Espectrofotometría Del Visible - Informe

Laboratorio de Análisis Químico II

INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ESPECTROFOTOMETRÍA DEL VISIBLE SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA ANALÍTICA

I OBJETIVOS   

Oerar adecuadamente el esectro!ot"metro comutari#ado $%imad#u &'( ) A * Obtener esectros o Cur+a de absorci"n $eleccionar la lon,itud de onda de traba-o. má/ima o analítica

II GENERALIDADES En cada tio de sustancias los átomos. iones o mol0culas absorben con cierta re!erencia lon,itudes de onda de una determinada ,ama de !recuencias1 esto %ace 2ue los átomos. iones o mol0culas uedan identi!icarse mediante la lon,itud de onda a 2ue se da lu,ar la absorci"n* En el análisis esectro!otom0trico. las mediciones de absorbancia se reali#an ordinariamente a una lon,itud de onda 2ue corresonda a un má/imo del esectro de absorci"n* 3ara ello en una determinaci"n deberá obtenerse siemre una cur+a de absorci"n o esectro de absorci"n ara ubicar en ella el ico más alto 4 seleccionar la lon,itud de onda a la cual se roduce ese ese má/imo de absorci"n* absorci"n* A esta lon,itud lon,itud de onda se denomina lon,itud de onda analítica. de traba-o o má/ima 4 es la lon,itud de onda a la cual se reali#a la medici"n cuantitat cuantitati+a* i+a* A esta lon,itud lon,itud de onda la +ariaci"n +ariaci"n de absorbancia or unidad de concentraci"n es má/ima. con lo cual se obtiene la sensibilidad má/ima*

III FUNDAMENTO 3ara encontrar la cur+a de absorci"n se irradia a la soluci"n coloreada con ener,ía radiante de una ,ama de lon,itudes de onda de tal manera 2ue a cada lon,itud de onda se mide su +alor de absorbancia o de 5 de transmitancia1 esta ener,ía absorbida se traduce traduce en un esectro esectro de absorci"n 2ue es obtenido en !unci"n de los +alores de absorbancia o de 5 de transmitancia !rente a las lon,itudes de onda* En la cur+a se %ace un barrido esectral 4 se ubica el má/imo ico o +alle más ro!undo 2ue corresonde a un má/imo de absorbancia a una determinada lon,itud de onda1 a esta lon,itud se denomina lon,itud de onda analítica. "tima o de traba-o*

IV ARREGLO EXPERIMENTAL EXPERIMENTAL

V APARATOS    

Esectro!ot"metro $%imad#u &'( ) A* Cubeta6 &cm de tra4ecto "tico* Re,i"n de traba-o6 esectro +isible 789( ) '(( N:;* Blanco6 a,ua destilada .



VI MATERIALES   

asos >asos de reciitaci"n de =9(ml .

VII REACTIVOS   

$oluci"n $toc? de erman,anato de otasio (.&((( N* $oluci"n de erman,anato de otasio con concentraci"n de &(( m,@L 7m; de man,aneso $oluciones estandares o atrones.

VII TÉCNICA 1.-

PREPARACIÓN PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

A) Prep Prepar arac ació ión n de una una solu soluci ción ón dílu díluid idaa de 100 100 pp pp en an!aneso

ison isoner er de una soluci soluci"n "n stoc? stoc? de :nO8 :nO8 (*&((( (*&((( N. re+ia re+iamen mente te +alora +alorada* da* Calcul Calcular ar su concen concentra traci" ci"n n en artes artes or mill"n mill"n re!eri re!erida da a man,aneso* man,aneso* 3rearar 3rearar a artir artir de la soluci"n soluci"n stoc? stoc? de =9( ml de una una soluci"n de &(( **m* de man,aneso

") Preparaci Preparación ón de soluci soluciones ones pa#rone pa#rones s o es#$ndare es#$ndaress

3rearar or diluci"n &(( mililitros de los si,uientes atrones6 =. 8. '. .&(. &=. 4 &' m*

2.- SELECCIÓN DE %ODO "&SICO DE 'RA"A(O

Cuando Cuando el interr interrut utor or de otenc otencia ia es lle+ad lle+ado o a Don D. el instru instrumen mento to es iniciali#ado en  minutos. 4 entonces indica en antalla el menF de modo básico,

%ENU DE %ODO "ASICO %odo No D D &*)


9*) Cuantitati+o '*) :ulticomonente *) :emoria *) $eHalamiento de condici"n *) Enlace 3resione el Nro D= D4 lue,o la tecla ENTER ara seleccionar el modo Desectro D* El blanco a emlear es a,ua destilada* 3.-

