INFORME MICROBIOLOGÍA INFORME DETERMINACIÓN DE CLOSTRIDIUM PERFRINGERS
PRESENTADO POR: KELLY PUENTES OMAR NOVA JHONNATAN CUCAITA YENNYPEREZ
INSTRUCTORA: ALEXANDRA CUCAITA
FICHA: 433472
SENA CENTRO NACIONAL DE HOTELERÍA, TURISMO Y ALIMENTOS CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS BOGOTÁ D.C 2013
INFORME MICROBIOLOGÍA
1. INTRODUCCIÓN: El Clostridium perfringens es una bacteria anaeróbica, Gram-positiva, cuyos bacilos forman esporas. Esta bacteria se distribuye ampliamente en el ambiente y con frecuencia se encuentra en el tracto digestivo de los humanos y muchos animales domésticos y asilvestrados. Las esporas de estas bacterias pueden permanecer latentes y por largo tiempo en la tierra, los sedimentos y áreas sujetas a la contaminación por eses fecales humanas y animales. El término para describir las enfermedades provocadas por el consumo de alimentos contaminados es: intoxicación por C. perfringens, No obstante las cepas de tipo C de esta bacteria pueden causar una enfermedad rara pero más aguda y que es conocida como "enteritis necrótica" o gangrena gaseosa (pig-bel), Es una enfermedad aguda que produce una marcada destrucción de la mucosa intestinal.
2. MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS EN ESTE ANALISIS: SPS (AGAR SELECTIVO SULFITO POLIMIXINA SULFADIAZINA)
HISTORIA: Se trata de una modificación del medio de Wilson y Blair y del de Mossel. Es muy cómodo de emplear al haber inhibido el crecimiento de la flora secundaria y dado su carácter moderadamente selectivo.
FUNDAMENTO: La mayor parte de los clostridios reducen el sulfito a sulfuro, que se puede poner de manifiesto por el color negro producido con los iones de hierro, el sulfato de polimixina y la sulfadiazina inhiben el crecimiento de la flora acompañante y la peptona de caseina y el extracto de levadura representan el aporte de nutrientes.
FORMULA (POR LITRO) Sodio Sulfito Sulfato de polimixina B Sulfadazina Peptona de caseína Extracto de levadura Hierro (II)Citrato
0,5 g 0,01 mg 0,12 g 15,0 g 10,0 g 0,5 g
INFORME MICROBIOLOGÍA Agar pH final
13,0 gr 7,0. 0,2
PREPARACION: Suspender 40 g en 1 L de agua destilada. Calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 118°C durante 15 minutos.
MODO DE EMPLEO: Generalmente se siembra por incorporación en gelosa, cuando se utilizan tubos estos se sellan con aceite de vaselina estéril. Incubar entre 35°C y 37°C durante 24 horas. El Clostridium perfringens forma colonias negras al igual que otras especies como C.botulinum y C sporogenes,Cuando se incuba a 46°C,se favorece el crecimiento de C.perfringens.sin embargo, deben realizarse pruebas complementarias para la identificación.
CONTROL DE CALIDAD: Aspecto: polvo fino Color : Beige Solubilidad: ligeramente opalescente PH: 7,0. 0,2 CONTROL MICROBIOLÓGICO: MICROORGANISMOS
DESAROLLO
Clostridium perfringens Escherichia Coli Staphylococcus Aureus Clostridium Sporegenes
satisfactorio Inhibido Inhibido-moderado Aceptable
INFORME MICROBIOLOGÍA
3. OBJETIVOS Adquirir destreza en el recuento de esporas de Clostridium sulfito reductor Analizar los resultados obtenidos por la muestra analizada conforme a la normatividad.
4. MATERIALES Y EQUIPOS
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2 tubos de ensayo de 10 ml Erlemeyer de 150 ml Cajas de petri Pipetas Micropipeta Puntas para micropipeta Gradillas Mechero Jarra de anaerobiosis Baño de maría Cuchillo, tenedor y espátula Balanza Cintas de vaselina elástica
INFORME MICROBIOLOGÍA Cloruro de sodio ● Peptona Agua destilada-des ionizada ● ● Muestra Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazina (SPS) ● ●
5. MÉTODO Se pesaron 10 gramos de cada muestra colectada, las que, por separado, se añadieron a matraces conteniendo 90 mL de solución salina fisiológica peptonada (SSFP) estéril, obteniéndose de esta forma una dilución al 1/10. A partir de esta dilución, se hicieron diluciones al 1/100 y al 1/1000. mL y se depositó en tubos estériles y, a continuación, se agregó el medio de cultivo sulfito polimixina sulfadiazina (SPS). Se dejó solidificar, y luego se agregó 1mL del mismo medio de cultivo a fin de asegurar la anaerobiosis. as, se llevaron a incubar a 37 ºC por 24 horas. colonias negras, y se cuantificaron. procedió a seleccionar cinco colonias negras, para luego sembrarlas en caldo tioglicolato y se incubó a 45 ºC por 24 horas. realizó la coloración Gram y se sembró en el medio nitrato movilidad y en el medio el medio de cultivo gelatina lactosa, a fin de verificar la reducción de nitratos a nitritos, movilidad, licuefacción de la Gelatina y degradación de la lactosa, respectivamente.
