Cuestionario de La 1 a La 5

CÁTEDRA DE FARMACOGNOSIA Y MEDICINA TRADICIONAL- FFYB UNMSM

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CUESTIONARIO PRACTICA 2 1. Explique las reglas generales para la recolección de: cortezas, órganos subterráneos, plantas herbáceas, hojas, sumidades floridas y frutos. Muestre la disposición de las hojas sobre el tallo o rama y evite que las láminas queden dobladas. Se debe mostrar tanto el haz como el envés para poder notar características relacionadas con la venación o pubescencia. Cuando las hojas son verticiladas se pueden eliminar aquellas que van a quedar en la parte interna de la muestra. Lo anterior también se aplica con las inflorescencias densas y muy ramificadas sumidades floridas: Se extienda los pétalos de flores medianas o grandes para que queden visibles las estructuras internas (estambres y estilo). coloque unas cuantas flores dentro de un sobre cuando son pequeñas o se nota que se desprende con facilidad. frutos: corte de forma longitudinal los frutos muy gruesos para reducir el volumen y facilitar el proceso de prensado y secado. Dependiendo del grosor se puede cortar en dos o tres partes, manteniendo la parte central y separando las partes laterales. En estos casos es mejor colocar el fruto en un pliego de papel separado para su prensado y secado. (1)

2. Describa las ventajas y desventajas del uso de molino de cuchillas y del molino de martillos en la reducción de tamaño de partícula de drogas vegetales. MOLINO DE MARTILLOS M ARTILLOS VENTAJAS  

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molienda de pequeñas cantidades de producto en ensayos de laboratorio. Diseñado para triturar productos sólidos, blandos o semiduros como, cereales, especias, semillas, tierras, etc. La alimentación se hace a través de una entrada vertical. La puerta dispone de un cierre rápido con micro de seguridad que se activa cuando el rotor y las cuchillas están funcionando. Destinado a laboratorios de la industria alimentaria, química, farmacéutica y cerámica Sencillez constructiva, con pocos elementos susceptibles de averiarse. Dispone de una compuerta de acceso para operaciones de mantenimiento Facilidad de mantenimiento y sustitución de repuestos. (2) (3)

DESVENTAJAS 

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La elección del recipiente adecuado de molienda dependerá del tipo de material a ser triturado. Para la la mayoría de las aplicaciones no se necesita más que el recipiente de plástico estándar. Para aplicaciones especiales se encuentran a disposición otros recipientes. (4)

MOLINO DE CUCHILLAS VENTAJAS 

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Un solo aparato para la trituración previa y la molienda fina: efecto de corte en el modo de operación estándar, de impacto en el modo con inversión de marcha, y trituración primaria en el modo por intervalos Recipientes de molienda en plástico, en vidrio y en acero inoxidable Aplicación, reducción de tamaño, homogenización y mezcla Aplicación en agricultura, alimentos, biología, medicina, farmacia Tipo de material, blando, semiduro, elástico, contiene agua/grasa/aceites/semifibroso realizan en cuestión de segundos trituraciones completamente homogéneas y reproducibles que permiten la toma de muestras representativas en cualquier lugar.


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Bien se trate de laboratorios de alimentos o institutos de investigación química o biológica, para poder realizar estudios precisos todos necesitan muestras de material apropiadas para el análisis. son aparatos de uso profesional que satisfacen las exigencias especiales de los laboratorios e institutos de investigación. procesan sustancias con un alto contenido de agua, aceite o grasa, tan rápida y fiablemente como productos secos, fibrosos, blandos, elásticos y semiduros. El modo de operación por intervalos mejora la molienda, ya que el material no es proyectado permanentemente hacia arriba, sino que puede depositarse a intervalos de tiempo definidos. Esto permite que la muestra se mezcle bien y la trituración se haga más efectiva al mantenerse siempre juntos los componentes de la muestra. (5)

DESVENTAJAS 

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Si se van a triturar materiales más duros (p. ej. pellets de piensos), es conveniente emplear el recipiente de acero para reducir a un mínimo el desgaste producido por el esfuerzo mecánico durante la molienda. La elección del recipiente adecuado de molienda dependerá del tipo de material a ser triturado. Para la mayoría de las aplicaciones no se necesita más que el recipiente de plástico estándar. Para aplicaciones especiales se enc uentran a disposición otros recipientes. (5)

3. ¿Qué son los factores climáticos, atmosféricos, edáficos y topográficos?, ¿Cómo influyen en la calidad de las drogas vegetales? Factores climáticos Los factores del clima son los agentes que cambian el comportamiento del clima y de acuerdo a su interacción, presencia e intensidad determinan los diversos tipos de clima que existen en el planeta.