A(US'E DE PAR&%E'ROS ANAL'ICOS

Lue,o 2ue el modo básico es seleccionado. es necesario rimero establecer los arámetros analíticos de medici"n si,uientes6

MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO Espectro

Cambio de parámetros s/n

1.- λ s = 600,0 nm 2.- Medición (ABS / T %) = ABS. 3.- Sue!i"! = # 1,00 A 4.- &e'"cidd de !!id" = !*id 5.- +ic'" T = 60 se.  =1 6.- +u!i! Si .- +"i! " .- B!!id" BS " .- i'

λ E = 450,0 $ne!i"! = # 0,00 A

$i desea cambiar un arámetro resione la tecla DJes De in,rese el nFmero del arámetro corresondiente. 4 lue,o in,rese el nue+o +alor ara el arámetro indicado or el cursor* A%ora si el in,reso es err"neo resione la tecla D CE D4 rein,rese el nue+o +alor* Cuando el arámetro indicado or el cursor no será cambiado. resione directamente la tecla DENTER D* Cuando el roceso de cambio de arámetro está comleto. resione la tecla D NO Dara terminar el rocedimiento . 4.-

%EDICIÓN DE S'&NDARES

Kna +e# a-ustados los arámetros de medici"n 4 al resionar la tecla DNo Dara el cambio de arámetro aarece el mensa-e de insertar una muestra 4 resionar la tecla DS#ar * S#op D*El esectro medido es indicado en la antalla*

+,- PROCESA%IEN'O DE DA'OS Cuando la medici"n termina. se indica el mensa-e +ESAM$ET DE DATOS S/.

a) $i no es necesario el rocedimiento de datos. resionar O 7 es osible indicar la lon,itud de onda 4 +alor medido a cual2uier osici"n deseada en el esectro medido. la cual es reco,ida or el cursor usando la tec%a ))))) o )))))) *Al esectro medido uede ser ,rabado en coia con la tec%a DCOP. /, b; $i es necesario un rocesamiento de datos. resionar D$I 4 es osible %acer los si,uientes rocesamientos de datos6 1 3ara almacenar el esectro medido en la memoria*** resionar 1 EN'ER 7nFmero de canal; EN'ER* 2! 3ara e/andir o comrimir el esectro***resionar  EN'ER. 4 entonces a-ustar los arámetros de escala en la abcisa 4 ordenada de acuerdo con la indicaci"n del cursor resionando 7+alores; EN'ER. sino %a4 cambio necesario. s"lo resionar EN'ER.



esu0s de 2ue el esectro es indicado con nue+os arámetros de escala. el sistema re,unta /2OL2ER A LA CUR2A ORI3INAL S* N4 , $i resiona /SI4 se obtiene de nue+o el esectro ori,inal1 si resiona la tecla D NO / el esectro e/andido es almacenado en la memoria* • 3ara %acer una detecci"n de ico***resionar 5 EN'ER. 4 entonces cada ico 4 +alle son marcados 4 tambi0n sus lon,itudes de onda 4 +alores son imresos* 3ara obtener un esectro deri+ado o esectro sua+i#ado*** resionar 6 EN'ER 4 lue,o in,resar la orden deri+ada resionando 7N) EN'ER de acuerdo con la indicaci"n de la antalla* Cuando el rocedimiento es terminado. con la escala automáticamente a-ustada al +alor deri+ado* El sua+i#ado corresonde a la orden deri+ada* 3ara imrimir datos a inter+alos de lon,itud de onda re,ulares*** 3resionar + EN'ER 7inter+alo de lon,itud de onda; 4 resionar EN'ER 3ara lotear los datos en el loteador M)J.*** resionar 8 EN'ER, Cuando termine sus rocedimientos de datos aarece en antalla la cur+a debidamente sua+i#ada con los arámetros de absorbancia !rente a las lon,itudes de onda en N:* Con el cursor ubicar el ico más alto de la cur+a. aareciendo en antalla los +alores de absorbancia 4 lon,itudes de onda 2ue corresonde a ese ico*

VIII INTERPRETACION DE DATOS El esectro medido uede ser ,rabado en coia con la tecla de /COP. D* Imrimir las cur+as esectrales en un sistema de coordenadas teniendo en cuenta los si,uientes arámetros6 Absorbancia !rente a lon,itudes de onda

