Guia Solución problemas HPLC.pdf

GUÍA DE SOLUCIÓN DE PROBLEMAS EN CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

COMUNÍQUESE CON PHENOMENEX SI NECESITA: n Columnas

para HPLC (desde capilares hasta preparativas) Columnas de exclusión por tamaño (SEC): acuosa (GFC) o no acuosa (GPC) n Análisis de aminoácidos n Columnas especializadas para el análisis de: n Drogas farmacéuticas básicas, ácidas o anfotéricas n Separaciones de pH alto/bajo (pH 1-12) n Proteínas/Péptidos por fase reversa n Biopolímeros-proteínas y ácidos nucléicos por métodos de GFC/SEC n Polímeros sintéticos n Alimentos y bebidas n Muestras ambientales n Drogas en fluidos biológicos n Fase estacionaria de HPLC a granel n Accesorios para HPLC tales como: n Filtros para muestras y solventes n Protección de columnas SecurityGuard n Filtros para jeringa n Jeringas y viales n Calentador de columnas/Enfriador-Calentador de columnas n Válvulas de inyección para HPLC n Tubos y conectores n Desgasificadores de solventes n Selectores de columnas n Procesadores de fluidos n

n Columnas

para gases Tubos de SPE (extracción por fase sólida), Platos de 96 pocillos n Soporte para aplicaciones, desarrollo y validación n Servicio Técnico fuera de serie n

ÍNDICE

I.

Introducción...................................................................................... 1

II.

Presión anormal................................................................................ 2

III.

Fugas................................................................................................ 4

IV.

Problemas con el cromatograma..................................................... 6

V.

Problemas con el inyector.............................................................. 14

VI.

Problemas detectados por medio del olfato, vista u oído.............. 15

VII.

Areas de problemas clave y mantenimiento preventivo................. 17

SecurityGuard Sistema de Cartuchos de Protección Universal para HPLC.......................................................................................19

Filtros para jeringa Phenex™........................................................... 20

© 2012 Phenomenex, Inc. Todos los derechos reservados. Este manual no puede ser copiado ni reproducido total o parcialmente sin la autorización por escrito de Phenomenex, Inc. USA. Aún cuando se hecho todo lo posible para asegurar la confiabilidad de la información contenida en esta guía, Phenomenex no asume responsabilidad por el uso que se dé a la misma. Es bienvenida cualquier adición o corrección para ser incorporadas en futuras ediciones.

I. INTRODUCCIÓN LOCALIZANDO Y CORRIGIENDO EL PROBLEMA La correcta identificación del problema es la mejor forma de acercarse a la solución del mismo. Esta guía se divide en cinco categorías principales de síntomas para ayudarle en una forma efectiva a identificar el origen del problema que usted esta confrontando: • presión anormal • fugas • problemas con el cromatograma • problemas con el inyector • otros problemas detectados por los sentidos del olfato, vista u oído Cuando haya corregido el problema, regístrelo en un libro de incidentes que será muy valioso en el futuro para la identificación de los problemas. PREVENCIÓN Muchos problemas en cromatografía líquida pueden evitarse con el mantenimiento preventivo rutinario, por ejemplo el reemplazo de los sellos (juntas) de la bomba a intervalos regulares, puede eliminar las fallas asociadas a esas juntas (sellos). La sección VII lista las áreas de problemas más comunes para cada módulo y las prácticas de mantenimiento preventivo que reducen su frecuencia. Estas sugerencias pueden ser modificadas para ajustarse al modelo de su cromatógrafo y para ser implementadas como una rutina en su laboratorio. DONDE CONSEGUIR AYUDA ADICIONAL • Deben consultarse los manuales del operador así como de servicio. Estos manuales contienen diagramas, y procedimientos a seguir para resolver problemas en algún modelo específico, así como números de parte para ordenar repuestos. • El conocimiento de otras personas en el laboratorio que hayan experimentado un problema similar y lo hayan resuelto, es un valioso recurso. • El fabricante del instrumento puede ayudarle también. La mayoría de ellos ofrecen soporte técnico sin costo a sus clientes. • Phenomenex, tiene un equipo de consultores técnicos experimentados que pueden asistirle en casi cualquier problema de cromatografía. Llámenos, envíenos un fax o email. • Phenomenex ofrece seminarios para HPLC. • Hay un numero de fuentes de referencia que pueden guiarle en la solución del problema: J.W. Dolan and L.R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, Humana Press, NJ (1989). L.R. Snyder and J.J. Kirkland, Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd ed., Wiley, NY (1979). D.J. Runser, Maintaining and Troubleshooting HPLC Systems - A User’s Guide, Wiley, NY (1981). J.W. Dolan, “Troubleshooting”, LC/GC Magazine. Publicación mensual.