Factores atmosféricos La atmósfera cambia constantemente. A estas variaciones la llamamos el estado del tiempo. Entre los factores que causan cambios en la atmósfera están: la temperatura, la cantidad de radiación solar, el viento y la humedad

Factores edáficos Factores que regulan el suelo y que influyen en la distribución y abundancia de flora y fauna. Son factores edáficos del suelo: la textura del material (arena, grava, arcilla, limo), su estructura, porosidad, cantidad de materia orgánica, y nivel freático, entre otros.

Factores topográficos Tanto la longitud como la inclinación de un terreno afectan sustancialmente la tasa de erosión hídrica pluvial. Los dos efectos han sido evaluados por separado en las investigaciones y están representados en la USLE por los factores L y S, respectivamente.

4. ¿Cuáles son las variables que afectan el rendimiento de los constituyentes químicos en plantas medicinales? La temperatura, la luz, las precipitaciones, el suelo, el viento y la atmosfera.

5. En qué casos se justifica el abastecimiento exclusivo de plantas medicinales obtenidas por recolección silvestre y ¿Cuáles son las ventajas del cultivo de plantas medicinales? Se justifica el abastecimiento exclusivo de plantas medicinales por recolección silvestre en dos casos:


o o

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Cuando se recolecta racionalmente es decir practicando la sostenibilidad Cuando una planta medicinal es netamente de un solo lugar

Ventajas del cultivo de plantas medicinales: Contribuyen esencialmente en los cuidados de la salud, o Proveen una importante fuente de ingreso a recolectores rurales e industria de productos o herbales, farmacéuticos y fragancias. (6) 6. Ejemplos de adulteraciones de plantas medicinales. Los adulterantes o las adulteraciones o falsificaciones representan un problema grave que involucra a toda la cadena de producción-comercialización (recolectores, cultivadores, acopiadores, establecimientos comercializadores, etc.) y donde se involucran desde la falta de controles inherentes para la correcta identificación botánica de una determinada especie, hasta la ausencia o ignorancia total de controles hasta que el producto llega a la Farmacia; de allí la importancia de acciones sistematizadas a fin de validar los caracteres macroscópicos, microscópicos y cromatográficos, a fin de detectar aquellas anormalidades más frecuentes de observar en la práctica cotidiana, junto a casos en que pueda existir confusión entre especies. Teniendo en cuenta de que una adulteración es delito, una confusión constituye un error, pero ambas pueden resultar peligrosas para la salud de la población. (7)

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Cascante A. museo costa rica herbario. [Online].; 2008 [cited 2018 abril 21. Available from: http://www.museocostarica.go.cr/herbario/pdf/Guia-para-recolectar.pdf . 2. Ares. [Online]. [cited 2018 abril content/uploads/2015/06/FLT-ARES.pdf .

21.

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http://filtra.com/wp-

3. Zempoaltecatl M. adaptación de una transmisión mecánica a un molino de martillos. tesis. México: intituto politécnico nacional, escuela superior de ingenieria mecánica y eléctrica; 2013. 4. gémina. [Online]. [cited 2018 abril 21. https://gemina.es/files/catalogue/pdf/21_Molino_Martillo.pdf .

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5. Molienda y homogenización con molinos de cuchillas. [Online].; 2011 [cited 2018 abril 21. Available from: http://media.firabcn.es/content/areaExpositor/S013011/1000662/featureProduct/889211/bro chure_knife_mills_es.pdf . 6. Estándar Internacional para la Recolección Silvestre Sostenible de Plantas Medicinales y Aromáticas (ISSC-MAP). Disponible en: http://www.floraweb.de/map-pro/flyer_spanish.pdf 7. Control de calidad de productos vegetales con fines farmacéuticos. Disponible en: http://www.intramed.net/contenidover.asp?contenidoID=57478


