Determinacion de Glucosa en Sangre

Determinación de glucosa en sangre

PRACTICA DE LABORATORIO N° 6 DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE

I.

INTRODUCCION

La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el páncreas. La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al combinarlo con el oxígeno de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que también la provocan. El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia. El mantenimiento de la glucemia, o concentración plasmática de glucosa, en los organismos superiores es fundamental para el funcionamiento de todos los órganos, al ser la glucosa un metabolito energético principal. La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a cabo por la relación insulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la produzcan (almidón, fructosa, galactosa, proteínas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa (porglucólisis, entre otras), aceleración de la glucogenogénesis y disminución de la glucogenólisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secreción de insulina, una hormona pancreática de tipo polipeptídico. En el caso de que la producción de insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, lo cual ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); así ocurre en las personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1". El diagnóstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en antecedentes, síntomas clínicos y comprobación de una hiperglucemia significativa. Las determinaciones de

BIOQUIMICA EXPERIMENTAL – INGENIERIA AMBIENTAL

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glucemia basal permiten el diagnóstico de la diabetes, pero constituyen valores puntuales y aislados en el tiempo que no reflejan los niveles medios de glucemia ni la duración de la misma. Por lo tanto, es necesario disponer de pruebas que indiquen el grado del control metabólico de la enfermedad a corto y medio plazo. Estas pruebas están basadas en el fenómeno de unión de la glucosa a diversas proteínas. Esta glucosilación tiene lugar por una reacción no enzimática y afecta tanto a proteínas de vida media corta (albúmina, hemoglobina, etc.) como de vida media larga (colágeno, mielina, etc.). La intensidad de la glucosilación depende de varios factores, siendo los más importantes los niveles medios de glucemia, la duración de la hiperglucemia, la vida media de las proteínas y la concentración de éstas. Como consecuencia, la medida de la glucosilación proteica constituye un buen marcador bioquímico del grado de compensación del enfermo diabético. En esta práctica se utilizara el método de la glucosa oxidasa y peroxidasa (GOD-- ‐POD) para medir los niveles de glucosa sanguínea de ratas diabéticas y controles. En el método GOD--‐POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la D-- ‐ glucosa a acido D--‐gluconico con formación de peróxido de hidrogeno. Este es utilizado por la peroxidasa para oxidar a la 4--‐ aminofenazona y al fenol, dando lugar a una quinonaimina coloreada. La intensidad de color será proporcional a la concentración de glucosa presente inicialmente. El esquema de la reacción es el siguiente:


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II.

OBJETIVO La presente experiencia práctica tiene como finalidad determinar los niveles de glucosa en sangre mediante el método enzimático Trinder, considerando como valores de referencia: de 0.70 a 1.10 g/L en suero o plasma y de 0.060 a 1.00 g/L en sangre total.

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III.

MATERIALES

1. Material Biológico: Suero o plasma sanguíneo. 2. Material y Equipo de laboratorio 

Gradilla y tubos de ensayo de 13x100 mm



Baño María a 37 °C

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Pipetas de 0.1 , 2 y 5 mL

Espectrofotómetro o fotocolorímetro. 3. Reactivos y soluciones: 



Reactivo de trabajo: Solución de glucosa y peroxidasa (GOD/POD), Reactivo de fenol y Reactivo 4Amino Fenazona (4AF).

IV. PROCEDIMIENTO A. Obtención de la Muestra: Se extraen de 3 a 5 mL de sangre de la vena de la flexura del codo con jeringa de 5mL y aguja hipodérmica N° 21 y se reciben un tubo de 13x 100 mm. Se deja en reposo por 10 minutos para coagulación de la sangre. Luego se centrifuga a 2


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500- 3000 rpm durante 10 minutos y se separa el suero con una pipeta descartable de plástico.

Si la muestra a utilizar fuese plasma, la muestra de sangre se coloca en un frasco pequeño conteniendo 1 mg de oxalato de potasio como anticoagulante, se mezcla agitando, se deja en reposo durante 5 minutos y luego se c entrifuga como en el caso anterior.

B. SISTEMA DE INCUBACION Componentes (mL) y proceso

Standard Muestra(suero o plasma) Reactivo de trabajo Incubar a 37 °C / 10 minutos

TUBOS

B ------------

St 0.05 ------

P ------0.05

4.0

4.0

4.0

Luego leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el equipo a cero con el blanco.