•

3orcenta-e de transmitancia !rente a lon,itudes de onda*



IX DISCUSION DE DATOS $eHalar las conclusiones 2ue se desrenden de los ,rá!icos obtenidos*

X CUESTIONARIO

&*) e!ínase bre+emente6 a; La radiaci"n monocromática 4 olicromatica b; Esectro de absorci"n c; 3or2ue es imortante monocromati#ar la radiaci"n olicromática =*) describir la di!erencia entre un esectro!ot"metro 4 un !ot"metro *) En la lon,itud de onda de traba-o obtenida en la arte e/erimental a 9=9 nm calcular la cantidad de ener,ía 2ue le corresonde a esa radiaci"n* Comararla con una lon,itud de onda de =(( nm 2ue corresonde a la re,i"n K> 8*) Que tio de in!ormaci"n roorciona el esectro de absorci"n 9*) $eHale al,unas ra#ones el or2ue determina la lon,itud de onda analítica o de traba-o '*) Indicar 2ue !ormas conoce ara reresentar una cur+a de absorci"n *) Que es un esectro de absorci"n at"mica 4 2ue es un esectro de absorci"n molecular



IN9OR%E DE LA"ORA'ORIO : 1 SE"ECCI# DE "A "O$IT%D DE ODA DE TRABA&O 9EC;A < *05*018

No 3RUPO< =

AN&LISIS< O>#ención del espec#ro de a>sorción ? selección de la lon!i#ud de onda de #ra>a@o $io o analí#ica, METODO' Espec#roscopia del Bisi>le M%ESTRA' Solución s#oc de %nO6 0,1000 N SolBen#es pa#rones de %nO6 CA"C%"OS' A;

Cálculo de la concentraci"n de la soluci"n stoc? de :nO 8 (*&(((N e/resada en m re!erida en :an,aneso*

0.0933

meq 0.031603 g KMnO 4 54.94 g Mn 1000 mg 1000 ml x x x x ml 1 meq KMnO 4 158.03 KMnO 4 1g 1 L

X I =1025.1804 mg

B; Cálculo del +olumen de la soluci"n stoc? re2uerido ara rearar una soluci"n de &(( m en man,aneso ara un +olumen de =9( ml* X I x V I =100 ppm x 250 ml 1025.1804 ppm xV I =100 ppm x 250 ml

V I =24.38 ml

C) Cálculos ara rearar &(( ml de las soluciones atrones o estándare s de

=. 8. '. .&(. &= 4 &' m* 3atr"n &6 100 ppm x V I =2 ppm x 100 ml



V I =2 ml

3atr"n =6 100 ppm x V I =4 ppmx 100 ml

V I

=

4 ml

3atr"n 6 100 ppm x V I =6 ppm x 100 ml

V I =6 ml

3atr"n 86 100 ppm x V I =8 ppmx 100 ml

V I

=

8 ml

3atr"n 96 100 ppm x V I =10 ppm x 100 ml

V I =10 ml

3atr"n '6 100 ppm x V I =12 ppm x 100 ml

V I =12 ml

3atr"n 6 100 ppm x V I =16 ppm x 100 ml

V I =16 ml

3ATRON & =  8 9 ' 

>OLK:EN $OLKCION ILKIA =*( ml 8*(ml '*(ml *(ml &(*( ml &=*(ml &'*( ml

>OLK:EN
CONCENTRACION m :n =*( 8*( '*( *( &(*( &=*( &'*(



TAB"A DE RES%"TADOS

O"'ENER LOS 2ALORES DE A"SOR"ANCIA 7A"S) DE LA SOLUCIÓN PRO"LE%A EN UN IN'ER2ALO DE LON3I'UDES DE ONDA DE 6+0 - 800 N%,

7a) Espec#ro de a>sorción en #rinos de a>sor>ancia 7A"S) Fren#e a las lon!i#udes de onda 7n )



O"'ENER LOS 2ALORES DE 'RANS%I'ANCIA 7G ') DE LA SOLUCIÓN PRO"LE%A EN UN IN'ER2ALO DE LON3I'UDES DE ONDA DE 6+0 - 800 n,

7>) ESPEC'RO DEL PORCEN'A(E DE 'RANS%I'ANCIA 7G ') 9REN'E A LON3I'UDES DE ONDA 7N%)



DISC%SI# DE RES%"TADOS •

•

La lon,itud de onda de traba-o encontrada es de. 9=9*8 nm 4a 2ue ese !ue el ico más alto en el esectro de absorbancia* La oeraci"n de esectr"metro el esectro!ot"metro comutari#ado $%imad#u &'(  A es mu4 delicada. ero se udo comletar la ráctica*



