INTRODUCCION
Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios de d e laboratorio, se llaman cultivos. Las diferentes especies de bacterias que se desarrollan en la misma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muy diferentes, y por lo tanto el conocimiento de la apariencia, o de d e las características del cultivo de las especies es útil para reconocer recono cer ciertos tipos de bacterias; asimismo, nos puede servir como un medio que haga posible identificar las especies. Las bacterias pueden ser obtenidas en cultivo puro para determinar las características características del cultivo o cualquier otra otra propiedad de la especie.
Cultivos puros. El culti cultivo vo puro puro pres presen enta ta las condic condicion iones es artif artifici iciale ales s para para el desar desarro rollo llo de las bact bacter eria ias s y otro otros s micr microo oorg rgan anis ism mos y las las cond condic icio ione nes s impu impues esta tas s a los los microorganismos mediante el manejo del laboratorio.
Métodos para aislar cultivos puros. Técnica de siembra por estrías en placa y técnica de siembra por difusión en placa. placa . Con un asa bacteriológica, bacteriológica, se pasa una porción de la muestra ala superficie superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se siembra en el medio ya sea por estrías o por difusión. Para sembrar por difusión en placa, por lo común se usa una varilla de cristal estéril para esparcir la muestra. Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas unas de otras. Cabe suponer que cada colonia aislada es descendencia de una sola célula y por lo tanto un cultivo puro. En las especies donde las colonias se agrupan agrupan de manera manera caracterís característica tica,, las colonia colonias s se desarro desarrollan llan a partir de un mismo tipo de células células e igualmente provienen provienen de un cultivo puro. Una porción porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro. Después de una incubación adecuada, el desarrollo se observa al microscopio o mediante cultivo para verificar si es puro. La técn técnic ica a de siem siembr bra a en plac placa a con con estr estría ías s y por por difu difusi sión ón se pued puede e hace hacer r convincentemente y con equipo mínimo; estos son procedimientos de rutina que se efectúan para aislar bacteria en cultivos puros. Aunque sus limitaciones son que que solo solo pequ pequeña eñas s canti cantidad dades es de la muest muestra ra puede pueden n ser ser espar esparcid cidas as en la superficie del medio de cultivo. Técnica de la placa invertida. Su principio es la dilución de la muestra en tubos de agar fundido y enfriado. Se necesita hacer hacer diluciones en mas de un tubo para obtener colonias colonias bien aisladas, si es que no se conoce la magnitud de la población bacteriana de la muestra antes de manejarla. El medio se mantiene al estado liquido a una temperatura de 45°C para permitir que el inoculo se distribuya adecuadamente en el medio. Una vez sembrado el medio se pone en cajas de petri, se deja solidificar y después se incub incuba. a. Como Como alguno algunos s micro microorg organ anis ismo mos s qued quedan an atrapa atrapado dos s en el agar agar,, se observaran colonias tanto en la superficie como en el medio cuando este solidifica. Esta técnica se hace de forma cualitativa o cuantitativa. Cuando se hace de forma cuan cuanti tita tati tiva va podr podrem emos os dete determ rmin inar ar el nume numero ro de bact bacter eria ias( s(de de un tipo tipo en particular)en la muestra así como aislarlas en cultivo puro. Las técnicas de siembras por estrías y la de placa invertida para aislar cierta clase de bacterias, pueden mejorarse con medios de cultivos selectivos o diferenciales.
También es posible tratar el medio para eliminar otro tipo de bacterias diferentes de las que se desean aislar, antes de sembrar en las placas.
