PRACTICA N° 18 DIGESTION DE LAS PROTEINAS: ACCION DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS PANCREATICAS PANCREATICAS SOBRE LA CASEINA I.
INTR INTROD ODUC UCCI CION ON::
La digestión de las proteínas, o degradación hasta aminoácidos en el tubo digestivo, es un proceso complicado que se realiza con el concurso de diversas enzimas proteolíticas Entre estas enzimas proteoliticas tenemos: a) de origen gástrico: pepsina y renina; b) de origen pancreático: tripsina, quimotripsin quimotripsina, a, elastasa elastasa y carboipept carboipeptidasa; idasa; c) de origen intestinal: intestinal: aminopeptidasa aminopeptidasas, s, dipeptidasas! dipeptidasas! "on endopeptidasas: pepsina, tripsina, quimotripsina, elastasas! "on eopeptidasas: carboipeptidasa y aminopeptidasa! La tripsina, es activada por la enterocinasa en el intestino, y es especí#ica de los enlaces peptidicos sobre el lado carboílico de residuos de aminoácidos básicos: lisina y arginina solamente! La quimotripsina es especí#ica para los enlaces peptidicos peptidicos de los aminoácidos sin carga como los aromáticos: tirosina, tripto#ano y #enilalanina! La elastasa tiene una especi#icidad amplia, ataca a los residuos peque$os, como la glicina, alanina y serina! La carboipeptidasa hidroliza el enlace peptídico carboiterminal en las cadenas polipeptidicas! La #alta de enzimas proteolíticas produce creatorrea %presencia de #ibras musculares identi#icables en las heces, que provienen de la carne de los alimentos), y azorrea %gran cantidad de productos nitrogenados en las heces)! En el lactante con ausencia cong&nita de tripsinogeno y por consiguiente por #alta de activación activación de quimotripsin quimotripsinógeno ógeno y procarboipe procarboipeptida ptidasa, sa, eiste hipoproteinemia hipoproteinemia,, con retardo marcado del crecimiento! La presente práctica tiene como #inalidad demostrar la acción hidrolítica de las enzimas digestivas conten contenida idass en el páncre páncreas as sobre sobre la caseín caseínaa o proteí proteína na de la leche, determi determinad nadoo los product productos os %aminoácidos) con ninhidrina
II II..
REAC REACTI TIVO VOS. S.
- 'aseína al ( en bu##er #os#ato *,( + p -! - .u##er #os#ato *,( + p -! - "olución de etracto pancreático! - "olución acuosa de ninhidrina al *,/0 saturada con butanol! - 1cido tricloroac&tico al (*! III.
ACTIVIDADES ACTIVIDADES INSTRUCCION INSTRUCCIONALES: ALES: Procedimie Procedimiento nto
1rmar el siguiente sistema:
'aseína al ( .u##er #os#ato *!( + p -!* "olución de etracto pancreático 1gua destilada
( ( ( 777
( ( 777 (
777 ( ( (
3asos:
* +ezclar y colocar al ba$o de agua a 89 ' por 8* minutos! espu&s del tiempo de incubado incubado tomar *,0 ml, de cada uno de los tubos y trasladelos trasladelos a * espu&s * * *
otro sistema numerado %6, 66, 666)! En este nuevo sistema, agregar ( ml de solución de ninhidrina! +ezclar y llevar a un ba$o de agua hirviendo %#ranca ebullición), durante 8 a 0 minutos! 2bserva los cambios de color de cada tubo!
* Luego, agregue gota a gota ( ml de ácido tricloroac&tico al (* agitando continuamente! * 2bserve las variaciones que se produce en cada tubo! IV.
CUESTIONARIO:
(!
"e$ale las enzimas digestivas pancreáticas y los sustratos sobre los cuáles act
/!
='ómo se eplica los cambios de color, despu&s de la reacción con ninhidrina en un sistema donde se produce digestión de las proteínas>
8!
?u& e#ecto tiene el ácido tricloroac&tico sobre las proteínas> =?u& variaciones se obtienen en un sistema de digestión de proteínas, despu&s de agregar ácido tricloroac&tico>
INHIBICION DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS: ACCION DE LA SOYA HERVIDA Y CRUDA SOBRE EL EFECTO PROTEOLITICO DE LA TRIPSINA INTEGRANTES:
I.
VILCHES SENAS CRISTIAN.
VILLACORTA PONCE LUZ.
VILLACORTA SEBATIÁN NANCY.