CUES'IONARIO 1,- DeFínase >reBeen#e< a) La radiación onocro$#ica ? policroa#ica La lu# monocromática es a2uella 2ue está !ormada or comonentes de un solo color* Es decir. 2ue tiene una sola lon,itud de onda. corresondiente a ese color* Esto 2uiere decir 2ue ara roducir radiación onocro$#ica. se ,eneran los electrones or medio del calentamiento de un !ilamento 4 lue,o los aceleramos en un camo electroma,n0tico. los electrones de alta ener,ía c%ocan contra un ánodo con su!iciente +elocidad ara enetrar las caas electr"nicas e/ternas del material del ánodo* Cuando el electr"n c%oca con la caa de electrones . el electr"n incidente remue+e su "rbita al electr"n de la caa * El átomo ierde uno de sus electrones de la caa  4 está en condici"n metaestable. en consecuencia el electr"n de la caa L entra a llenar la caa * La radiaci"n 2ue contiene +arias lon,itudes de onda se llama radiaci"n olicromática* La a,ruaci"n de todas las lon,itudes de onda 2ue comonen la radiaci"n olicromática 74 sus intensidades luminosas resecti+as; se denomina esectro*

>) Espec#ro de a>sorción Es. en cierto sentido. el ouesto de un esectro de emisi"n* Cada elemento 2uímico osee líneas de absorci"n en al,unas lon,itudes de onda. %ec%o 2ue está asociado a las di!erencias de ener,ía de sus distintos orbitales at"micos*

c) PorHue es ipor#an#e onocroa#iar la radiación policro$#ica 3or2ue es imortante monocromati#ar la radiaci"n olicromática6 3or2ue cuando %acemos asar una lu# olicromática a tra+0s de un ob-eto. este absorbe al,unas lon,itudes de onda 4 transmite las 2ue no absorbe como colores.

,- descri>ir la diFerencia en#re un espec#roFo#óe#ro ? un Fo#óe#ro Estos son e2uios utili#ados en el Laboratorio ara el análisis de muestras !isiol",icas. basándose en el rinciio 2ue cada comuesto 2uímico absorbe o emite ener,ía lumínica de di!erente lon,itud de onda* Esta lon,itud uede estar en el esectro de lu# +isible. o en otra arte del esectro electroma,n0tico* La di!erencia !undamental entre un esectro!ot"metro 4 un !ot"metro o !otocolorímetro. consiste en 2ue el !otocolorímetro traba-a Fnicamente en el esectro de lu# +isible 4 selecciona una lon,itud de onda determinada mediante !iltros !i-os*En cambio. un Esectro!ot"metro es caa# de traba-ar. no solo con la lu# +isible sino 2ue en otras re,iones del esectro electroma,n0tico 7ultra+ioleta e in!rarro-a;* Además osee un monocromador ara seleccionar la lon,itud de onda deseada



5,- En la lon!i#ud de onda de #ra>a@o o>#enida en la par#e eperien#al a ++ n calcular la can#idad de ener!ía Hue le corresponde a esa radiación, Copararla con una lon!i#ud de onda de 00 n Hue corresponde a la re!ión U2 6,- Jue #ipo de inForación proporciona el espec#ro de a>sorción 8n espectro de absorci(n n"s !""!ci"n un !e!esen9ción !*ic de ' s"!nci de un n'i9" " (" de "9! mni9ud e:ui;'en9e) en unción de ' '"ni9ud de "nd de ' !dición, ', (" de "9!" !*me9!" !e'ci"nd" c"n ' ene!< de ' !dición u9i'id). E' m*>im" de s"!nci "9enid" en e' esec9!" de s"!ción de un n'i9", n"s d!* ' '"ni9ud de "nd :ue !""!ci"n ' m7"! sensii'idd "si'e, 7 "! 9n9" se!* ' :ue se u9i'i!* en e' n*'isis esec9!""9"m?9!ic" de dic@" n'i9".