1

II. PRESIÓN ANORMAL Un cambio en la presión de operación es un signo de que puede haber un problema. Seleccione abajo cual categoría se parece más a los síntomas que presenta su instrumento de HPLC. Entonces siga las sugerencias para corregir el problema.

A. No hay flujo ni lectura de presión CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Está apagado

1. Enciéndalo

2. Fusible quemado

2. Reemplace el fusible

3. Fallas o ajuste del controlador 3. a. Verifique que la programación es la correcta b. Repare o cambie el controlador 4. Pistón roto

4. Cambie el pistón

5. Aire atrapado en el cabezal de 5. Desgasifique los solventes, elimine el la bomba aire de la bomba principal 6. Fase móvil insuficiente 6. a. Rellene el recipiente de la fase móvil b. Limpie el frit de entrada si está tapado 7. Válvula check fallando

7. Cambie la válvula check

8. Fuga mayor

8. Apriete o cambie los conectores

B. No hay lectura de presión y el flujo es normal CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Medidor fallando

1. Cambie el medidor

2. Transductor de presión fallando

2. Cambie el transductor

C. La presión se mantiene alta CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. El ajuste del flujo es demasiado alto 1. Ajústelo adecuadamente 2. Frit de la columna tapado 2. a. Monte la columna al revés y pase flujo b. Reemplace frit* c. Reemplace la columna 3. Fase móvil incorrecta, precipitación 3. a. Use la fase móvil correcta de la solución reguladora (búfer) b. “Lave” la columna 4. Columna incorrecta

4. Use la columna adecuada

5. Inyector tapado

5. Limpie o cambie el inyector

6. Temperatura de la columna demasiado baja

6. Aumente la temperatura

7. Mal funcionamiento del controlador 7. Repare o cambie el controlador 8. Guarda columna (pre-columna) tapada 8. Cambie el guarda columna 9. Filtro en línea bloqueado

9. Remueva o cambie el filtro en línea

* Remover los conectores podria anular la garantía de la columna, verifique con el fabricante antes de hacerlo.

2

II. PRESIÓN ANORMAL

(continúa)

D. La presión se mantiene baja CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. El ajuste del flujo es demasiado bajo 1. Ajuste el flujo correctamente 2. Fuga en el sistema

2. Localícela y corríjala

3. Columna incorrecta

3. Use la columna apropiada

4. Temperatura de la columna demasiado alta

4. Disminuya la temperatura

5. Mal funcionamiento del controlador 5. Repare o cambie el controlador

E. Presión en aumento CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Vea la sección C

1. Vea la sección C

F. Presión llegando a cero CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Vea las secciones A y B

1. Vea las secciones A y B

G. Presión disminuyendo pero no en cero CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Vea la sección D

1. Vea la sección D

H. La presión sube y baja CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Aire atrapado en la bomba 1. a. Desgasifique el solvente b. Saque el aire la bomba 2. Válvula check fallando

2. Cambie la válvula

3. Sello (junta) de la bomba fallando

3. Cambie el sello de la bomba

4. Desgasificado insuficiente 4 a. Desgasifique el solvente b. Cambie el método de desgasificar, use Degassex (desgasificador en línea) 5. Fuga en el sistema

5. Localícela y repárela

6. Uso de elución con gradiente 6. Las variaciones de presión son normales cuando se usa gradiente debido a cambios en la viscosidad

3

III. FUGAS Las fugas se resuelven casi siempre apretando o cambiando un conector. De cualquier forma debe tomar en cuenta que apretando de más los conectores de metal pueden dañarse y causar fuga. Así mismo los conectores de plástico pueden desgastarse apretándolos demasiado. Cuando un conector sigue con fuga después de apretarlo un poco más, es mejor quitarlo y examinario para comprobar que no esta dañado debido a un ferrul deformado o a partículas de los sellos (juntas). Los conectores que presenten algún daño deben desecharse.