V.

RESULTADOS Y DISCUSION Los resultados de expresan en términos de gramos de glucosa por litro de sangre (g/ L) o en miligramos por decilitro de sangre (mg/dL).

Glucosa = Factor x Lectura problema Datos:

Muestra del sujeto: 0.31 (A) Patrón: 100 mg/dL Cálculos:

100 mg/dL / 0.36 Abs = 277.77(mg/dL) / Abs x 0.31 Abs = 86.11 mg/ dL


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VI.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 

Como sabemos los niveles normales de glucosa en la sangre son de 80 –120 Mg/dL, observamos en el sujeto nivel algo elevado, pero esto se puede deber a que el paciente, está ingiriendo medicamentos, los mismos que le producen una alteración en los niveles de glucosa.  La técnica utilizada en la determinación de glucosa fue muy buena pero hubo error al tomar la cantidad de reactivo por lo que se observó un color que no era tan rosa pálido, así que hay que mejorar la técnica de pipeteo ya que al parecer es muy importante para poder obtener una buena fiabilidad en el resultados.  Tener cuidado al momento de pipetear la sangre y colocarla completamente en el tubo ya que esta tiende a quedarse pegada en las paredes de las puntas.

VII.

CUESTIONARIO

1.- ¿A que se denomina estándar? Aquel compuesto que queremos evaluar en el que su concentración es conocida, llamada también patrón primario que, por su especial estabilidad, se emplea para valorar la concentración de otras soluciones. Un estándar simple, se obtiene por disolución de un único elemento o sustancia en un disolvente en el cual es soluble y con el que no reacciona.

2.- ¿Cuál es la diferencia entre suero y plasma? Suero y plasma son partes importantes de la sangre. La sangre se compone de plasma, suero, glóbulos blancos (células que combaten los cuerpos extraños) y glóbulos rojos (células que transportan oxígeno). La principal diferencia entre suero y plasma se encuentra en sus factores de coagulación. Una sustancia llamada fibrinógeno es esencial en la coagulación de la sangre. El plasma sanguíneo contiene este fibrinógeno. Básicamente, cuando se separan el suero y plasma de la sangre, el plasma aún conserva el fibrinógeno que ayuda a la coagulación, mientras que el suero es la parte de la sangre que queda después de quitar este fibrinógeno. El suero es principalmente agua que se disuelve con proteínas, hormonas, minerales y dióxido de carbono. Fuente importante de electrolitos.


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El plasma es un líquido amarillo y claro que es parte de la sangre. Se encuentran en las linfas o en fluidos intramusculares, es la parte de la sangre que contiene fibrina y otros factores de coagulación, hace el 55% del volumen total de sangre. Su principal componente es el agua.

3.- ¿Por qué la muestra debe provenir de pacientes en ayunas? Se solicita venir en ayuno (no haber ingerido ningún tipo de alimento) en las últimas 8 a 12 horas. No se debe exceder de tales para horas para una correcta interpretación de os resultados de Laboratorio de Glucemia Basal, es decir la cantidad de glucosa que puede determinarse en la sangre por la mañana, después del descanso nocturno.

4.- ¿A qué niveles de glucosa sanguínea se sospecha de estado patológico en el metabolismo de carbohidratos? Estado patológico hace referencia a la enfermedad. Y una de esas patologías es la diabetes, los valores normales están entre 65-70 a 110 mg/dl, cuando se superan dichos valores se empieza con problemas de diabetes.

VIII.

BIBLIOGRAFIA  

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Keilin, D. Hartree, E.F., Biochem. J. 42 , 250 (1948). Passey, R.B., Gillum, R.L., Fuller, J.B., Urry, F.M., Giles, M.L., Evaluation and Comparison of Ten Trinder, P. Ann. Clin. Biochem. 6: 24 (1969). White F. La Importancia del Consenso en la Prevención y el Control de la Diabetes en América Latina y El Caribe. Visión Médica 1999; 20:13-16.


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Herrera JL. El control de la diabetes en el umbral del siglo XXI. Revista Clínica Española 1998; 197:12 a 15. Prat J. Diabetes mellitus and its degenerative complications: a prospective study of 4400 patients observed. Diabetes Care 1998; 1:168-188 y 252 a 263.


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Determinacion de Glucosa en Sangre

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