+,- SeKale al!unas raones el porHue de#erina la lon!i#ud de onda analí#ica o de #ra>a@o Se esc"e ! e' !eis9!" 7/" ' "se!;ción de ' cu!; esec9!' " esec9!" de ' sus9nci :ue indic!* si es decud" 9"m! ' '"ni9ud de "nd de m*>im s"!ción u "9! nd c!c9e!
8,- Indicar Hue Foras conoce para represen#ar una curBa de a>sorción =,- Jue es un espec#ro de a>sorción a#óica ? Hue es un espec#ro de a>sorción olecular La espectroscopia de absorción atómica usa la adsorción de la luz para medir la concentración de la fase gaseosa de átomos. Ya que la mayoría de las muestras son sólidas o líquidas, los átomos o iones de los analitos deben ser vaporizados a la ama o en un horno de grato. os átomos adsorben luz visible o ultravioleta y hacen transiciones a niveles de energía más altos. a concentración del analito es determinada por la cantidad de absorción.

as t!cnicas espectroscópicas de análisis se basan en la observación de las interacciones entre la materia y la radiación electromagnetica. a especicidad de la detección del analito se basara en la selección de longitud de onda de la radiación absorbida en la región visible"#$%& y ultravioleta"'#& del espectro electromagn!tico.



ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE DEMOSTRACION DE LAS LEYES FOTOMETRICAS Y ERROR RELATIVO DE LA CONCENTRACION

I OBJETIVOS • • •

Construir cur+as de calibraci"n >eri!icar la con!ormidad de la le4 Beer eterminar las concentraciones límites de los atrones

II GENERALIDADES esu0s de determinar la lon,itud de onda a la cuál deben de reali#arse las medidas. se calibra el m0todo midiendo una serie de atrones del constitu4ente en estudio* Generalmente se reara una soluci"n diluida de la sustancia 2ue se desea determinar. se ietean cuidadosamente orciones de esta soluci"n. de distinto +olumen. se aHade el reacti+o 2ue !orma color. 4 se a-ustan las condiciones ara 2ue se desarrolle el color en !orma "tima. se dilu4e cada soluci"n a un +olumen redeterminado en una !iola. 4 lue,o se mide la absorbancia de cada soluci"n a la lon,itud de onda analítica o de traba-o* Las medidas de la absorbancia se reali#an comFnmente utili#ando un blanco. 2ue debe ser id0ntico a la muestra en todo. e/ceto en 2ue no debe contener el constitu4ente 2ue se %a de determinar* El blanco deberá contener los reacti+os. aditi+os. disol+ente. etc*. en la misma naturale#a 4 concentraci"n 2ue las utili#adas en cada muestra desconocida en la 2ue se desarrolle color* e esta manera. las lecturas de las muestras están corre,idas automáticamente ara cual2uier absorci"n e2ueHa or acci"n de los reacti+os 4 del disol+ente* Con los datos absorbancia ara las di!erentes concentraciones de las series atr"n se constru4e una cur+a de calibrado* La cantidad de lu# absorbida or cada atr"n se encuentra bien de!inida 4 se debe a-ustar a ciertas le4es !ísicas denominadas le4es !otom0tricas6

a) Le? La>er# - "ou!uer 3resenta dos artes6 &*) DLa relaci"n entre la ener,ía radiante transmitida. 3. 4 la incidente. 3o. es una constante e/resada como T. 4 se denomina TRAN$:ITANCIA* T  3 @ 3o =*) DLa ener,ía de radiaci"n transmitida decrece en ro,resi"n ,eom0trica cuando la lon,itud del camino "tico aumenta en ro,resi"n aritm0tica* $e e/resa matemáticamente de la si,uiente manera6  lo, T  ab  A  ) lo, T  ) 7 3@ 3o ;  lo, 7 3o@ 3 ;

>)

Le? "eer

E/resa la relaci"n entre transmitancia 4 concentraci"n de material absorbente. es decir. 2ue la transmitancia disminu4e en ro,resi"n ,eom0trica cuando la concentraci"n aumenta en ro,resi"n aritm0tica* 3or tanto6



)lo, T  ac  A  ) lo, 73 @ 3o;  lo 7&@ T;

c) Le? Co>inada La>er# - "eer Resulta de la combinaci"n de la le4 de Lambert con la de Beer 4 suele llamarse simlemente le4 de Beer* Esta le4 establece 2ue6 Dla cantidad de lu# o ener,ía ultra+ioleta o in!rarro-a absorbida o transmitida or una soluci"n es una !unci"n e/onencial de la concentraci"n de sus9nci s"!en9e !esen9e 7 de ' '"ni9ud de ' tra4ectoria %acia la muestra* $e obtiene las si,uientes relaciones  A = c = = - '" T = -'" (/ ") = '" (" /  ) = '" ( 1 / T ). "nde