A. Conectores con fugas CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Conector flojo

1. Apriételo

2. Conector trasroscado

2. Cámbielo

3. Conectores demasiado apretados* 3. a. Aflójelo y vuelva a apretarlo b. Cámbielo 4. Conector sucio 4. a. Desmonte y límpie el conector b. Cámbielo 5. Partes que no ajustan

5. Use partes de una misma marca

B. Fugas en la bomba CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Válvula check mal apretada 1. a. Apriete la válvula check (no se exceda) b. Cámbiela 2. Conectores flojos 2. Apriete los conectores, sin excederse 3. Falla en los sellos del mezclador 3. a. Cambie las sellos b. Cambie el mezclador 4. Fallas en los sellos de la bomba

4. Repare o cambie los sellos

5. Falla en la presión del transductor

5. Repárelo o cámbielo

6. Falla en el apagador del regulador

6. Cámbielo

7. Falla en la válvula proporcionadora 7. a. Observe los diafragmas, cámbielos si fugan b. Verifique si hay daño en los conectores, cámbielos 8. Válvula de purga 8. a. Apriete la válvula b. Cambie la válvula

* Use conectores de apretar con los dedos (“fingertight”) para evitar problemas de sellado y/o el uso de herramientas

4

III. FUGAS (continúa) C. Fugas en el inyector CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Falla en el sello del rotor

1. Reconstruya o cambie el inyector

2. Serpentín (loop) bloqueado

2. Cambie el serpertín (loop)

3. Sello del puerto de inyección flojo

3. Ajústelo

4. Diámetro de la aguja de la jeringa incorrecto

4. Use la jeringa correcta

5. Línea de drenaje succionando 5. Mantenga la línea de drenaje arriba de la superficie de drenaje 6. Línea de drenaje bloqueada

6. Cambie la línea de drenaje

D. Fuga en la columna CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Conector flojo

1. Apriete el conector

2. Material de empaque de la columna 2. Desmonte, enjuague el ferrul y en el ferrul móntelo de nuevo 3. Frit con espesor incorrecto 3. Use el frit apropiado (vea la tabla de abajo)

E. Fugas en el detector CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Falla en el sello de la celda 1. a. Evite una presión excesiva b. Cambie el sello 2. Ventanas de la celda rotas

2. Cambie las ventanas

3. Conectores goteando

3. Apriételos o cámbielos

4. Línea de drenaje bloqueada

4. Cambie la línea de drenaje

5. Flujo de la celda bloqueado

5. Reconstruya o cámbiela

GUÍA PARA LA SELECCIÓN DE LOS FRITS Cuando el tamaño de partícula es:

El tamaño de poro del frit debe ser:

0.5 µm

2 - 4 µm

2 µm

5 - 20 µm

5

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA Muchos de los problemas en el sistema de LC producen cambios en el cromatograma. Algunos de esos problemas pueden solucionarse haciendo ajustes en el equipo, mientras otros pueden requerir modificación en los procedimientos de ensayo. La selección correcta del tipo de columna y de fase móvil son la clave para una “buena cromatografía.”

A. Pico con coleo (Tailing) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Frit tapado 1. a. Montar al revés la columna (de ser posible) y lavar para limpiar el frit* b. Reemplace la columna 2. Columna con vacío

2. llene el vacío*

3. Pico interfiriendo 3. a. Use una columna más larga b. Cambie la fase móvil y/o la selectividad de la columna 4. pH de la fase móvil, incorrecto 4. Ajuste el pH. Para compuestos básicos, pH más bajo da picos más simétricos. 5. Muestras reaccionando con los 5. a. Agregue un reactivo de pareo sitios activos iónico o un modificador básico volátil b. Cambie la columna Normal

Problema

PICO CON COLEO

B. Pico con fronteo (fronting) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Temperatura baja 1. Aumente la temperatura de la columna 2. Solvente de la muestra incorrecto 2. Use fase móvil como solvente de inyección 3. Muestra saturada 3. Disminuya la concentración de la muestra 4. Columna dañada

4. Vea A.1 y A.2

*Vea la garantía de la columna con el fabricante. Remover los conectores puede anular la garantía de la columna, verifique con el fabricante antes de hacerlo.

6

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA

(continúa)

C. Picos divididos CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Contaminación del guarda 1. Remueva el guarda columna y columna o de la columna analítica haga una corrida, cámbielo de ser necesario. Si la columna analítica se obstruye, móntela al revés y púrguela. Si el problema persiste la columna podría tener contaminantes Normal Problema fuertemente retenidos. Use el procedimiento correcto de restauración. Si el problema persiste podría ser que la entrada esté tapada. Cambie la columna. PICOS DIVIDIDOS 2. Solvente de la muestra 2. Cambie el solvente. Cada vez incompatible con la fase móvil que sea posible inyecte las muestras con fase móvil.

