Desain Validasi Metode Uji Nama : Miqdad Rifa’i NIM : 1520037 Kelas : 2E PMIP
Validasi Metode Uji Penetapan Kadar Natrium Klorida (NaCl) dalam Garam Konsumsi Beriodium Secara Titrimetri
A. Ruang Lingkup Standar ini menetapkan persyaratan mutu dan metode uji untuk garam konsumsi beriodium. Jenis Metode Uji: Pengujian Metode Absolut SNI 3556:2016
B. Cara Kerja a. Prinsip
Pembentukan endapan AgCl menggunakan AgNO3 dengan petunjuk Kalium Kromat dalam larutan netral atau sedikit basa. b. Reaksi Pengasaman 2NaCl + H2SO4 Na2SO4 + 2HCl Penetralan HCl + NaOH NaCl + H2O Titrasi AgNO3 + NaCl AgCl Putih + NaNO3 AgNO3 + K 2CrO4 Ag2(CrO4) Merah Bata + KNO3 c. Peralatan -Neraca Analitik (Ketelitian 0.1 mg) -Buret (Ketelitian 0.1 mL) -Erlenmeyer 250 mL -Labu Ukur 500 mL -Pipet Volumetrik 10 mL -Gelas Piala
d. Bahan -Air Suling -Garam Konsumsi Beriodium -Larutan Natrium Klorida (NaCl) 0.1 N -Larutan Perak Nitrat (AgNO3) 0.1 N -Larutan Kalium Kromat (K 2CrO4) 5% -Larutan Asam Sulfat (H2SO4) 1 N -Larutan Natrium Hidroksida (NaOH) 4 N -Larutan Indikatro Fenolftalin e. Persiapan Uji A) Preparasi Sampel Timbang contoh uji ± 50 g, tambahkan air suling 200 mL, aduk kemudian saring dan tampung dalam labu ukur 500 mL, bilas dengan air suling dan tepatkan hingga tanda garis. B) Pembuatan Larutan
Larutan Natrium Klorida (NaCl) 0.1 N 3 g NaCl dilarutkan dalam 500 mL air suling Larutan Perak Nitrat (AgNO3) 0.1 N 17 g AgNO3 dilarutkan dalam 1000 mL air suling Indikator Kalium Kromat (K 2CrO4) 5% 5 g K 2CrO4 dilarutkan dalam 100 mL air suling Larutan Asam Sulfat (H2SO4) 1 N Tuangkan sedikit demi sedikit 7 mL H2SO4 pekat (H2SO4 95-97%, bj 1.84) ke dalam gelas piala 300 mL yang berisi 100 mL air suling. Pindahkan ke dalam labu ukur 250 mL dan encerkan sampai tanda garis. Larutan Natrium Hidroksida (NaOH) 4 N 160 g NaOH dilarutkan dengan air suling dalam gelas piala 300 mL. Tuangkan ke dalam labu ukur 1000 mL, encerkan dengan air suling sampai tanda garis dan kocok sampai homogeny.
Larutan Indikator Fenolftalein 0.1 g Fenolftalein dilarutkan dengan alkohol 70% dalam labu ukur 100 mL sampai tanda garis dan kocok sampai homogen. f. Prosedur Uji A) Prosedur Uji Standarisasi
Dipipet Volume tertentu (tercatat) dari larutan NaCl 0.1 N yang telah dibuat ke dalam Erlenmeyer 250 mL. Asamkan dengan beberapa tetes H2SO4 1 N sampai larutan bereaksi asam terhadap Indikator Fenolftalein. Netralkan dengan NaOH 4 N. Encerkan dengan air suling sampai 100 mL.
Tambahkan 1 mL larutan K 2CrO4 5%.
Titrasi dengan larutan AgNO3 0.1 N sampai terbentuk warna merah bata. B) Prosedur Uji Penetapan Kadar Natrium Klorida (NaCl) dalam Garam konsumsi beriodium.
Pipet 2 mL larutan sampel yang telah dibuat ke dalam Erlenmeyer 250 mL Asamkan dengan beberapa tetes H2SO4 1 N sampai larutan bereaksi asam terhadap Indikator Fenolftalein. Netralkan dengan NaOH 4 N.
Encerkan dengan air suling sampai 100 mL.
Tambahkan 1 mL larutan K 2CrO4 5%.
Titrasi dengan larutan AgNO3 0.1 N sampai terbentuk warna merah bata. Rumus: Perhitungan Kadar NaCl bahan asal
ℎ (%) × × × 58. 5 ×100
Keterangan: V adalah volume AgNO3 yang diperlukan pada penitaran, yang dinyatakan dalam milliliter (mL) N adalah Normalitas AgNO3, dinyatakan dalam Normalitas (N) Fp adalah faktor pengenceran 58.5 adalah bobot molekul NaCl W adalah bobot contoh uji, yang dinyatakan dalam milligram (mg) Perhitungan Kadar NaCl atas dasar bahan kering
()(%) 100 100×
Keterangan: X adalah kadar NaCl bahan asal yang dinyatakan dalam persen (%)
C. Parameter dan Tahapan Validasi Metode Uji
No.
Parameter Uji
Syarat Keberterimaan %RSD < 5%
Bahan Uji
Keterangan (sumber)
1.
Presisi
Sampel
SNI 3551:2012
2.
Akurasi
%Recovery (97% - 105%)
sampel + spike standar protein
MDL ( Method Detection Limit )
Larutan warna ungu
Blanko sampel + spike standar protein
Riyanto,Ph.D.2014.Validasi dan verifikasi metode uji.Deepublish, Yogyakarta Candra Irawan .2009. Pengantar Kimia Organik
3.
4.
LOQ ( Limit of Quantitation)
%RSD < 5%
Blanko sampel + spike standar protein
5.