T  transmitancia a  absorti+idad del medio b  Tra4ecto "tico 3  oder de radiaci"n transmitida 3o oder de radiaci"n incidente* Esta !orma matemática de la le4 combinada muestra 2ue la absorbancia A en !unci"n de la concentraci"n Dc es una línea recta de endiente Da. 4 la reresentaci"n de lo, T !rente a la concentraci"n es una línea recta de endiente ne,ati+a* La reresentaci"n ,rá!ica de esta le4 se denomina reresentaciones de la le4 Beer*

III FUNDAMENTO La obtenci"n de la cur+a de calibrado 4 la demostraci"n de la le4 de Beer se determinan e/erimentalmente. rearando una serie de soluciones atrones 4 midiendo la absorbancia de cada soluci"n a la lon,itud de onda analítica. má/ima o de traba-o* Con los datos de absorbancia !rente a las concentraciones de los atrones se ,rá!ica en un sistema cartesiano 4 la reresentaci"n debe ser una línea recta de endiente ositi+a si cumle con la le4 Beer*

IV ARREGLO EXPERIMENTAL

V APARATOS • • • •

Esectro!otom0tro 6 $%imad#u &'( )A Cubeta 6 & cm* e tra4ecto "tico Re,i"n de traba-o 6 Esectro +isible Lon,itud de Onda de traba-o 6 9=9*8 nm

VI MATERIALES •

Laboratorio de Análisis Químico II •


Buretas or =9 ml*

VII REACTIVOS • •

$oluci"n $toc? O.&((N de erman,anato de otasio $oluci"n diluída de erman,anato de otasio de &(( m *de man,aneso soluciones atrones*

VIII TECNICA ).- Preparación de soluciones pa#rones 3rearar a artir de la soluci"n $toc? de :nO 8 (. &(((N una soluci"n estandard diluida de &(( m en man,aneso ara un +olumen de =9( ml 4 lue,o or diluci"n rearar las soluciones atrones si,uientes6

9i!ura 1, 3rearaci"n de soluciones atrones or diluci"n



9i!ura , 3rearaci"n de las muestras a las celdas CUADRO DE SOLUCIONES PA'RONES A PAR'IR DE LA SOLUCIÓN DE 100 pp No Pa#rón & =  8 9 '    &( && &=

Concen#ración (.9 &.( =.( 8.( '.( .( &(.( &=.( &8.( &'.( =(.( (*(

pp 2oluen a 2oluen a preparar %edir del es#$ndar 7l) l &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*( &((*(

2.- Se*ecci(n de Modo Cuando se enciende el instrumento el interrutor es lle+ado %acia arriba en la osici"n DON D4 es iniciado su !uncionamiento* Cuando aarece el menF de modo básico seleccionar el modo /+4 2ue corresonde al modo cuantitati+o*

+.- A,ste de Parámetros

En el mostrario de la !unci"n CKANTITATI>O o de determinaci"n de la concentraci"n. a-uste los arámetros de medici"n*

%OS'RARIO DE CA%"IO DE PARA%E'RO EN EL %ODO CUAN'I'A'I2O CKANT*

CA:BIO E 3ARA:ETRO $ @ N P

Laboratorio de Análisis Químico II &*) = *) *) 8*) 9*) '*) *)