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CUESTIONARIO PRACTICA 3 1. Proponga el método de extracción y el tipo de preparado, para la obtención de un extracto de una droga rica en flavonoides, taninos y aceites esenciales Las hojas de llas plantas seleccionadas se sumergieron en agua corriente y se frotaron manualmente con la finalidad de eliminar residuos de polvo y materia orgánica. Posteriormente sometidas a secado en una estufa a una temperatura de 45ºC hasta alcanzar una consistencia crocante aproximadamente un periodo de 7 días. L uego se efectuó una molienda con el propósito de obtener un granulado deseada para facilitar así el proceso de extracción. Lo triturado fue empacada en bolsas de polietileno selladas herméticamente y posteriormente almacenadas a 10 ºC antes de usar. Se pesaron 500 g del triturado, luego se realizó una extracción secuencial, para lo cual a las muestras secas y molidas se eliminó clorofila y lípidos con éter de petróleo, y el marco se extrajo con metanol al 70%, para garantizar la extracción de los más polares, el extracto obtenido se evaporó con calentamiento no superior a 50 ºC y se realizó extracciones sucesivas con éter etílico, acetato de etilo. De esta manera los flavonoides apolares quedaran en la fase etérea, los medianamente polares en la fase acetato de etilo y los más polares en la fase acuosa resultante. Metanol y agua como disolventes polares, acetato de etilo como medianamente polar y éter etílico como disolvente no polar. Al ser evaluado el extracto obtenido por ensayos cualitativos de reconocimiento de flavonoides (ensayo de Shinoda) s e confirmará la presencia de flavonoides en cada uno de los extractos, siendo muy positiva y positiva la presencia de flavonoides en el extracto metanólico y acuoso. Se utilizó como reveladores: luz UV a 366 nm y vapores de amoniaco. Las técnicas cromatografías utilizadas para la detección de flavonoides serán: cromatografía de capa fina y cromatografía de papel. (1) Para la extracción de aceites esenciales, se haría con extracción con disolventes volátiles, la muestra seca y molida se pone en contacto con disolventes orgánicos tales como alcohol y cloroformo, estos solubilizan y extraen otras sustancias tales como grasas y ceras, obteniéndos e al final una oleorresina o un extracto impuro. Un revelado con yodo para aceites esenciales. (2) Métodos por arrastre de vapor. Una vez seleccionada la destilación por arrastre con vapor como el procedimiento a desarrollar por ser apropiada y económico, fácil de implementar y no requerir de tecnologías sofisticadas, debió puntualizarse en una de sus tres categorías: Destilación con agua, destilación con vapor saturado o destilación con vapor seco. Se escoge la destilación con vapor saturado, puesto que en ésta es mayor la difusión del vapor a través de las membranas vegetales y es menor la desnaturalización del producto por hidrólisis o quemado. (3)

2. Indique las ventajas y desventajas de los siguientes métodos de extracción de Soxhlet, ultrasonido, “phytonics process” y fluidos supercríticos.

Método de extracción de: Soxhlet Ventajas: Gran capacidad de recuperación e instrumentación simple. No se requiere filtración posterior. El disolvente orgánico se evapora quedando sólo disolvente orgánico se evapora quedando sólo analito. El disolvente y la muestra están en contacto íntimo y repetido. De manera que se mejora muchísimo la extracción porque siempre se emplea un disolvente limpio. El disolvente proviene de una condensación luego es líquido y está caliente. Favorece la solubilidad del analito. Desventajas: Es un proceso lento e imposible de acelerar. Se requiere gran cantidad de disolvente. Inaplicable a analitos termolábiles, que se descompongan con el calor o reaccionen. Necesidad de etapa final de evaporación. El método no depende de la matriz. (4)

Método de extracción de: Ultrasonido Ventajas del Ultrasonido


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Alto poder de penetración: Lo que permite localizar discontinuidades a una gran profundidad (varios metros). Buena resolución: Siendo esta característica la que determina que puedan diferenciarse los ecos procedentes de discontinuidades próximas en profundidad. Permite la interpretación inmediata, la automatización y el control del proceso de fabricación. No utiliza radiaciones perjudiciales para el organismo humano y no tiene efectos sobre el material inspeccionado.

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Accesibilidad: Solo requiere acceso por un lado del material.

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Seguridad: No requiere condiciones especiales de seguridad.

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Alta sensibilidad: Permitiendo la detección de discontinuidades extremadamente pequeñas. (5)

Desventajas del Ultrasonido 

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Está limitado por la geometría, estructura interna, espesor y acabado superficial de los materiales sujetos a inspección. Localiza mejor aquellas discontinuidades que son perpendiculares al haz de sonido. Las partes pequeñas o delgadas son difíciles de inspeccionar por este método. El equipo puede tener un costo elevado, que depende del nivel de sensibilidad y de sofisticación requerido. El personal debe estar calificado y generalmente requiere de mucho mayor entrenamiento y experiencia para este método que para cualquier otro de los métodos de inspección. La interpretación de las indicaciones requiere de mucho entrenamiento y experiencia de parte del operador.