Técnica de enriquecimiento de cultivo. Para mejorar las posibilidades de aislamiento de algunos tipos fisiológicos poco frecuentes de bacterias, los procedimientos de la siembra en placa deberán estar precedidos del desarrollo de las bacterias en un cultivo de enriquecimiento. El princ principi ipio o de esto, esto, es procu procurar rar un ambie ambiente nte de culti cultivo vo dise diseñad ñado o que que pued pueda a favorecer el desarrollo de cierto tipo concreto de bacterias que necesitaremos pero que no sea adecuada para los demás. Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando un tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy pequeñas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que muchas de las otras especies presentes en el inoculo. Mantenimiento y preservación de cultivos puros. La mayoría de los laboratorios laboratorios de bacteriología cuentan con una gran variedad de este tipo de cultivos, que frecuentemente frecuentemente se denominan denominan colección de cultivos tipo. Es muy importante tener identificadas las bacterias del cultivo puros listas para usarse usarse.. La mayo mayoría ría de las comp compañ añía ías s indus industri trial ales es de produ producto ctos s biológ biológico icos, s, mantienen colecciones de cultivos bacterianos en cantidades importantes. Estos cult cultiv ivo os se empl emplea ean n para pro probar la efectiv ctivid ida ad de agentes tes químico icos míoterapéuticos y potencialmente efectivos, así como cultivos de referencia para estudios taxonómicos., como agentes de ensayo para antibióticos y vitaminas, y como cultivos de referencia que citan en las patentes de las compañías. Métodos de preservación. A fin de desarrollar condiciones propias para la preservación de bacterias se ha realizado un considerable número de investigaciones. Es esencial que el método de prese preserva rvació ción n y mante mantenim nimie iento nto conse conserve rve todas todas las carac caracter teríst ística icas s de las especies como fueron en el momento de la preservación. Algunas técnicas en uso son las siguientes: Resiembra periódica a medios frescos.- los cultivos de bacterias se pueden mantener en tubos de medio en los que han sido cultivados mediante pasos periódicos a medios frescos. Cuando se va a utilizar este procedimiento para mant mantene enerr una una colecc colección ión de culti cultivo vos s se debe deben n deter determi minar nar 3 cosa cosas s antes antes de mane maneja jarl rlo: o: el medi medio o de cult cultiv ivo o apro apropi piad ado o para para usar usarlo lo con con cada cada cult cultiv ivo, o, la temperatura y el tiempo que se necesita para hacer las resiembras. Preservación de cultivos con una capa de aceite mineral.- muchas bacterias se preservan bien cubriendo el agar en el que van creciendo con aceite mineral estéril. Para cultivos de agar inclinado el aceite deberá cubrir mas o menos 1.5 cm pico del agar inclinado. El mantenimiento mantenimiento de la vialidad bajo este tratamiento varia
según la especie de bacteria pero generalmente en cuestión de años. Este método tiene la ventaja de que se pueden tomar muestras del desarrollo bacteriano que esta debajo del aceite con un asa de siembra, inocular medios frescos y aun preservar el cultivo inicial. La facilidad de este método lo hace muy atractivo. Preserv Preservació ación n de cultivos cultivos por secado secado rápido rápido en congelac congelación ión (liofiliz (liofilizació ación).n).este este proce procedi dimie miento nto es el mas mas efica eficaz z much muchas as espec especies ies pres preserv ervada adas s por por esta esta técnic técnica a han han perm perman aneci ecido do viable viables s e invari invariab able les s por por mas mas de 20 años. años. En este este proced procedimi imient ento o las célul células as se seca secan n rápid rápidam amen ente, te, mientr mientras as son conge congelad ladas as,, mediante las siguientes etapas: la suspensión de células se pone en pequeños frascos que se sumergen en una mezcla de hielo seco y alcohol (-78°C) los frascos se conectan inmediatamente a una línea de alto vació y una vez que termino el secado cada frasco se sella bajo condiciones de vació. Características del cultivo Una Una de las las cara caract cter erís ísti tica cas s prin princi cipa pale les s de las las bact bacter eria ias s es su apar aparie ienc ncia ia (características de desarrollo) seguida del crecimiento de diferentes medios de cultivo. Estas características generales como el color, abundancia de crecimiento y aun el olor del cultivo nos pueden servir de guias para la identificación. Para determin determinar ar las caracter característi ísticas cas de desarroll desarrollo o de un cultivo cultivo puro es costumb costumbre re observar los siguientes aspectos del cultivo: 1.