmina neutra) "cida) sensible para ?Cl) policiclos) alcaloides) aminas) vitaminas liposolubles y algunas cetonas.

•

El oxido de magnesio es selectivo para compuesto arom"tico) sustancia doble enlace conjugado como carotenoides) la cantidad de aglutinante es yeso de +&'+0> y el almidón en +'%>

SELECCIÓN DE SISTEMA DE DISOLVENTE 

%elección de itema de diol)ente *isolventes usados en CC* de algunos componentes org"nicos.

12 Eteroide 3 eterole -

(enceno o benceno acetato de etilo B;:+ o :2@ gel de sílice R

-

Cloroforma T etanos B;=:9@ Baluminio@

-  /cetato de etilo T ciclo#exano Bmezclas diversas@ B"cido silícico

aglutinado con almidón@ -

(enceno T isopropenol Bmezcla diversas@ Bgel de sílice F 1aD? 2>@

-

etanol T agua B;0.0@Bcelita impreganada con vaselina@

-

Ciclo#exano T #eptano B+:+@ Bgel de sílice T 3eiselgur R@

-

Ciclo#exano T acetato de etilo B;;:0@BSeiselgur =@

-

(enceno T cloroformo B;:+@ Bgel de sílice =@

-

(enceno T metanol B;:+@ Bgel de sílice =

#2 Terpenoide -

?exano o #exano acetato de etilo B0:+0@ B"cido silicico aglutinado con almidón@

-

(enceno o mezcla de benceno T 6ter de petróleo o etanol Bmezcla diversa@ alumina

-

ter o ter isopropilico acetona B0:< o +;:+@ gel de silice R.

-  /ceites escenciales -

(enceno cloroforma B+:+@ gel de sílice R

-

ter de petróleo Bgel de silice R@

42 'itamina -

etanol T tetracloruro de carbono xileno Bmezcla diversa@) cloroforma) alAmina.

-

Cloroforma T 6ter de petróleo BalAmina@

-

etamil) propanol o cloroforma Bgel de sílice@

-  /cetona T #exano Bsat) ? 2D@ B;:+@ gel de sílice impregnada de parafina.

52 6cido grao -

ter de petróleo T 6ter isopropilico T "cido ac6tico B<&:%&:+@ Bgel de sílice R@

-

Cloroformo ' 6ter petróleo BalAmina@

-2 Alcaloide -

Cloroforma o etanol o #examo T cloroformo B%:<@ mas &.&0> dietilamina BalAmina@

-

(enceno T etanol B;:+@ Bgel de silice@

-

Cloroforma T acetona T dietilamida B%:9:+@ gel de silice

72 Fla)onoide y c!marina -

ter de petróleo T acetato de etílo B2:+@ Bgel de sílice R@

-

etanol ' ?2D B:2 o =:9@ Bpolícaprolactamo@

-

Oolueno T formato de etilo T "cido fórmico B0:9:+@ Bgel de sílice R@

M*todo de dearrollo en CCO +. *esarrollo unidimensional ascendente 2. *esarrollo #orizontal) radial o lineal %. *esarrollo mAltiple 9. *esarrollo en soporte cuneiforme 0. !ocalización de zonas de identificación y documentación.

Locali8ación •

!as incoloras se revelan con cromógenos

•

Oambi6n puede localizarse por la t6cnica de carbonización con alambre caliente) es un alambre de micron al rojo vivo que se acerca a + milimetro de altura de la placa) este carboniza material inorg"nico) presente en la placa.

•

Compuestos fluorescentes puede detectar con P.G.

•

anc#as radioactivas con contador geiger o auto radiografía.

$oc!mentación: El cromatograma en capa delgada se puede tratar con vaselina líquido para #acerlo traslAcido y colocarlo en maquina fotocopiadora. !as capas delgadas de aluminio puede cubrirse de material pl"stico) tipo J7oranK y colocarse en arc#ivo.

Identificación Con ayuda de $f de sustancia patrón las manc#as puede rasparse de la placa y eludirse con +&& T 2=& mil de un disolvente no polar an#idro) luego la solución se deja sobre (r3 pulverizado) esto lo coloca en un microdisco y forma una pastilla para obtener un espectro en el -.$.

Reacti)o cromógeno !tili8ado en cromatografía en papel y capa delgada a2

Alco9ole: 1itrato armónico c6rico al => con ?1D % 2n: anc#as rojizas sobre fondo amarillo lo polialco#oles de manc#as amarillas. Dxinato de vanadio: anc#as rojizas sobre fondo negro azulado. Gainillina /c. 7ulfurico alco#oles superiores: *an manc#as verde azuladas.

/2

Alcaloide: *isolución de todo pletínico: anc#as azules) rojas o violetas. $eactivos *regendorff: manc#a roja o anaranjada sobre un fondo amarillento ermanganato de potasio: 1o definido araformalde#ido ' "cido fosfórico: no definido

c2

Amina  /lizarina: /minas alif"ticas y amino alco#oles manc#as violetas sobre fondo amarillo Cl%fe ferrocianuro de potasio: /minas arom"ticas y triptamina dan manc#as azules. Gainillina T SD?: aminas y // dan manc#as de fluorescencia característica.

4luroborato de p'nitrofenil diazonio /minas arom"ticas y fenatos con posición orto y para libres dan manc#as roja o azul

d2

Amino;cido: arina B2U%)9U0)< T penta oxiflavona: los amino "cidos aparecen con manc#as fluorescentes oscuras o verde amarillentas@

e2

A8!care y deri)ado  /cido p'aminobenzoico: Como las pentosas dan manc#as rojas oscuras dan colores marrón oscuro. Cloruro de 2) %) 0 trifenil tetrazolio: glicosidos esteroides con grupo cetol y azucares reductores dan manc#as rojas  /nisidina T "cido ft"lico: ?exosasa dan manc#as verdes) las pentosas dan colores rojo violaces las metil pentosas dan color verde amarillento las 2' desoxipentosas dan coloración marron  /ntrona anc#as amarilas) verdes o azules 1afresorcinol: !os azucares dan color verde o azul

f2

6cido grao  /cetato cAprico ferrocianuro de potasio: *an manc#as rojas marrones.

g2

Etere 1itroprusiato de 1a T D?1a las lactonas V)( insaturadas dan color entre rojo y violeta. ?idroxamato 4errico: colores violetas.

92

Peró
i2

Inecticida clorado *ifemilamina T Cl2Wn: anc#as de diversos colores

 02

Cation Inorg;nico2 *ifeniltio carbazona Bditizona@: !os cationes como 1i) /g) (i) b) Cd) y 7n dan colores rojo viol"ceo El 7n) da color rosa rojizo El ?gF2 da rosa amarillento El Cu da marrón.  ?idroxiquinolina Boxina@ los cationes como /l) Ca) (e) g) (e) 7r dan manc#as brillantes. Dtros cationes dan manc#as oscuras  ?idroxiquinolina T /cido Sojico *an manc#as amarillas) arrón) verde) anaranjado y negros.

=2

Amione Inorg;nico2 !os amiones como marrones

− − − − −  NO3 , Cl 3 ,  BrO3 ,  IO3 ,  F 

1itroso) dan manc#as