Método de extracción de: Fluido supercrítico En el punto crítico las propiedades de la fase líquida y gaseosa se hacen tan s imilares como para ser indistinguibles, gran difusividad (propia de los gases) 5 alta densidad (cercana a la de los líquidos, de 100 a 1000 veces mayores que la de los gases). En estas condiciones los FSC tienen propiedades de transferencia de materia similares a las de los gases y características de solvatación similares a las de los líquidos. Además, la alta difusividad les permite penetrar en los materiales sólidos, y su densidad los hacen capaces de disolver solutos. Son compresibles y por tanto pequeños cambios de presión pueden originar importantes cam bios de densidad y poder disolvente. Se dice que un fluido es cuasi: crítico cuando se encuentra en cercanías de su punto crítico, donde se empiezan a producir grandes variaciones de las propiedades físicas y de transporte. (5)

3. Defina y explique la importancia en el proceso de extracción de los siguientes factores: tiempo de extracción, tipo de disolvente, pH del solvente, temperatura de extracción, tamaño de partícula, tamaño de muestra y solvente de extracción. Tiempo de extracción: tiempo en el cual la droga se encuentra dentro del solvente extractor, es importante ya que de ello depende la cantidad de metabolito obtenido.


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Tipo de disolvente: característica del solvente usado para la extracción de los constituyentes químicos, es importante ya que depende de la afinidad de la droga por este. pH del solvente: medio de carácter acido, básico o neutro en el cual se encuentra la droga, importante para evitar degradación de algunos constituyentes químicos. Temperatura de extracción: referido a la temperatura en la cual se encuentra el solvente para la extracción de metabolitos, importante ya que puede aumentar o reducir la velocidad de extracción. Tamaño de partícula: medida en la cual se encuentra la droga, importante ya que un menor tamaño indica una mayor superficie de contacto. Tamaño de muestra: característica de la droga usada, importante ya que de acuerdo al tamaño se puede estimar la cantidad de metabolitos extraídos. Solvente de extracción: solvente que sirve para extraer los constitu yentes químicos, importante para la extracción de metabolitos de la droga. (6)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Tenorio M. Flavonoides extraídos de la cascara de naranja tangelo (Citrus recuticulata x Citrus paradisi) y su aplicación como antioxidante natural en el aceite vegetal sacha inchi (Plukenetia volubilis). scientia agropecuaria. 2016 noviembre; 7(4). 2. Peredo H,Palou E, Lopez A. Aceites esenciales: métodos de extracción. San andrés Cholula : Universidad de las américas puebla , ingeniería química y alimentos; 2009. 3. Gonzales A. Obtención de aceites esenciales y extractos etanolicos de plantas del amazonas. trabajo final. Bogota : Universidad Nacional Sede Leticia , Tecnología en Alimentos; 2004. 4. REGNAULT C, P. Bernard, V. Charles. Biopesticidas de origen vegetal. Madrid, España: Ediciones Mundi-Prensa; 2004. 5. BERDONCES I SERRA Josep LJuis. Gran enciclopedia de las plantas medicinales, Tomo I. Tikal Ediciones, Impreso en la Unión Europea; 19. 6. CODELCOEDUCA. Extracción por solventes (SX). Citado el 5 de abril de 2018. Disponible en: https://www.codelcoeduca.cl/procesos_productivos/tecnicos_lixiviacion_extraccion.asp

CUESTIONARIO PRACTICA 4


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1. Describa las diferencias y semejanzas entre la recolección de drogas vegetales con fines industriales y la recolección de drogas con fines de estudio farmacognóstico. DIFERENCIAS En el estudio farmacognóstico 

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El mejor momento para la recolección (la temporada u horas del día óptimas) debe determinarse basándose en la calidad y la cantidad de los componentes con actividad biológica y no el rendimiento total en materia vegetal de las partes de las plantas medicinales de interés. (1) La muestra botánica es la proporción terminal de una rama de aproximadamente 30-35 cm de longitud. Se realiza un corte limpio con ayuda de tijeras. (2) En la recolección se debe tomar nota de la localidad en la cual se está haciendo la recolección, con ayuda de un GPS, Se anota el n ombre científico de la especie y la familia botánica, rasgos morfológicos. (2) Se registra fotográficamente el área donde fue hallada la(s) planta(s) o fragmento, también tome una foto de la planta completa de la que colecta la muestra con testigo métrico (3) Hace uso del embalaje final, guarde el paquete de pliegos prensados y secos en bolsa plástica gruesa, no olvide incluir las bolsas de flores y frutos sin prensarlos. Ciérrela herméticamente evitando que entre humedad a las evidencias y las destruya. (3)

En el ámbito industrial. 