D. Distorsión más grande de los picos CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Saturación con la muestra

1. Disminuya el tamaño de la muestra

E. Distorsión de los primeros picos CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Inyección con solvente equivocado 1. a. Reduzca el volumen de inyección b. Use un solvente más débil para la inyección

F. Más coleo (tailing) en los primeros picos que en los últimos CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Efecto extra columna 1. a. Cambie el tubo del sistema por uno más corto y de menor diámetro interno b. Use una celda del detector de menor volumen

7


(continúa)

G. Aumento de coleo (tailing) al aumentar k’ CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Efectos secundarios de 1. a. Agregue trietilamina retención en fase reversa (muestras básicas) b. Agregue acetato (muestras ácidas) c. Agregue sal o búfer (muestras iónicas) d. Pruebe con una columna diferente 2. Efectos secundarios de 2. a. Agregue trietilamina retención en fase normal (compuestos ácidos) b. Agregue ácido acético (compuestos ácidos) c. Agregue agua (polifuncionales). Solamente en métodos de fase normal que usan solventes miscibles con agua. d. Pruebe un método de HPLC distinto 3. Efectos de retención 3. Agregue trietilamina secundaria, par iónico (muestras básicas)

H. Picos ácidos o básicos con coleo (tailing) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Solución reguladora 1. a. Use búfer con concentración (búfer) incorrecta 50-100 mM b. Use búfer con pKa igual a la fase móvil

I. Picos extra CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Otros componentes en la muestra

1. Normal

2. Pico de una inyección previa 2. a. Aumente el tiempo de análisis eluyendo tardíamente o la curva del gradiente b. Aumente el flujo 3. Picos fantasma o vacantes 3. a. Verifique la pureza de la fase móvil b. Use fase móvil como solvente de inyección c. Reduzca el tamaño de la inyección 4. Contaminación

4. Filtre la muestra

8


(continúa)

J. Movimiento en los tiempos de retención CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Pobre control de la temperatura

1. Use termostato con la columna

2. Fase móvil cambiante 2. Evite el cambio (evaporación, reacción, etc.) 3. Acondicionamiento de 3. De más tiempo de acondicionamiento la columna insuficiente a la columna entre un análisis y otro

K. Cambio abrupto en los tiempos de retención CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Cambio en el flujo

1. Restablezca el flujo

2. Aire atrapado en la bomba 2. Purgue la bomba para eliminar el aire 3. Fase móvil incorrecta 3. a. Cambie la fase móvil por la correcta b. Ajuste la mezcla apropiada de fase móvil en el controlador

L. Elevación de la línea base CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1.

Fluctuación en la temperatura. 1. (Aún los cambios mínimos causan que la línea base se mueva arriba o hacia abajo. Afecta más a detectores de índice de refracción, de conductividad y de UV, a alta sensibilidad o en modo fotométrico directo.)

Controle la temperatura de la fase móvil y de la columna, use intercambiador de calor antes del detector

2.

Fase móvil no homogénea. (Se eleva 2. generalmente a absorbancias altas, más que con fluctuaciones cíclicas de temperatura.)

Use solventes grado HPLC, sales y aditivos de alta pureza. Desgasifique la fase móvil antes de usarla, haga burbujear helio durante su uso.

3. Contaminación o burbuja de 3. aire en la celda del detector

Lave la celda con metanol, u otro solvente fuerte. De ser necesario limpie la celda con HNO3 1N (jamás use HCl).

4.

Normal

Problema

ELEVACIÓN DE LA LÍNEA BASE

Salida de línea tapada después del 4. Desconecte o cambie la línea. Vea el detector. (La alta presión fractura manual del detector para la ventana de la celda produciendo cambiar la ventana. una línea base con ruido.)

5. Problema en el mezclado de la fase 5. móvil o cambio en la velocidad flujo

9

Corregir la composición y/o el flujo. Para evitar esto, observe rutinariamente la composición y el flujo.


(continúa)

L. Elevación de la línea base (continúa) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

6. Acondicionamiento lento de la 6. columna especialmente cuando se cambia la fase móvil

Purgue con un solvente medianamente fuerte, corra con 10 a 20 volúmenes de columna con fase móvil nueva, antes de iniciar el análisis

7. Fase móvil contaminada, deteriorada, 7. Verifique como se prepara la fase o preparada con materiales de móvil. Use solventes de la más alta baja calidad pureza grado HPLC. 8.