INTRODUCCION: La tripsina actúa c! "na #n$p#pti$asa # %i$r&i'a pr(ctica!#nt# t$a c&as# $# prt#)nas. i+i#r# &as prt#)nas $#snat"ra&i'a$as , parcia&!#nt# $i+#ri$as- cn !a,r rapi$#' "# &as ri+ina&#s $#s$/&(n$s# #n p&ip0pti$s $# p#s 1aria/&# , a&+"ns a!in(ci$s. A&+"ns a&i!#nts #n #sta$ nat"ra& ps##n c!pn#nt#s p#r2"$icia&#s para &a n"trici3n. Pr #2#!p& #& 4ri2& $# s2a cnti#n# "n principi c",a acti1i$a$ antitripsina $i4ic"&ta &a $i+#sti3n $# &as prt#)nas. Esta s"stancia $# nat"ra&#'a p#pt)$ica #s inacti1a$a pr #& ca&r- #&& #5p&ica #n part# "# #& 1a&r n"triti1 $#& 4ri2& $# S2a a"!#nta cnsi$#ra/&#!#nt# si s# cc# a #/"&&ici3n pr 1aris !in"ts. E& 1!"ci$# $# &a c&ara $# %"#1 in%i/# ta!/i0n $# !an#ra #n0r+ica &a tripsina. Es int#r#sant# ta!/i0n "# #& ac#it# $# s#!i&&a $# a&+$3n ps#a "n pi+!#nt- #& +isip&- cn acti1i$a$ anti5i$ant# , antitripsina "# $is!in",# #& ap#tit , $i4ic"&ta &a $i+#sti3n $# &as prt#)nas.Ls #5tracts $# p(ncr#as ps##n ta!/i0n "n p0pti$ in%i/i$r $# &a tripsina- &a a&4a67 antitripsina 4#ca& 876AT69#ca&: "# #s "na +&icprt#)na- s#cr#ta$a a &a &"' int#stina&.
II.
REACTIVOS A UTILIZAR. - B"44#r 4s4at ;-7 < pH =-;. - S&"ci3n $# nin%i$rina ;->?@ sat"ra$a cn /"tan&. - S&"ci3n $# tripsina >; !+@. - Prt#)na $# s,a cr"$a ;@. - Prt#)na $# s,a %#r1i$a ;@. - Etan& a/s&"t
III.
ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimie!o Ar!ar #& si+"i#nt# sist#!a
COMPONENTES "m#$ B%&&er &o'&(!o ).* M +H ,.)
I 467
II 467
III 467
IV 467
Pro!e-( de 'o( cr%d( /)0
).7
)67
8
8
Pro!e-( de 'o( 1er2id( /)0
8
8
)67
)67
So#%ci3 de !ri+'i( 4) m50
)64
8
)64
8
Pass a. Inc"/ar #n /a !ar)a a D°C $"rant# 7 %ra. /. #sp"0s $#& ti#!p $# inc"/aci3n a+r#+ar a ca$a "n $# &s t"/s > !& $# #tan& a/s&"t. c. <#'c&ar , c#ntri4"+ar a >?;; rp! pr 7; !in. $. En tra s#ri# $# t"/s n"!#ra$s I - II- III- IV c&car 7 !& $# s/r#na$ant# $# &s t"/s r#sp#cti1s $#& pas ant#rir , a+r#+ar 7 !& $# nin%i$rina ;->?@. #. S!#t#r &s t"/s a t#!p#rat"ra $# #/"&&ici3n $#& a+"a "ti&i'an$ /a !ar)a $"rant# ? !in"ts. 4. Antar &s r#s"&ta$s.
IV.
CUESTIONARIO: *. E9+#i%e co '%' +ro+i(' +(#(;r(' c%<# cree %e e' e# o;e!i2o de #( +r
4. Por %> r(=3 e# o2om%coide de #( c#(r( de# 1%e2o i1i;e #( (cci3 de #( !ri+'i(. E& 1!"ci$# #s "na +&icprt#)na #& c"a& ti#n# "n in%i/i$r $# tripsina $# "na a&ta #sta/i&i$a$ t0r!ica. Ps## "na s#ri# $# #n&ac#s a'"4ra$s. Es "n in%i/i$r $#& tip Ga'a&- si#n$ s" siti acti1 #n #& r#si$" $# &isina para &a !a,r)a $# &as a1#s- p#r #n +a&&inas s# #nc"#ntra #n &a ar+inina.