:ETOO

6

INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA &

&λ  9=9 N: $TANAR No  &= :KE$TRA No  & RE3ETIR  & I:3RE$ION E ATO$ CKR>A E TRABAO NO LINEAL
NO NO

3ara a-ustar el rimer arámetro D %E'ODO se si,ue los si,uientes asos6 • 3ara una medida a una lon,itud de onda Fnica*resionar D SI4 EN'ER 1 EN'ER * Lue,o introducir la lon,itud de onda de medici"n* • 3ara una medida con =.  lon,itudes de onda. o ara un análisis con +alores deri+ados***resionar DSI4 EN'ER. 4 resionar la oci"n =.  o 8 4 EN'ER* El se,undo arámetro D S'ANDARD  si,ni!ica introducir el nFmero de soluciones atrones cu4os +alores de absorbancia se +an a medir* El tercer arámetro D%UES'RA No. si,ni!ica la soluci"n muestra. este será creado automáticamente* El se/to arámetro D CUR2A DE 'RA"A(O NO LINEAL . cuando este arámetro es colocado en /SI. la cur+a traba-ada es no lineal* Cuando este es colocado ara DNO . el traba-o de la cur+a es lineal * Cuando los arámetros %an sido a-ustados a las condiciones adecuados resionar en DCA%"IO DE PARA%E'ROS /NO* e acuerdo con la indicaci"n de la antalla. in,resar tantos +alores de concentraci"n como muestras standard o atrones e/ista* El sistema re,unta D CA%"IO DE CONCEN'RACION S* N * $i se cometi" un error en la introducci"n de datos. resionar D SI / resionar el No del atr"n ara la correcci"n. EN'ER entrar el dato correcto. 4 EN'ER* Cuando no %a4 error en las entradas de concentraci"n. resionar la tecla /NO Dlue,o el sistema re,unta D IN3RESO %ANUAL DE DA'OS DE A"SOR"ANCIA S* NM D6 • Al resionar la tecla D$I /uede in,resar los +alores de absorbancias desde el atr"n nFmero & %asta el Fltimo* • 3ara medir las muestras standares o atrones***resionar DNO D4 lue,o medir los atrones desde el nFmero &* Cuando la entrada manual de las absorbancias de los atrones se %a terminado. el sistema re,unta DCA:BIO DE DA'OS S*N Di,ual 2ue antes* Lue,o corre,ir las entradas e2ui+ocadas como se seHal" anteriormente. 4 resionar or Fltimo la tecla D NO D* El sistema re,unta al oerador D:O$TRARIO DE CUR2A DE 'RA"A(O S* N D. cuando se resiona DNO Dse uede iniciar una medici"n inmediatamente* $i se resiona D$I D. la cur+a de traba-o se indica en la antalla* Cuando el sistema re,unta /CA%"IO DE CONCEN'RACION EN CUR2A DE 'RA"A(O S* N / ara cambiar la escala del e-e de concentraci"n de la cur+a de traba-o. resionar D SI D7+alor de concentraci"n; EN'ER* En este caso si se resiona D NO D. se indican la cur+a de traba-o 4 su ecuaci"n* 4.- %edición de la %ues#ra Insertar una muestra 4 entonces resionar la tecla D$TAR@$TO3 D. ara iniciar su medici"n*

I ITERPRETACI# DE DATOS 3ara coiar la cur+a de traba-o obtenida en antalla en !unci"n de los +alores de absorbancia en el e-e de la ordenada !rente a las concentraciones en artes or mill"n de man,aneso en el e-e de la abcisa. resionar la tecla DCOP. D*



3ara seleccionar las soluciones atrones ara la construcci"n de la cur+a de calibraci"n es necesario calcular el error relati+o de la concentraci"n o de la absorbancia 2ue sur,e de un error !otom0trico de & 5. 4 se e!ectua a artir de la ecuaci"n si,uiente6 dA  dC  (*88 dT A C t lo, t onde6 dA  dC  error relati+o de la concentraci"n o de la absorbancia A C dT  error !otom0trico de & 5 t  transmitancia*



 CUES'IONARIO &*) Que son 4 cuales son las le4es !ot"metricasP =*) Como obtiene 4 ara 2ue se utili#a una cur+a de calibraci"n o de traba-o *) Como comrueba e/erimentalmente la le4 Beer 8*) $eHalar las ra#ones or las cuáles se dan las limitaciones de la Le4 de Beer 9*) A 2ue se denominan 4 cuales son los errores ersonales '*) Que criterios se mane-a ara seleccionar las soluciones atrones ara ser utili#adas en un m0todo esectro!ot"metrico *) Reresentar en !orma ,rá!ica el error relati+o de la concentraci"n considerando el (*9 5 de error !otom0trico si las lecturas son de &. 9. &(. =(. ( .8(. 9(. '(. (. (. (. 4 9 5 de transmitancia *) ar ra#ones or2ue en esectroscoia se utili#an soluciones diluídas *) Cuando una cur+a de calibraci"n no arte del ori,en seHalar las ra#ones 2ue determinan este tio de cur+a &(*) $eHalar los ran,os de transmitancias 4 absorbancias de los atrones 4 de la muestra coloreada donde el error relati+o es mínimo



IN9OR%E DE LA"ORA'ORIO N  DE%OS'RACIÓN DE LAS LE.ES 9O'O%Q'RICAS . ERROR RELA'I2O DE LA CONCEN'RACIÓN 9EC;A< *05*18

No 3RUPO< 6

AN&LISIS< 2eriFicación de la le? >eer o>#ención de la curBa de cali>ración ? selección de soluciones

%Q'ODO6 Espec#roFo#o#rico del Bisi>le %UES'RA6 Solución de %nO6 0,+0 N Soluciones pa#rones