Materiales fuertemente retenidos en 8. Use guarda-columna. De ser la muestra (k’ alta) pueden eluir dando necesario purgue la columna con un picos muy gruesos y aparecer una solvente fuerte entre inyecciones o línea base elevada. (Los análisis con periódicamente entre análisis. gradiente pueden agravar este problema.)

9. Fase móvil reciclada, aunque 9. Ajuste la línea base. Use fase móvil el detector no ha sido ajustado nueva cuando los límites dinámicos del detector son excedidos. 10. Detector (UV) no ajustado al máximo 10. Cambie la longitud de onda de UV de absorbancia sino a la al máximo de absorbancia pendiente de la curva

M. Ruido en la línea base (regular) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Aire en la fase móvil, celda del 1. Desgasifique la fase móvil. Purgue detector o en la bomba el sistema para eliminar el aire del detector, la celda o la bomba. 2. Fugas 2. Normal Problema RUIDO DE LA LÍNEA BASE

Vea la sección III. Verifique que el sistema no tenga conectores flojos. Vea que la bomba no tenga fugas, incrustaciones de sales o haga ruidos poco comunes. De ser necesario cambie los sellos de la bomba.

3. Mezclado incompleto de la fase móvil 3. Mezcle la fase móvil manualmente o use un solvente menos viscoso 4. Efecto de temperatura (columna a 4. Reduzca la diferencia de alta temperatura, detector sin calentar) temperaturas o use un intercambiador de calor 5. Otro equipo electrónico en 5. la misma línea

Ponga aparte del cromatógrafo de líquidos, para determinar si el problema es externo. Corríjalo de ser necesario.

6. Pulsaciones en la bomba 6. Incorpore un regulador de pulsaciones en el sistema

10


(continúa)

N. Ruido en la línea base (irregular) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Fugas 1. Normal Problema RUIDO DE LA LÍNEA BASE

Vea la sección III. Verifique si hay conectores flojos. Vea si la bomba gotea, tiene incrustaciones de sales, cambie los sellos de ser necesario. Vea si la celda del detector no tiene fugas.

2. Fase móvil contaminada, deteriorada 2. Verifique como se prepara o preparada con materiales la fase móvil de baja calidad 3. Fase móvil con solventes 3. Seleccione y use solo no miscibles solventes miscibles 4. Detector y registrador electrónicos 4. Aísle electrónicamente ambos. Vea las instrucciones para corregir el problema. 5. Aire atrapado en el sistema 5. Purgue el sistema con un solvente fuerte 6. Burbujas de aire en el detector 6. Purgue el detector. Instale un componente para presión después del detector. 7. Celda del detector contaminada 7. Limpie la celda con HNO3 1N (Aún las más pequeñas cantidades (nunca use HCl) de contaminantes producen ruido.) 8. Lámpara del detector muy débil

8. Cambie la lámpara

9. Columna fugando sílica o material de empaque

9. Cambie la columna

10. Mezclador de fase móvil dañado 10. Repare o cambie el mezclador o funcionando mal o mezcle fuera de línea si es isocrático

O. Picos muy anchos CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Cambio en la composición de la fase móvil

1. Prepare fase móvil nueva

2. Flujo de la fase móvil demasiado bajo 2. Ajuste el flujo 3. Fugas (especialmente entre 3. la columna y el detector)

11

Vea la sección III. Verifique que no hayan conectores flojos. Vea que la bomba no tenga fugas, incrustaciones de sales, o ruido.


(continúa)

O. Picos muy anchos (continúe) CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

4. Ajuste incorrecto del detector

4. Ajúste bien

5. Efectos extra columna 5. a. Inyecte un volumen menor a. Columna saturada (10 μl vs. 100 µl) o diluya la muestra a 1:10 y 1:100 b. Tiempo de respuesta del detector b. Reduzca el tiempo de respuesta largo o volumen de la celda o use una celda más pequeña demasiado grande c. La tubería entre la columna y el c. Use una pieza más corta de detector es demasiado larga tubo con un diámetro interno de entre 0.005” y 0.007” d. El tiempo de respuesta del d. Reduzca el tiempo de respuesta registrador es demasiado largo