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Las prácticas de recolección deben garantizar la supervivencia a largo plazo de las poblaciones silvestres y de los hábitats a los que se asocian. Debe determinarse la densidad de población de la especie de interés en los lugares de recolección, evitándose la recolección de especies que sean escasas o poco comunes. (1) Se consideran plantas de uso industrial todas aquellas que, tras la recolección de la parte útil ésta necesita someterse a un proceso de tratamiento para la obtención de un producto final diferente. (4) Dichas especies se cultivan de forma masiva y entran a formar parte de los grandes sistemas de producción. El papel, los tejidos o los productos de cosmética son algunos ejemplos, pero hay más. (4)

SEMEJANZAS 

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Durante la recolección, debe procurarse eliminar las partes de la planta que no sean necesarias, así como las materias extrañas (especialmente, las malas hierbas tóxicas). Las materias vegetales medicinales descompuestas deben desecharse. (1) Las materias vegetales medicinales deben recolectarse durante la temporada o período óptimos para asegurar la calidad óptima tanto de las materias primas. (1) Los utensilios de recolección, como machetes, tijeras, sierras e instrumentos mecánicos, deben mantenerse limpios y en condiciones adecuadas. Las piezas que entran en contacto directo con las materias vegetales medicinales recolectadas no deben tener lubricante en exceso ni otros contaminantes. (2)

2. Esquematice el proceso de obtención de un extracto estandarizado y señale la importancia para la industria de productos naturales. Cite ejemplo.


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Los extractos son de mucha importancia en la actualidad en la industria de los productos naturales debido a que muchos de estos productos se comercializan como materia prima sin darle un valor agregado, por lo que al aplicar un método extractivo a estos productos se estaría fortaleciendo su uso de manera más práctica y dándole así un mayor valor. Ejemplo: Una de ellas es el uso de extractos naturales para el tratamiento y erradicación de plagas. Las plantas en su evolución han desarrollado mecanismos de defensa contra insectos, hongos, bacterias y otros organismos nocivos y los m etabolitos secundarios producidos por ellas constituyen una de esas barreras. (5)

3. ¿Qué factores críticos afectan y cómo influyen en el control de calidad de los productos naturales? El control de calidad de productos naturales permite asegurar la identidad de la droga, comprobar su estado de conservación, determinar la cantidad exacta de principios activos y detectar posibles adulteraciones y falsificaciones. (6) Los factores críticos que afectan el control de calidad de productos naturales son los siguientes: o

o

o

Composición química compleja: Influye en el control de identidad en la determinación de sus características macroscópicas y microscópicas; y determinación cualitativa de sus principios activos. Desconocimiento de los componentes activos: Influye en la cuantificación de sus principios activos. Acción sinérgica de los componentes: Influye en la determinación de su actividad farmacológica. (6)

4. Describa los equipos utilizados para el proceso de concentración de extractos a escala industrial. El equipo de EFS permite realizar extracciones con CO2 supercrítico a escala de laboratorio. Dicho equipo se empleó en el proceso de obtención de extractos de interés para la industria de alimentos a partir de diferentes muestras, a saber: semillas de guayaba (Psidium guajava), rizomas de jengibre (Zingiber officinale), frutos de limoncillo llanero (Siparuna thecaphora) y café


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tostado (Coffea arábica). La muestra se depositaba en el recipiente extractor. Una vez alcanzadas las condiciones de trabajo (T y P), éstas se mantenían durante un tiempo de extracción de 1 h; posteriormente se procedía a despresurizar el extractor obteniéndose el respectivo extracto libre de disolvente. (7) Mediante el Extractor de Aceites, es posible obtener el aceite esencial que contienen las plantas (ya sea que se encuentre en las flores, raíces, semillas, hojas o en la cáscara de los frutos). El método utilizado para la extracción de los aceites esenciales es la destilación por arrastre de vapor. A partir de este método, la materia prima a tratar solamente entra en contacto con vapor de agua, sin la necesidad de agregar ningún solvente químico, lo que asegura la alta calidad y pureza del aceite esencial extraído, el equipo extractor de aceites esenciales ha sido diseñado para obtener la máxima pureza en el proceso de destilación. Es por esto que los materiales que entran en contacto con la materia prima no contaminan el producto . (8)

5. Mencione qué producto natural peruano bajo la forma de extracto está incluido en la USP y esquematice su procedimiento de elaboración.