/. ?@%> e' e# 5i'i+o# c3mo (c!( e '% (cci3 (!io9id(!e ")!ica!#nt#- #& +isip& s# c&asi4ica c! "n p&i4#n&- "# p#r!#a/i&i'a &as c0&"&as , actúa c! "n in%i/i$r para 1arias $# &as #n'i!as $#s%i$r+#nasas. Es "n pi+!#nt a!ari&&. B(sica!#nt#- #& +isip& s# pr#s#nta #n $s 4r!as
&i/r# , &i+a$- si#n$ $# !a,r i!prtancia &a 4r!a &i/r#- "# #s /i&3+ica!#nt# t35ica , "# crr#spn$# casi a &a tta&i$a$ $# +isip& $# &a p&anta $#& a&+$3n. Nr!a&!#nt#- #n &a s#!i&&a $#& a&+$3n- #& +isip& tta& cnstit",# $# ;-= a 7-@. E& +isip& 8C;H;O=: #s "na t5ina pt#nt# "# int#r4i#r# cn &a "ti&i'aci3n $# &s #&#!#nts !in#ra&#s- 4r!a c!ps #sta/&#s cn catin#s- c! #& 9#JJ- p"$i#n$ pr$"cir an#!ia. C!/ina s" +r"p car/ni& cn &as prt#)nas , &s a!in(ci$s- si#n$ #& 4actr principa& $# &a t5ici$a$ s" #4#ct ac"!"&ati1- ca"sa a&t#racin#s #n &as r+an#&as c#&"&ar#s- a&t#ra &s prc#ss /i")!ics # in%i/# &a acti1i$a$ $# a&+"nas #n'i!as- as) c! &a s)nt#sis $# NA.
E2#rc# "n #4#ct in%i/i$r #n &as #n'i!as $i+#sti1as. Es "n anti5i$ant# /i&3+ic "# %ac# "# $is!in",a #& ap#tit , "# s# pr$"'ca #str#i!i#nt. Las +a&&inas a&i!#nta$as cn %arina $# s#!i&&a $# a&+$3n p"#$#n $ar %"#1s cn
,#!as
!t#a$as
$#/i$
a&
#4#ct
$#&
+isip&.
E& +isip& #s t35ic para &s ani!a&#s !n+(strics c"an$ s# &#s s"!inistra #n canti$a$#s #5c#si1as. E& c#r$ , &s cn#2s sn &s ani!a&#s !(s s#nsi/&#s. Las a1#s $# crra& sn !(s t&#rant#s. Ls r"!iant#s a$"&ts p"#$#n in+#rir +isip& !i#ntras "# &s /1ins 231#n#s sn !"c% !(s s"sc#pti/&#s. E& #4#ct /i&3+ic $#& +isip& p"#$# #1itars# aa$i#n$ %i#rr- #n 4r!a $# s"&4at 40rric.
. Co di;%o' re+re'e!e #( +r
TUBO I
BUFFER FOSFATO )6*M +H , SOLUCIN DE TRIPSINA
/C 9 * 1or(
PROTENA DE SOYA CRUDA /)0 C E N T R IF U G A R
NIHIDRINA
NO HUBO REACCIN6 DEBIDO A LA INACCIN DE LA TRIPSINA6 YA @UE FUE INHIBIDO POR LA ACCIN DE LA SOYA CRUDA.
ETANOL ABSOLUTO
HERVIR
E9!r(er *m# de# 'o;re(d(!e
TUBO II
BUFFER FOSFATO )6*M +H ,
ETANOL ABSOLUTO
/C 9 * 1or( PROTENA DE SOYA CRUDA /)0 C E N T R IF U G A R
NIHIDRINA
NO HUBO REACCIN POR LA AUSENCIA DE TRIPSINA
E9!r(er *m# de# 'o;re(d(!e
HERVIR
TUBO III
BUFFER FOSFATO )6*M +H ,
ETANOL ABSOLUTO
/C 9 * 1or( PROTENA DE SOYA HERVIDA /)0
SOLUCIN DE TRIPSINA
LA SOYA HERVIDA PERDI SU ACTIVIDAD ANTITRIPSINA. AL AGREGAR NIHIDRINA6 PONE DE MANIFIESTO LA ACCIN DE LA TRIPSINA.
C E N T R IF U G A R
NIHIDRINA
HERVIR
E9!r(er *m# de# 'o;re(d(!e
TUBO IV
BUFFER FOSFATO )6*M +H ,
ETANOL ABSOLUTO
/C 9 * 1or( PROTENA DE SOYA HERVIDA /)0
NIHIDRINA
HERVIR
E9!r(er *m# de# 'o;re(d(!e
C E N T R I F U G A R
CONCLUSIONES: * LA SOYA CRUA TIENE PROPIEAES INHIBITORIAS PARA LA TRIPSINAI- NO OCURRIK PROTEKLISIS- NO HUBO A
TUBO *
TUBO 4
TUBO / TUBO
RESULTADOS FINALES