6. Concentración de la solución reguladora demasiado baja

6. Aumente la concentración

7. Guarda columna contaminada o desgastada

7. Cambie el guarda columna

8. Columna contaminada/desgastada. 8. Cambie la columna por una Conteo de platos muy bajo. nueva del mismo tipo 9. Vacío a la entrada de la columna

9. Cambie la columna por otra nueva

10. Un pico representando dos o más 10. Cambie el tipo de columna para compuestos pobremente resuelto mejorar la separación 11. Temperatura de la columna muy baja 11. Aumente la temperatura. No exceda los 60 ˚C a menos que el fabricante de la columna indique lo contrario. 12. Constante del tiempo del detector demasiado larga

Normal

12. Use una constante más pequeña

Problema

PICOS MUY ANCHOS

12


(continúa)

P. Pérdida de resolución CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Fase móvil contaminada /deteriorada, 1. Prepare fase móvil fresca causando cambios en los tiempos de retención 2. Guarda columna o 2. columna tapadas Normal Problema PÉRDIDA DE RESOLUCIÓN

Quite el guarda columna y haga un análisis. Cambie el guarda de ser necesario. Si la columna analítica esta tapada, póngala al revés y púrguela. Si el problema persiste la columna pudiera estar fallando debido a que tiene retenidos contaminantes muy fuertes. Use el procedimiento de regeneración apropiado. Si el problema persiste, probablemente este tapada la entrada. Limpie el frit o cambie la columna.

Q. Todos los picos demasiado pequeños CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. La atenuación del detector es demasiado alta

1. Reduzca la atenuación

2. La constante de tiempo del detector es demasiado grande

2. Use una constante menor

3. La inyección es demasiado pequeña 3. a. Aumente la concentración de la muestra b. Aumente el volumen de inyección 4. Conexión del registrador incorrecta

4. Corrija la conexión

R. Todos los picos demasiado grandes CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. La atenuación del detector es muy baja

1. Aumente la atenuación

2. Inyección demasiado grande 2. a. Reduzca la concentración de la muestra b. Disminuya el volumen de inyección. Use un serpentín más corto o use un serpentín parcialmente rellenado. 3. Mala conexión del registrador

3. Corrija la conexión

13

V. PROBLEMAS CON EL INYECTOR Estos problemas se detectan generalmente cuando se usan válvulas de inyección. Las fugas en las válvulas de inyección se discuten en la Sección III (Fugas).

A. Inyector manual difícil de operar CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Sello del rotor, dañado

1. Reconstruya o cambie la válvula

2. Rotor demasiado apretado

2. Ajuste la tensión del rotor

B. Inyector manual difícil de cargar CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Válvula mal alineada

1. Ajuste la alineación

2. Serpentín (loop) bloqueado

2. Cambie el serpentín (loop)

3. Jeringa sucia

3. Limpie o cámbiela

4. Líneas bloqueadas (tapadas)

4. Límpielas o cámbielas

C. El autoinyector no funciona CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. No hay presión de aire (o corriente)

1. Ajuste la presión al punto correcto

2. El rotor esta muy apretado

2. Ajuste

3. Válvula mal alineada

3. Ajuste la alineación

D. Otros problemas con el autoinyector CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Obstrucción 1. Destápelo o cambie la porción obstruida 2. Mecanismo atorado

2. Vea el manual de servicio

3. Controlador fallando

3. Cambie o repare el controlador

14

VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR MEDIO DEL OLFATO, EL OÍDO O LA VISTA Para identificar los problemas de LC se necesita hacer uso de todos los sentidos. Seria una buena idea dedicar unos minutos cada día para usar todos los sentidos (a excepción del gusto), para determinar las condiciones del equipo de LC y asegurarse que esta funcionado correctamente. Esta práctica le puede ayudar muchas veces a localizar rápidamente algún problema ya que en muchas ocasiones se puede percibir el olor de una fuga antes de encontrar donde se encuentra. La mayoría de los problemas se identifican con la vista, y muchos de ellos se incluyen en la sección anterior.

