Determinación de ácido ascórbico por espectrofotometría ervantes '. # 6imentel 9. 2# 6inón . :. Universidad autónoma autónoma de iriu+# $acultad de ciencias naturales y e*actas# escuela de $armacia# laboratorio de anal+tica 22;# pro$esora Lilibet
auella ue tiene la energ+a reuerida para mover un electrón desde un nivel de energ+a in$erior a uno superior.
Resumen
O H H O
5
O
4 3 H O
1
O
2 O H
Las bandas de absorción uv/visible se deben a transi transicio ciones nes electr electróni ónicas cas en la región región de 200nm 200nm a 780nm. 780nm. La radiac radiación ión ultrav ultraviol ioleta eta (UV) y visible comprende sólo una peue!a parte parte del del espe espect ctro ro elec electr trom omag agn" n"tic tico# o# ue ue incluye otras $ormas de radiación como radio# in$rarro%o (&')# cósmica y rayos . uando la radiación interacciona con la materia# pueden ocur ocurri rirr vari varios os proc proces esos os como como re$l re$le* e*ió ión# n# dispersión# absorbancia# $luor $luores esce cenc ncia ia/$o /$os$ s$or ores esce cenc ncia ia (abs (absor orci ción ón remisión) y una reacción $otou+mic mica (absorbancia y rotura de enlaces).,n general# cuando se miden espectros UV-visible# sólo es deseable ue ocurra absorbancia. omo la lu es una $orma de energ+a# la absorción de la lu por la materia causa ue aumente el conten contenido ido de energ+ energ+a a de las mol"cu mol"culas las (o tomos tomos).L ).La a energ+ energ+a a potenc potencial ial total total de una mol"cula# generalmente se representa como la suma de sus energ+as electrónica# vibr vibrac acio iona nall y rota rotaci cion onal al.. La cant cantid idad ad de energ+ energ+a a ue ue una mol"cula mol"cula posee posee en cada cada $orma no es un continuo# sino una serie de nive nivele les s o esta estado dos s disc discre reto tos. s. ,n algu alguna nas s mol"culas y tomos# los $otones de lu UV y visible tienen su$iciente energ+a para causar transiciones entre los di$erentes niveles. La longitud de onda de la lu absorbida es
La ley de eer es id" id"ntica a la ley de ouguer# e*cepto porue est e*presada en t"rminos de la concentración. La cantidad de lu absorbida es proporcional al n1mero de mol"culas absorbentes por las ue pasa la lu. iendo Ley de eer3 45Ɛ c ien iendo doƐ el coe$ coe$ic icie ient nte e de e*ti e*tinc nció ión# n# es caracter+stico de una sustancia en condicion condiciones es de$inidas de$inidas de longitud longitud de onda# onda# disolvente y temperatura. ,n la prctica# el coe$ coe$ic icie ient nte e de e*tin e*tinci ción ón medi medido do tamb tambi" i"n n depende de las caracter+sticas del inst instru rume ment nto o utili tili ado. do. 6or esta esta raó raón# n# normalmente no se utilian valores predeterminados del coe$iciente de e*tinción para para anlis anlisis is cuanti cuantitat tativo ivo.. ,n su lugar lugar## se construye una curva de calibración o curva de trab traba% a%o o para para la sust sustan anci cia a a anal anali iar ar## utiliando una o dos disoluciones patrón con concentraciones conocidas del analito. 6ara trans transicio iciones nes electr electróni ónicas cas## la di$ere di$erenci ncia a de energ+ energ+a a entre entre los estado estados s $undam $undament entale ales s y e*ci e*cita tado dos# s# es rela relativ tivam amen ente te gran grande de.. 6or 6or tant tanto# o# a temp temper erat atur ura a ambi ambien ente te## es muy muy probable ue todas las mol"culas est"n en estado electrónico $undamental. La absorción y vuelta al estado $undamental# son procesos rpi rpid dos y el euil uilib ibri rio o se alca lcana na muy muy rpidamente. 6or consiguiente# la absorción de lu UV-visib UV-visible le es cuantitativ cuantitativament amente e muy e*ac e*acta ta.. La simp simple le rela relaci ción ón line lineal al entr entre e la absorbancia y la concentración y la relativa $acilidad de medida de la lu UV-visible# a ec eco o de la espe espect ctro rosc scop op+a +a UV-v UV-vis isib ible le la base de miles de m"todos anal+tico icos cuant cuantita itativ tivos. os. Un espect espectro$ ro$otó otómet metro ro es un instru instrumen mento to para para medir medir la transm transmita itanci ncia a o
absorbancia de una muestra# en $unción de la longitud de onda de la radiación electromagn"tica. Los componentes clave de un espectro$otómetro# son3 = Una $uente ue genera una banda anca de radiación electromagn"tica = Un dispositivo de dispersión ue selecciona una longitud de onda particular (o <s correctamente# una banda de ondas) de la radiación de la $uente = Un rea de muestra = Uno o ms detectores para medir la intensidad de la radiación.