Recolección

'La Cordillera del Bálsamo" y zonas cálidas húmedas del Perú (9) Género: Myroxylum

Identificación

Especie: Myroxylum balsamum L. Familia: Fabaceae

Selección Almacenamiento de la droga

Ventanas” en la corteza Guardar en frascos y liberardeldelárbol, % aplicar a la corteza de agua calor e impurezas (10) del árbol y colocar una tela por 15 días. “


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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Medicamentos Esenciales y Productos de Salud. [Online].; 2003 [cited 2018 abril 14. Available from: http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Js5527s/5.4.html. 2. Guia de recolección y preservación de muestras botánicas en campo. [Online].; 1999 [cited 2018 abril 14. Available from: http://herbario.udistrital.edu.co/herbario/images/stories/Guia_Para_la_Recoleccion_de _Material_Vegetal.pdf. 3. Guía de recolección y manejo de plantas psicotrópicas y material vegetal, para estudio botánico con fines forenses. [Online].; 2005 [cited 2018 abril 14. Available from: http://www.medicinalegal.gov.co/documents/20143/40473/Gu%C3%ADa+para+la+rec olecci%C3%B3n+y+manejo+de+plantas+psicotr%C3%B3picas+y+material+vegetal+p ara+estudio+bot%C3%A1nico+con+fines+forenses.pdf/e5bdc9d4-3365-f150-02a436881f7182ef. 4. Plantas para productos elaborados uso industrial. [Online]. [cited 2018 abril 14. Available from: http://www.rjb.csic.es/jardinbotanico/ficheros/documentos/pdf/itinerarios/plantasparala vida/09Usoindustrial.pdf. 5.Quiminet.com. El uso de extractos naturales en el cuidado de las plantas y la agricultura. Actualizado el: 30 de noviembre de 2012. Citado el: 14 de abril de 2018. Disponible en: https://www.quiminet.com/articulos/el-uso-de-extractos-naturales-en-elcuidado-de-las-plantas-y-la-agricultura-3352227.htm 6. Control de drogas. Disponible en: https://portal.uah.es/portal/page/portal/epd2_asignaturas/asig30645/presentacion/Lecc i%F3n%203-Diapos.pdf 7. Araújo J.M.A., Sandi D. (2006). Extraction of Coffee Diterpenes and Coffee Oil Using Supercritical Carbon Dioxide. Food Chemistry 101, 10871094. 8. Cicció J.F., Gómez J., (2002). Volatile Constituents of the Leaves of Siparuna thecaphora (Siparunaceae) from Turrialba-Costa Rica. Rev. Biol. Trop. 50, 963-967. 9. United States Pharmacopcial Convention Inc. 1990 The Pharmacopcia of. The United States of America (U.S.P. XXII) Mack Printing Company, USA. 10. Faoaga, C.; Lobo, E.; Oliva, A.1987. Elaboración de preparados farmacéuticos con propiedades repelentes a partir de la resina y la corteza procesada (estoraque) del Myroxilon Balsamun var. Pereirae. Trabajo de graduación presentado para optar al grado de Licenciado en Química y Farmacia en la Universidad de El Salvador. San Salvador, El Salvador.

CUESTIONARIO PRACTICA 5 1. Fundamenta una propuesta de análisis fitoquímico (tabla n°1) para una droga rica en lípidos (ej. Semillas oleaginosas), ¿Qué tipo de cromatografía, sistema de solventes, métodos de separación, purificación y determinación estructural se aplicaría? Tipo de cromatografía:


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Cromatografía liquida de alta eficacia (HPLC) Sistema de solventes: n-Hexano - Acetato de etilo (4:1)

Métodos de separación:  

Extracción en soxhlet con hexano o éter etílico Extracción de la muestra con HCl 3N

Purificación:  

Cromatografía de capa fina Cromatografía liquida de alta eficacia (HPLC)

Determinación estructural:   

Método químico de Lieberman-Buchardat Determinacion del índice de Iodo Índice de saponificación

2. Indique la relación que existe entre el tamizaje fitoquímico y tamizaje farmacológico, diferencia entre ambos y la importancia del tamizaje farmacológico en Farmacognosia. Diferencias: El tamizaje fitoquímico permite determinar cualitativamente los principales grupos químicos presentes en una planta y a partir de allí, orientar la extracción y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los grupos de mayor interés. Los resultados del tamizaje fitoquímico constituyen únicamente en una orientación y debe de interpretarse en conjunto con los resultados del screening farmacológico. Semejanzas: Así cuando una planta revela acción sobre el sistema nervioso central durante el tamizaje farmacológico y presencia de alcaloides en el tamizaje fitoquímico, es bastante probable que la acción farmacológica se deba a la fracción alcaloidal. De la misma manera, el hecho de evidenciarse acción antiinflamatoria en el tamizaje farmacológico y la presencia de flavonoides en el tamizaje fitoquímico, puede dar lugar a procesos de aislamiento y sometimiento a pruebas más específicas de estos compuestos. Importancia del tamizaje farmacológico: La confirmación de la actividad farmacológica o antimicrobiana justifica la continuación de los est udios. Si el tamizaje farmacológico ha revelado propiedades específicas de una nueva sustancia, deben solicitarse patentes para el principio activo en cuestión, a fin de asegurar los derechos correspondientes. La protección de la patente de los principios activos es de vital importancia, ya que solo con ella se puede justificar económicamente las inversiones de tiempo y material que supone del desarrollo científico de una planta para determinar sus propiedades medicinales. (1)

3. Describa el fundamento y proponga una aplicación de los siguientes métodos: cromatografía “Flash”, cromatografía de intercambio iónico, HPLC.