INFORME MICROBIOLOGÍA 6 .CÁLCULOS: AGAR SULFITO POLIMIXINA Sulfadiazina (SPS) 39,4 gr ________ 1000ml x ____________ 120 ml = 4,728 gr
AGUA PEPTONADA: 1P ________ 1000ml x _________ 110ml = 0.11 gr
CLORURO DE SODIO (NaCl): 8.5 Gr ________ 1000ml x ____________ 110ml = 0.935 gr
7. ANÁLISIS DE RESULTADOS: Autoclavado: 8:30 Am
INFORME MICROBIOLOGÍA RESULTADOS
AN LISIS MEDIO DE CULTIVO
DILUCION
DESAROLLO CARACTER STIC A MACROSCÓPICA S
Dilución 10-1 Determina ción de bacterias anaerobia s del genero Clostridiu m Perfringen s
(SPS) Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazi na
Caja N 1 Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens
Caja N 2: Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens
UFC: 41 colonias
UFC:53 colonias
Staphylococcus Aureus: *Forma: Irregular *Borde: Ondulado *Elevación: Elevada *Superficie: Mate *Color: Beige Clostridium perfringens: *Forma: circular *Borde: entero *Elevación. convexa *Superficie: Brillante *Color: Negro
Dilución 10-2 Caja N 1 Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens
Caja N 2: Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium
UFC: 38 colonias
UFC: 50 colonias
Staphylococcus Aureus: *Forma: Irregular *Borde: Ondulado *Elevación: Elevada *Superficie: Mate *Color: Beige Clostridium perfringens:
IM GENES
INFORME MICROBIOLOGÍA perfringens
*Forma: circular *Borde: entero *Elevación. convexa *Superficie: Brillante *Color: Negro
Dilución 10-3 Caja N 1 Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens
Caja N 2: Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens
UFC:24 colonias
UFC:30 colonias
Staphylococcus Aureus: *Forma: Irregular *Borde: Ondulado *Elevación: Elevada *Superficie: Mate *Color: Beige Clostridium perfringens: *Forma: circular *Borde: entero *Elevación. convexa *Superficie: Brillante *Color: Negro
Alimento a An alizar: Salchichón taller de cárnicos elaborado por la ficha 433472 Selección de cajas que presentan recuento entre 15-150 UFC Rango: Cálc u lo :
INFORME MICROBIOLOGÍA
______________________ C:es la suma de la colonas de C.perfringers. N1:Es el numero de cajas guardadas en la primera dilución N2:E s el numero de cajas retenidas en la segunda dilución D:es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución retenida
8. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS: Una de las posibles deducciones que podemos aportar, acerca del porque esta bacteria se encuentra tan presente en nuestro producto es porque Clostridium perfringens está ampliamente distribuido en la naturaleza y se halla en la tierra, en las aguas, en los alimentos, en el polvo, en las especias y en el tracto intestinal de las personas y de los animales; en el taller de cárnicos realizamos estos productos de una manera artesanal por eso se encuentra tan expuesto a que contraiga una serie de bacterias que afecten su estado. C. perfringens llega a las carnes directamente desde los animales que se sacrifican en el matadero, o por contaminación de la misma carne de los animales sacrificados otra conclusión que le damos es que el modo de conservación y manipulación desde la distribución del matadero hasta el economato del Sena no se encuentra en muy buenas condiciones. Además, se conoce que la carne constituye un medio ideal para el crecimiento de Microorganismos debido a sus características de pH, humedad y nutrientes. Esto explica que se debe ser muy preciso en el taller de elaboración, ya que si no contamos con las mejores medidas en cuanto a higiene, manipulación, cuidado y percepción no vamos a poder erradicar en un % mucho menor a esta bacteria. Otra posible deducción del porque obtuvimos UFC del tipo C. perfringens es debido a la operación de escaldado y conservación por falta de atención detallada y su manejo inadecuado.
INFORME MICROBIOLOGÍA
CONCLUSIONES El número de Clostridium perfringens en nuestro producto cárnico elaborado en el taller del Sena, está dentro de los parámetros permitidos para este producto. Como controladores de calidad debemos prestar atención a cada detalle que se encuentra en la línea de proceso para minimizar el número de crecimiento microbiano.
BIBLIOGRAFÍA
http://www.slideshare.net/sangel06/manual-de-medio-de-cultivos file:///C:/Users/Familia/Downloads/170-321-1-PB.pdf http://www.bvsops.org.uy/pdf/clostridium.pdf