Objetivos •
4plicar la t"cnica de espectro$otometr+a en el anlisis de la muestra de inter"s $armac"utico.
Palabras claves ,spectro$otometr+a# paracetamol# soluciones# absorción.
Marco teórico La vitamina # o cido ascórbico# es un compuesto idrosoluble de > tomos de carbono relacionado con la glucosa. u papel biológico principal parece ser el de actuar como co$actor en diversas reacciones enimticas ue tienen lugar en el organismo. ,l cido ascórbico act1a como coenima de las idro*ilasas de prolina y lisina# encargadas de idro*ilar la lisina y prolina en el protocolgeno# modi$icación necesaria para ue "ste pueda $ormar los enlaces cruados para $ormar las $ibrillas de colgeno. ,n este sentido# la vitamina es importante para el mantenimiento del te%ido con%untivo normal# para la curación de
eridas y para la $ormación del ueso# ya ue el te%ido óseo contiene una matri orgnica con colgeno. ,n su condición de agente reductor# el cido ascórbico posee otras propiedades importantes# ue parecen ser no enimticas. 6or e%emplo# ayuda a la absorción del ierro al reducirlo a su estado $erroso en el estómago? protege la vitamina 4# vitamina , y algunas vitaminas de la o*idación? tambi"n $avorece la utiliación del cido $ólico ayudando a la conversión del $olato en tetraidro$olato o mediante la $ormación de derivados poliglutamato del tetraidro$olato. @inalmente# la vitamina es un antio*idante biológico ue protege al organismo del estr"s o*idativo provocado por las especies o*igeno reactivas. La mayor parte de s+ntomas de la carencia de vitamina C se puede relacionar directamente con sus papeles metabólicos. ,ntre los s+ntomas de carencias leves de vitamina se encuentran la $acilidad para producir eridas# debido al incremento de la $ragilidad de los capilares. ,l escorbuto est asociado con una disminución en la capacidad de curar eridas# osteoporosis# emorragias y anemia. La vitamina se encuentra principalmente en alimentos de origen vegetal y puede presentarse en dos $ormas u+micas interconvertibles3 cido ascórbico ($orma reducida) y cido deidroascórbico ($orma o*idada)# siendo ambas $ormas $uncionales biológicamente y manteni"ndose en euilibrio $isiológico. i el cido deidroascórbico es idratado se trans$orma en cido dicetogulónico# no activo biológicamente# siendo esta trans$ormación irreversible. ,sta idratación ocurre espontneamente en disolución neutra o alcalina.
Materiales y reactivos Tabla#! Materiales
Cantid ad
,spectro$otom etro UV eldas de cuaros 6olicial
Capacid ad
fase acuosa
cm
2
--------00;00mL 00mL 0mL
2
002;0mL
"ase eperimental
• pasar al volumetrico de 50mL
aforar con el acido oxalico
Resultados $! Preparacion de la muestra 6esamos 0#:>;Bg de vitamina agragamos acido o*alico al ;C omogeniamos y llevamos a un matra de 00mL g-------00mL
pesar la vitamina
0#:>;BgD a$orar en un matra agregar ;0mL de acido o*alio
e*traer una alicuota de ;mL verter en otro matra y a$orar.
tomar 2;ml de la vitamina Adicloro$enol (gota a gota)asta obtener un color rosado.
%& '()!*+m, :>;.BEmg------00mg -----------------0mg
%& '(-)*+m, mg--------000mg
esperar 2 minutos a!adir 2;mL de eter en un embudo de separación
------------:>#;BEmg 50#0:>;g
Condensacion lavar agregar 5mL de acido oacalico
( AM AMBL) xR x 200 ( AP APBL ) −
lavar nuevamente agregar 10mL de acido oxalico
−
mg-------000mcg -----------000mcg 5mg/mL.