SELECCIÓN DEL %ODO DE 'RA"A(O 7%ODO CUAN'I'A'I2O) No Pa#rón & =  8 9 '    &( && &=

Concen#ración (.9 &.( =.( 8.( '.( .( &(.( &=.( &8.( &'.( =(.( (*(

pp 2oluen a 2oluen a preparar %edir del es#$ndar 7l) l (*9 &((*( &*( &((*( =*( &((*( 8*( &((*( '*( &((*( *( &((*( &(*( &((*( &=*( &((*( &8*( &((*( &'*( &((*( =(*( &((*( (*( &((*(

9i!ura I, $oluciones atrones or diluci"n



O"'ENCION DE LOS 2ALORES DE A"SOR"ANCIA 7A"S)

'A"LA DE RESUL'ADOS 5 T  )Lo, t 7&((; &* 5T  )Lo, (*(' 7&((;  =*88 =* 5T  )Lo, (*(9= 7&((;  *= * 5T  )Lo, (*(9 7&((;  (*9 8* 5T  )Lo, (*& 7&((;  '*9 9* 5T  )Lo, (*8= 7&((;  88*8 '* 5T  )Lo, (*8 7&((;  8(*' * 5T  )Lo, (*8 7&((;  =*& * 5T  )Lo, (*9= 7&((;  =9*9 * 5T  )Lo, (*' 7&((;  =(*= &(*5T  )Lo, (*' 7&((;  &'*' &&* 5T  )Lo, (*= 7&((;  &(*8= &=*5T  )Lo, &*8'= 7&((;  *89

NS 3ATRON & =  8 9 '

CONCENTRACION m :n (*9 &*( =*( 8*( '*( *(

AB$OR>ANCIA (*(' (*(9= (*(9 (*& (*8= (*8

5T =*88 *= (*9 '*9 88*8 8(*'


   &( && &=


&(*( &=*( &8*( &'*( =(*( (*(

(*8 (*9= (*' (*' (*= &*8'=

=*& =9*9 =(*= &'*' &(*8= .89

CUR2A DE CALI"RACIÓN

C&LCULO DEL ERROR DE LA A"SOR"ANCIA O LA CONCEN'RACIÓN c  (*88 ∆ T c t lo,t

∆

onde6 ∆c@c  Error relati+o de la concentraci"n  ,rado de inertidumbre &5 7(*(&; ∆T t  transmitancia

3ara 95 c  (*88 7(*(&;  =(*9& c 9 lo,79;

∆

3ara (5 c  (*88 7(*(&;  &(*9 c ( lo,7(;

∆



3ara (5 c  (*88 7(*(&;  9*9 c ( lo,7(;

∆

S"'uci"nes di'uids

3ara (5 c  (*88 7(*(&;  8*(( c ( lo,7(;

∆

3ara '(5

S"'uci"nes c"ncen9!ds

c  (*88 7(*(&;  *=' c '( lo,7'(;

∆

3ara 9(5 c  (*88 7(*(&;  =* c 9( lo,79(;

∆

3ara 8(5 c  (*88 7(*(&;  =* c 8( lo,78(;

∆

3ara (5 c  (*88 7(*(&;  =* c ( lo,7(;

∆

3ara =(5 c  (*88 7(*(&;  *&( c =( lo,7=(;

∆

3ara &95 c  (*88 7(*(&;  *9& c &9 lo,7&9;

∆

3ara &(5 c  (*88 7(*(&;  8*8 c &( lo,7&(;

∆

5T 9 ( ( ( '( 9( 8( ( =( &9

Ac @ c =(*9& &(*9 9*9 8*(( *=' =* =* =* *&( *9&

3ara 95 c  (*88 7(*(&;  '*' c 9 lo,79;

∆

TABKLACIÓN E ATO$

DISCUSIÓN 

En el

S"'uci"nes mu7 di'uids

DE RESUL'ADOS rimer intento. concentraciones

las



!ueron mu4 altas. esto es ocasionado or una mala rearaci"n de la soluci"n $toc? de :nO8 (. &(((N. lue,o se modi!ic" 4 se udo reali#ar la ráctica. se obtu+o las absorbancias 4 a artir de esos datos se encontraron el 5 de transmitancias. 4 se constru4eron las cur+as de calibraci"n. 4 a tra+0s de los datos de error relati+o de la absorbancia o concentraci"n se udieron determinar las concentraciones límites de atrones*

APELLIDOS . NO%"RES<

9IR%A DEL ALU%NO< 

Espectrofotometría Del Visible - Informe

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