Robutness
Fhitung < Ftabel thitung < ttabel
Sampel
6.
Estimasi ketidakpastian pengukuran
U < 10% Nilai uji
Sampel
II.Politeknik AKA bogor SNI 3551:2012 Riyanto,Ph.D.2014.Validasi dan verifikasi metode uji.Deepublish, Yogyakarta Herawati. 2017. Desain Validasi Metode uji. Politeknik AKA, Bogor
a. Prosedur pengujian presisi Lakukan tujuh kali pengujian terhadap sampel sesuai prosedur uji, kemudian nilai %RSD ( Relative Standard Deviation) hasil pengujian dihitung menggunakan rumus sebagai berikut.
∑=
=(−) ∑ √ − % ×% Keterangan : xi adalah kadar NaCl bahan asal yang dinyatakan dalam persen (%) n adalah banyaknya pengulangan adalah nilai rata-rata kadar NaCl bahan asal yang dinyatakan dalam persen (%) s adalah nilai simpangan baku dari penetapan kadar NaCl bahan asal yang dinyatakan dalam %
̅
Syarat keberterimaan presisi yaitu %RSD < 5%
1. Prosedur pengujian akurasi Sampel Garam Konsumsi ditetapkan kadar Natrium kloridanya seban yak tujuh kali ulangan sesuai prosedur uji, kadar yang didapat merupakan kadar sampel awal (C2) Sampel yang sama diujikan sebanyak tujuh kali yang sebelumnya ditambahkan standar protein (BSA atau Bovine Serum Albumin) sebanyak 5% dari sampel, yang dinyatakan sebagai kadar spike (C1), kemudian dianalisa dan kadar yang didapat merupakan kadar sampel setelah diberi spike (C3) Nilai akurasi ditetapkan sebagai % recovery dengan rumus sebagai berikut
Rumus
% (− ) ×% Keterangan C1 adalah kadar standar protein yang ditambahkan kedalam sampel, yang dinyatakan dalam % C2 adalah kadar protein dalam sampel, yang dinyatakan dalam % C3 adalah kadar protein dalam sampel yang telah ditambahkan standar protein, yang dinyatakan dalam % Syarat keberterimaan akurasi yaitu (97% %recovery 105%) 2. Prosedur pengujian MDL ( Method Detection Limit ) Lakukan persiapan blanko sampel dengan ditambah standar protein (BSA atau Bovine Serum Albumin) sebanyak 0,02%, 0,1% dan 1%. Lakukan 10 kali pengulangan untuk masing-masing kadar standar protein, kemudian preparasi blanko standar yang telah ditambahkan standar. Tambahkan 2 mL larutan NaOH 10% dan 3 tetes larutan CuSO4 0,1%. Diamati warna yang terbentuk.
≤
≥
Syarat keberterimaan dari pengujian MDL adalah terbentuk larutan berwarna ungu
3. Prosedur pengujian LOQ ( Limit of Quantitation) lakukan penambahan standar protein (BSA atau Bovine Serum Albumin) sebanyak 1% kedalam blanko sampel, kemudian lakukan tujuh kali pengujian seperti pada prosedur uji. Kemudian nilai %RSD hasil pengujian dihitung menggunakan rumus sebagai berikut. Rumus
∑=
=(−) ∑ √ − % ×% Keterangan : xi adalah nilai kadar protein dalam sampel yang didapat dari penetapan, yang dinyatakan dalam % n adalah banyaknya pengulangan adalah nilai rata-rata kadar protein dalam sampel dari penetapan, yang dinyatakan dalam % s adalah nilai simpangan baku dari penetapan kadar protein dalam sampel, yang dinyatakan dalam %
̅
Syarat keberterimaan LOQ yaitu %RSD < 5%
4. Prosedur pengujian Robutness Lakukan penetapan kadar protein dalam mi instan dengan waktu penyulingan yang divariasikan dengan 7 kali ulangan pada masing-masing kondisi pengujian. Kemudian hasil uji dibandingkan dengan data penetapan kadar protein sesuai prosedur uji dan diolah secara statistik untuk menentukan keberterimaan presisi dan akurasi yang. Uji F untuk presisi dan uji t untuk akurasi, dengan rumus sebagai berikut.
Rumus
∑=
=(−) ∑ √ − Uji-F Hipotesis :
H0 : Presisi metode diterima H1 : Presisi metode tidak diterima
;
Kriteria uji : tolak H0 jika Fhitung>Ftabel Uji-t Hipotesis :
H0 : Akurasi metode diterima H1 : Akurasi metode tidak diterima
+(−) ( −) √ (+−)
√
Kriteria uji : tolak H0 jika thitung>ttabel Keterangan : xi adalah nilai kadar protein dalam sampel yang didapat dari penetapan, yang dinyatakan dalam % n adalah banyaknya pengulangan
̅ adalah nilai rata-rata kadar protein dalam sampel dari penetapan, yang dinyatakan
dalam % s adalah nilai simpangan baku dari penetapan kadar protein dalam sampel, yang dinyatakan dalam % s1 adalah nilai simpangan baku dari penetapan kadar protein dalam sampel dengan nilai yang lebih besar dari s2, yang dinyatakan dalam % s2 adalah nilai simpangan baku dari penetapan kadar protein dalam sampel dengan nilai yang lebih kecil dari s1, yang dinyatakan dalam % Syarat keberterimaan R obutness yaitu Fhitung < Ftabel; thitung < ttabel
5. Prosedur pengujian estimasi ketidakpastian pengukuran Lakukan tujuh kali penetapan kadar protein dalam sampel mi instan dan evaluasi hasilnya dengan estimasi ketidakpastian pengukuran kadar protein dalam mi instan. Lakukan estimasi sesuai proses berikut. a.