=
0,095 A
−
0 Ax 50 mcg
0,019
−
0 A
x 200 1 =
Discusion ,l 44 se clasi$ica como una vitamina idrosoluble# raón por la cual es abundante en $rutas cuyo contenido de agua es superior al ;0 C? esta vitamina se degrada muy $cilmente por cambios de temperatura# incidencia de la radiación y concentración de o*+geno. u e*tracción de $uentes naturales debe realiarse en medio cido y con la m+nima cantidad de radiación. Lo primero ue se realio $ue 6ara la solución patrón se peso 0.0g de cido ascórbico se a$oro en un matra de ;0mL con acido o*lico se e*tra%o una al+cuota a la ue se le a!adió ;0mL de agua. Fespu"s se peso cierta cantidad de acido ascórbico se a$oro en un matra al ue se le adiciono ;0mL de acido o*lico se e*tra%o ;mL se a$oro nuevamente en un matra de 00mLseguido de esto en la segunda parte se tomo 2;ml de la vitamina c (acido ascórbico) se adiciono GH Fe dicloro$enol (gota a gota) asta ue se tornara de color rosado# luego se espero apro*imadamente 2minutos ara a!adirle2;mL de "ter en un balón de destilación# se $ormaron dos $ases una acuosa y la otra ent"rica la acuosa se paso a un volum"trico de ;0mL y se a$oro con acido o*lico# la otra $ase se lavo y se agrego ;mLm de acido o*lico nuevamente se $ormaron dos $ases se lavo el recipiente y se a!adió 0mL de acido o*lico. ,n general# cuando se miden espectros UVvisible# sólo es deseable ue ocurra absorbancia. omo la lu es una $orma de energ+a# la absorción de la lu por la materia causa ue aumente el contenido de energ+a de las mol"culas (o tomos). La energ+a potencial total de una mol"cula# generalmente se representa como la suma de sus energ+as electrónica# vibracional y rotacional. La cantidad de energ+a ue una mol"cula posee en cada $orma no es un continuo# sino una serie de niveles o estados
discretos. ,n algunas mol"culas y tomos# los $otones de lu UV y visible tienen su$iciente energ+a para causar transiciones entre los di$erentes niveles. La longitud de onda de la lu absorbida es auella ue tiene la energ+a reuerida para mover un electrón desde un nivel de energ+a in$erior a uno superior. Ieneralmente se piensa ue Lambert (7>0) $ormuló la primera ecuación matemtica sobre este e$ecto# aunue aora parece ue se le adelantó ouguer en 72B. La e*presión matemtica es3 J5 &/&05K-b. Fonde &o es la intensidad incidente# & es la intensidad transmitida# e es la base de los logaritmos naturales# es una constante y b es el paso óptico (normalmente en cent+metros). La ley de eer es id"ntica a la ley de ouguer# e*cepto porue est e*presada en t"rminos de la concentración. La cantidad de lu absorbida es proporcional al n1mero de mol"culas absorbentes por las ue pasa la lu. iendo Ley de eer3 45Ɛbc iendo Ɛ el coe$iciente de e*tinción# es caracter+stico de una sustancia en condiciones de$inidas de longitud de onda# disolvente y temperatura. ,n la prctica# el coe$iciente de e*tinción medido tambi"n depende de las caracter+sticas del instrumento utiliado. 6or esta raón# normalmente no se utilian valores predeterminados del coe$iciente de e*tinción para anlisis cuantitativo. ,n su lugar# se construye una curva de calibración o curva de traba%o para la sustancia a analiar# utiliando una o dos disoluciones patrón con concentraciones conocidas del analito. 6ara transiciones electrónicas# la di$erencia de energ+a entre los estados $undamentales y e*citados# es relativamente grande. 6or tanto# a temperatura ambiente# es muy probable ue todas las mol"culas est"n en estado electrónico $undamental. La absorción y vuelta al estado $undamental# son procesos rpidos y el euilibrio se alcana muy rpidamente. 6or consiguiente# la absorción de lu UV-visible es cuantitativamente muy
e*acta. La simple relación lineal entre la absorbancia y la concentración y la relativa $acilidad de medida de la lu UV-visible# a eco de la espectroscop+a UV-visible la base de miles de m"todos anal+ticos cuantitativos.
como v+a de administración ms utiliada. La vitamina es el t"rmino gen"rico para el cido L-ascórbico y su $orma o*idada cido desidroascórbico# ambos muestras actividad de vitamina . Las dos $ormas pueden convertirse con $acilidad una en la otra.
Conclusion
./.0/O1R$"2$
,l cido ascórbico en estado seco es estable con el aire. ,n preparados $armac"uticos y en mucos productos naturales# la vitamina se o*ida por e*posición al aire y a la lu. 6osee un $uerte poder reductor# las soluciones acuosas se o*idan rpidamente al aire# la reacción se e*alta en medio alcalino y en presencia de indicios de metales# principalmente ierro y cobre. Febe conservarse en recipientes bien cerrados protegido de la lu y la umedad. 6ara su uso m"dico se usa en $orma de comprimidos#
•
•
•
oog F. Moller %. Nieman J. 6rincipios de 4nlisis &nstrumental# uinta edición.