-tipos de colonias en agar( cultivo en placas). 2.-desarrollo en agar inclinado. 3.-desarrollo en caldo. 4.-Desarrollo en gelatina por picadura Los cultivos en agar inclinado se preparan haciendo haciendo la inoculación inoculación por estrías con un asa de siembra más o menos de la zona para arriba de la zona inclinada del agar. Para efectuar los cultivos por picadura, se debe usar la aguja de siembras rectas que se introduce a la gelatina en línea recta desde la superficie al fondo del tubo y retirarlo por el mismo lugar que se introdujo. Los tubos de caldo se pueden sembrar con el asa o con agujas de siembras; en Gral. Se usa el asa cuando el medio de cultivo es líquido. Después de la siembra del medio de cultivo y después de la incubación, incubación, se puede determinar las características de cultivo del microorganismo. Los aspectos más peculiares del desarrollo en cada uno de los medio y se resumen de la siguiente manera: Colonias en placas de agar. Tamaño.-lo Tamaño.-los s limi limites tes de las colon colonias ias varían varían desd desde e muy muy pequ pequeña eñas, s, que mide miden n solamente unas fracciones de milímetros de diámetro, hasta colonias muy grandes que miden 5 o 10mm de diámetro. La mayoría de las bacterias forman colonias de tamaño limitado de acuerdo con el periodo de incubación.
Margen o Bordes.- los bordes de las colonias bacterianas son de diferentes tipos según la especie de la que se trate. Pueden formar un círculo perfecto, como las orillas de una gota o mostrar una gran variedad de irregularidades como como salientes redondas, hendiduras irregulares, proyecciones filiformes o en forma de raíz. Elevación.-las Elevación.-las colonias pueden ser muy finas (aplanadas) o gruesas (elevadas). Las colonias elevadas muestran diferentes grados de convexidad. Cromogenesis o pigmentación.pigmentación.-las colonias pueden estar coloreadas o sin color. Algunas especies especies se caracterizan caracterizan por los matices que presentan de rojo, amarillo, café y violeta. Características ópticas.-las ópticas.- las hay opacas, transparentes u opalescentes. Desarrollo en agar(inclinado) por estrías. Cantidad.- escaso, moderado o abundante. Marg Margen en o bord borde e del del desa desarr rrol ollo lo..-un unif ifor orme me o incl inclus uso o pres presen enta tand ndo o vari varias as irregularidades en cierta manera similares a las irregularidades descritas para las colonias. Consi Consiste stenci ncia a de la masa masa desarr desarroll ollada ada..-cons consiste istencia ncia manteco mantecosa sa fácilme fácilmente nte removibles con una aguja de siembras, viscosas o filamentosas, secas y brillantes. Cromogenesis.
Desarrollo en caldo nutritivo. Cantidad del desarrollo.- escaso, moderado y abundante. Distribuc Distribución ión del desa desarrol rrollo lo en el caldo. caldo. Uniformemente Uniformemente distribuido(turbied distribuido(turbiedad ad uniforme), desarrollo confinado a la superficie del caldo como nata o pelusa, o desarrollo que se acumula como sedimento, que es granular o viscoso. Olor.- pútrido, a frutas, aromático o imperceptible.
Desarrollo de gelatina por picadura. Desarrollo (sin licuefacción) licuefacción) a lo largo de la línea de inoculación.-El inoculación.- El desarrollo puede estar limitado a la zona de la picadura o puede haberse expandido mas allá de la picadura.
Licuefac Licuefacción ción de la gelatina gelatina..- se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos variados de embudos al licuar la gelatina.
BIBLIOGRAFÍA
Enciclopedia Microsoft encarta 2004 Microbiología, Pelczar/Reid/Chan, cuarta edición, editorial MC.GRAW-HILL, Capitulo 8, Pág. 117.
UNIVERSIDAD DE SONORA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS LABORATORIO DE ANÁLISIS MICROBIOLOGICOS *OBTENCIÓN DE UN CULTIVO PURO*
ALUMNO: GRIJALVA MATUS JESÚS ADAN
LUNES 23 DE ENERO DEL 2005