La Cromatografía FLASH es un método de purificación de compuestos de síntesis que se basa en Cromatografía de Líquidos de Media Presión, a diferencia de los sistemas tradicionales por gravedad en columna que son mucho más lentos e ineficientes. Ejemplo: la separación de una mezcla de dietil y dimetil ftalato en condiciones isocráticas (ciclohexano/etil acetato 85:15). A un caudal de 30 mL/min la contrapresión generada por las columnas de 50, 30 y 15 mm es respectivamente de 0.34, 1.03 y 19.65 bar. (2) La cromatografía de intercambio iónico (o cromatografía iónica) es un proceso que permite la separación de iones y moléculas polares basado en las propiedades de carga de las moléculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molécula cargada, incluyendo proteínas grandes y nucleótidos y aminoácidos pequeños.


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La cromatografía líquida (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase estacionaria es sílice que se ha tratado con RMe2SiCl. La fase móvil actúa de portador de la muestra. (3) Esta técnica está indicada para la separación de compuestos orgánicos semivólatiles. Hidrocarburos Poliaromáticos (PAHs), Aminoácidos: OTA, Ácido Fólico, etc. La Cromatografía de intercambio iónico se emplea para medir los niveles de Hemoglobina glucosilada (HbA1c), porfirinas y para purificar agua y producir agua desionizada en pequeñas cantidades.(3)

4. ¿Qué es un bioensayo y cuál es su importancia en Farmacognosia? Un bioensayo es el uso de un organismo VIVO como un agente de prueba para la presencia o concentración de un compuesto químico o un efecto ambiental. Cualquier objeto orgánico o inorgánico donde se van a aplicar los diseños experimentales con el fin de observar una respuesta, Compuestos químicos, extractos, fuente de compuestos o materia que pueden generar una respuesta biológica en los organismos de un ecosistema. Puede ser material de prueba, el sedimento marino, pesticidas, materia orgánica, importancia para determinar la toxicidad y la bioactividad de constituyentes químicos. (4) Bioensayos en plantas medicinales Bioensayos en plantas medicinales son pruebas en las que se usan organismos vivos para detectar o medir la presencia y efectos de una o más substancias toxicas, así como determinar el límite de tolerancia de dichas substancias con respecto a los organismos. TIPOS DE BIOENSAYOS El efecto se puede evaluar a diferentes niveles (subcelular, enzimático, morfológico, fisiológico, histológico, sistémico, poblacional o de la comunidad) y clasificarse en cualitativo (cantidad de organismos afectados) o gradual (grado de alteración). POR EL LUGAR DE DESARROLLO. BIOENSAYOS EN LABORATORIO: Los bioensayos se pueden realizar en el laboratorio bajo condiciones controladas o en el campo, es decir, directamente en el medio natural. Los bioensayos de laboratorio pueden ser mono o multiespecificos. Los monos específicos están diseñados para obtener información acerca de los efectos de la calidad. BIOENSAYOS IN SITU: Los bioensayos de campo consisten en la exposición de una o más poblaciones a la acción directa; para ello se utilizan contenedores que permiten mantener la población en estudio en un espacio adecuado, sin afectar su relación con el medio. POR EL TIEMPO DE DURACIÓN Las pruebas pueden durar varios periodos de tiempo, pero las de 96 horas son las más comunes. Los individuos son expuestos a concentraciones crecientes del tóxico para determinar cambios en el organismo. Son pruebas dirigidas en laboratorio para determinar los efectos de toxicidad sobre algunas especies de organismos acuáticos, Los bioensayos estáticos se usan para organismos de prueba de fitoplancton, zooplancton y peces, porque no es necesario renovar su solución a prueba antes de 96 hrs. Bioensayos con renovación periódica: Determinan la toxicidad comparativa de diferentes desechos o efluentes, así como la sensibilidad d e los organismos a un material dado, determinan también los requerimientos en corto plazo de oxígeno, pH, temperatura y otros factores ambientales. Bioensayos de flujo continuo Se realizan con la r enovación continua o casi continua de las diluciones sometidas al ensayo, con el fin de mantener casi constantes las concentraciones de las sustancias toxicas activas para los extractos acuosos y etanolitos, indican que los extractos acuosos poseen menor actividad que los e tanolitos y entre estos los de Bidens pilosa L. mayor actividad. nos llevan a afirmar que este bioensayo debe ser utilizado como