A. Olor a solvente CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Fugas

1. Vea la sección III

2. Derrame 2. a. Verifique que el recipiente de drenado no esté rebosando b. Localice el derrame y límpielo

B. Olor a sobrecalentamiento CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Sobrecalentamiento del módulo 1. a. Verifique que hay ventilación adecuada, ajústela b. Vea que la temperatura sea la correcta, ajuste de ser necesario c. Apague el módulo y vea el manual de servicio

C. Lecturas del medidor fuera de lo normal CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Anomalía en la presión

1. Vea la sección II

2. Problema con el horno 2. a. Vea los ajustes y corrija de la columna b. Consulte el manual de servicio 3. Lámpara del detector fallando

3. Cambie la lámpara

D. Luz de aviso de anomalía CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Límite de presión excedido 1. a. Vea si hay algún bloqueo b. Verifique los limites de operación, ajústelos 2. Otras lámparas de aviso

2. Consulte el manual de servicio

15

VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR MEDIO DEL OLFATO, EL OÍDO O LA VISTA (continúa) E. Timbre de aviso de anomalía CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Fuga o derrame de solvente

1. Localice y corrija

2. Otros timbres de aviso sonando


F. Chillidos y chirridos CAUSA PROBABLE

SOLUCIÓN

1. Falla en los cojinetes (baleros)


2. Mala lubricación

2. Lubrique tanto como sea necesario

3. Desgaste mecánico


16

VII. PROBLEMAS CLAVE Y MANTENIMIENTO PREVENTIVO La tabla de abajo presenta los problemas más comunes que ocurren en cualquier equipo de HPLC. En la columna de la derecha están las prácticas de mantenimiento preventivo que pueden evitar a la incidencia de fallas. Entre paréntesis se presenta la frecuencia sugerida para el mantenimiento. Los manuales de servicio y del operador de su equipo pueden tener sugerencias adicionales para el mejor mantenimiento preventivo de su modelo de LC.

Deposito (tanque) PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Frit de entrada tapado 1. a. Lave la columna montándola al revés b. Filtre la fase móvil con filtro de 0.5 μm 2. Burbujas de gas

2. Desgasifique la fase móvil

Bomba PROBLEMA


1. Burbujas de aire

1. Desgasifique la fase móvil

2. Falla en el sello de la bomba

2. Cámbielo cada 3 meses

3. Falla en la válvula check 3. Filtre la fase móvil, use un frit en la entrada de la línea. Tenga una válvula de repuesto.

Inyector PROBLEMA


1. Sello del rotor desgastado 1. a. No apriete de más b. Filtre las muestras

Columna PROBLEMA


1. Frit tapado 1. a. Filtre la fase móvil b. Filtre las muestras c. Use un filtro en línea y/o guarda columnas 2. Vacío en la cabeza de la columna 2. a. Evite fase móvil con pH > 8 (para la mayoría de columnas a base de sílica) b. Use guarda columna c. Use pre-columna (columna de saturación)

17

VII. PROBLEMAS CLAVE Y MANTENIMIENTO PREVENTIVO (continúa) Detector PROBLEMA


1. Fallas en la lámpara, respuesta del 1. Cambie cada 6 meses. dectector disminuida, aumento Tenga uno de repuesto. en el ruido del detector 2. Burbujas en la celda 2. a. Mantenga limpia la celda b. Use restrictor después de la celda c. Desgasifique la fase móvil

General PROBLEMA


1. Daño corrosivo/abrasivo 1. Elimine los residuos de sales en el sistema y límpielo cuando no lo use

18

AVISO: LOS CONTAMINANTES PUEDEN CAUSAR

• ALTA PRESIÓN • PICOS DIVIDIDOS • PICOS DEMASIADO ANCHOS • RUIDO EN LA LÍNEA BASE • ELEVACIÓN DE LA LÍNEA BASE • PERDIDA DE RESOLUCIÓN • DAÑO IRREVERSIBLE EN LA COLUMNA • Daño al sistema

PROTEJA SU COLUMNA DE HPLC Y SUS RESULTADOS Para información adicional consulte www.phenomenex.com/info/securityguard

Un sistema universal de guarda cartuchos para HPLC diseñado para proteger en forma efectiva tanto a sus valiosas columnas analíticas como sus resultados del daño que producen los contaminantes. Atrapa los contaminantes sin afectar la cromatografía.

ASÍ ES COMO TRABAJA SECURITYGUARD*:

Los cartuchos pueden ser inspeccionados fácilmente para ver Conexión Universal de apretar con los contaminantes los dedospara columnas de HPLC -no se necesitan herramientas

Del inyector

contaminantes compuestos de interés

AJUSTE UNIVERSAL*:

Columna de HPLC

Guarda Cartucho (Holder)

Con su diseño patentado SecurityGuard™ se ajusta a todos los conectores sean macho o hembra, prácticamente de cualquier fabricante.

garantía Si usted no queda totalmente satisfecho con el comportamiento de SecurityGuard simplemente contacte a Phenomenex dentro los 45 días de su compra para un ¡REEMBOLSO TOTAL DE SU DINERO! *Aplica solamentea los sistemas de guarda de tamaño analítico, no aplica a los guarda cartuchos SemiPrep o PREP

19

Diseño Patentado

Filtros para jeringa Phenex

™

Para filtración de muestras y solventes antes de la cromatografía • Menos tiempo de paro • Resultados más consistentes y reproducibles • Mayor tiempo de vida de la columna • Rápida filtración de muestras para HPLC y GC antes del análisis • Particulado, PVC, y filtros libres de extraíbles • Menos paros en el sistema

Phenex ofrece: »» Baja absorción de proteínas

»» Bajo volumen

»» Máxima compatibilidad química

»» Calidad certificada »» Integridad probada al 100%

»» Mínimo de extraíbles

»» Uso bidireccional

»» Excelente flujo »» Alto rendimiento total Tipos de membrana RC Regenerated Cellulose

NY (Nylon)

PTFE® Teflon® (Polytetrafluoroethylene)

CA (Cellulose Acetate)

PES (Polyethersulfone)

GF (Glass Fiber)

Los filtros para jeringa anteriores no son estériles. La cubierta está hecha de polipropileno (PP) grado médico.

Tip: Pruebe una muestra La major forma de determiner si una membrana Phenex específica es la más recomendable para su aplicación. Solicite su muestra por teléfono o visite www.phenomenex.com/sample

garantía Si Phenex no fuciona igual o mejor que los filtros para jeringa que está usando actualmente con membrana, diámetro y tamaño de poro similares, regrese el producto con datos comparativos dentro los 45 días de su compra para un ¡REEMBOLSO TOTAL DE SU DINERO!

Favor de contactar a su consultor técnico o distribuidor local para disponibilidad y asistencia. La compra de grandes cantidades podría ahorrarle aún más. Marcas comerciales SecurityGuard y Phenex son marcas comerciales de Phenomenex. PTFE y Teflon son marcas comerciales registradas de E.I. du Pont de Nemours and Co. © 2012 Phenomenec Inc. Todos los derechos reservados.

Esta publicación se distribuye libre de costo. Para copias adicionales comuniquese con nosotros a: Alemania t: 06021-58830-0 f: 06021-58830-11

[email protected] Australia

t: 02-9428-6444 f: 02-9428-6445

[email protected] Austria

t: 01-319-1301 f: 01-319-1300

[email protected]

Bélgica t: +31 (0)30-2418700 f: +31 (0)30-2383749 [email protected] Canada t: (800) 543-3681 f: (310) 328-7768 [email protected] Dinamarca t: 4824 8048 f: +45 4810 6265 [email protected] Estados Unidos t: (310) 212-0555 f: (310) 328-7768 [email protected] Finlandia t: 09 4789 0063 f: +45 4810 6265

[email protected] Francia

t: 01 30 09 21 10 f: 01 30 09 21 11

[email protected] India

t: 040-3012 2400 f: 040-3012 2411

[email protected]

Italia t: 0 51 6327511 f: 051 6327555

[email protected] Luxemburgo

t: +31 (0)30-2418700 f: +31 (0)30-2383749

[email protected] México

t: 001-800-844-5226 f: 001-310-328-7768

[email protected] Noruega

t: 8 10 02 005 f: +45 4810 6265

[email protected] Nueva Zelanda

t: 09-4780951 f: 09-4780952

[email protected] Países Bajos

t: 030-2418700 f: 030-2383749

[email protected] Puerto Rico

t: (800) 541-HPLC f: (310) 328-7768

[email protected] Reino Unido

t: 0 1625-501367 f: 01625-501796

[email protected] Suecia

t: 08 611 6950 f: +45 4810 6265

[email protected]

Todos los demas países: Oficinas Corporativas en USA t: (310) 212-0555 f: (310) 328-7768 [email protected]

Irlanda t: 0 1 247 5405 f: +44 1625-501796

www.phenomenex.com Los productos Phenomenex están disponibles en el mundo entero. Para el distribuidor en su país, contacte al Departamento Internacional de Phenomenex: [email protected]

GU92930212_I_Sp

[email protected]

Guia Solución problemas HPLC.pdf

Recommend Documents