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soporte de la información etnobotánica, ya que reduce al mínimo la probabilidad de que especies vegetales sin propiedades bioactivas en el organismo humano se colecten para estudios farmacológicos y químicos. (5)

5. Indique cuál es su importancia y aplicación de pruebas biológicas de mesa de laboratorio (Bench-top bioassays) en el descubrimiento de constituyentes químicos bioactivos.? Es importante para determinar la especie e indagar sobre algunos aspectos de la biología básica del organismo (nutrición, ciclo de vida, condiciones óptimas de cultivo y manejo), puesto que es esencial reunir información acerca de los diferentes aspectos de la fisiología de las especies potencialmente aptas para tal fin. Los bioensayos deben ser simples, rápidos, reproducibles y económicos, También es importante la estimación de la toxicidad de un ensayo de laboratorio está determinada por el diseño experimental y los parámetros a evaluar. A pesar de que no corresponden a efectos tomados directamente en el campo, las condiciones particulares bajo las cuales son llevados a cabo los ensayos pueden utilizarse para predecir el efecto nocivo de un tóxico. En el laboratorio, la toxicidad se mide bajo condiciones cuidadosamente controladas que permiten obtener resultados precisos, bajo condiciones estandarizadas que aseguran la reproducibilidad en la estimación. Existen muchas formas de determinar la t oxicidad, y aunque los efectos bioquímicos, fisiológicos, reproductivos y de comportamiento son de gran utilidad, el indicador comúnmente más utilizado es la mortalidad del organismo de prueba. La mayoría de las pruebas de toxicidad suministran una estimación de la dosis (o concentración en el alimento, aire o agua) que produce una respuesta tóxica a un nivel del 50%. Por ejemplo, la dosis letal media es la dosis o concentración que mata al 50% de la población (CL50). Otro indicador que ha ganado gran popularidad es la dosis o concentración más alta a la cual no se observa ningún efecto (NOEC, No Observed Effect Concentration). De acuerdo a investigaciones previas realizadas se determinaron cuatro criterios basados en la CL50 para la clasificación de los extractos, otorgando los niveles de actividad consignados en la siguiente tabla: TABLA

5.

Clasificación

de

la

actividad

biológica

de

acuerdo

a

la

CL50

OBTENCIÓN Y EVALUACIÓN DE EXTRACTOS BIOACTIVOS PRESENTES EN SEMILLAS DE Annona muricata DE LA REGIÓN CAFETERA La aplicación en los avances de la tecnología de separación y la metodología espectral han simplificado enormemente la ciencia de la fitoquímica. Los nuevos desafíos radican en el aislamiento de los fitoquímicos traza de la naturaleza que ejercen diversas bioactividades y, por lo tanto, presentan potencial utilidad para la humanidad. Para ayudar a cumplir estos desafíos en el descubrimiento de nuevos compuestos antitumorales de plantas, se han desarrollado dos ensayos biológicos sencillos de laboratorio que convenientemente aceleran el cribado y el fraccionamiento dirigido a la actividad de extractos activos de plantas.


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Simple Bench-Top Bioassays (Brine Shrimp and Potato Discs) for the Discovery of Plant Antitumor Compounds

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Bruneton J. Plantas Medicinales. Fitoquímica y Farmacognosia. Editorial Acribia. Zaragoza. 2001. 2. Kuklinski C. Farmacognosia. Estudio de las Drogas y Sustancias Medicamentosas. Ediciones Omega. Barcelona. 2000.} 3. Lock de Ugaz O. Investigación Fitoquímica: Métodos en el Estudio de los Productos Naturales. Fondo Editorial de la Universidad Católica del Perú. Lima. 1994. 4. Grupo innovación. [Online].; 2018 [cited 2018 abril 21. Available from: http://www.ub.edu/stat/GrupsInnovacio/Statmedia/demo/Temas/Capitulo13/B0C13m1t 10.htm. 5. Correa F. oceonología. [Online]. [cited 2018 abril 21. Available from: oceanologia.ens.uabc.mx/~felipecorrea/bioensayos/Documentos/Apuntes/Apuntes.doc . 6. YESID FLÓREZ LONDOÑO. OBTENCIÓN Y EVALUACIÓN DE EXTRACTOS BIOACTIVOS PRESENTES EN SEMILLAS DE Annona muricata DE LA REGIÓN CAFETERA. Available from: http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/handle/11059/1828/63441F634.pdf?seq uence=1

Cuestionario de La 1 a La 5

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