INTRODUCCIÓN Los espectrofotómetros espectrofotómetros son aquellos instrumentos en los que se mide fundamentalmente fundamentalmente la distribución espectral de energía radiante en las regiones espectrales: UV, VIS e IR (cercano hasta el medio !stos instrumentos utili"an un comple#o sistema óptico de selección de longitud de onda (monocromador$ %ueden seleccionar longitud de onda en forma continua & en algunos casos con precisión de d'cimas de nm$ %or lo tanto, es posible obtener en forma continua el espectro de absorción de una mol'cula$ eben ser capaces de medir la absorbancia entre )** & +** nm , lo que nos permite: 1. ar información sobre la naturale"a de la muestra$ %or e#emplo, sustancias etra-as$ 2. Indicar indirectamente indirectamente la cantidad de la sustancia que nos interesa que est. presente en la muestra$ %or e#emplo, crocinas$
COMPONENTES BÁSICOS / continuación, se enlistan los componentes b.sicos de un espectrofotómetro$ espectrofotómetro$ Los cuales son: 0$ La fuente de lu" que emite la radiación que posteriormente interact1a interact1a con la muestra$ )$ Un sistema monocoma!o que permita separar bandas de lu" estrechas, &a sea antes o despu's de la interacción de la lu" con la muestra$ !l monocromador monocromador est. constituido por lentes, espe#os, redes de difracción, prismas de refracción, rendi#as etc$ 2$ Un compa compartime rtimento nto para para coloca colocarr la muestr muestra a en ce"!as o cu#etas adecuadas, dependiendo de la región del espectro utili"ada$ !l compartimento estar. colocado de manera que el ha" de lu" de la fuente atra3iese la muestra perpendicularmente$ perpendicularmente$ 4$ Un sistema sistema para la detecc detección ión de la radiación radiación que ha atra3esa atra3esado do la muestra muestra o sistema !etecto. 5$ Sistem Sistemas as elect electró rónic nicos os de de am$"i%caci&n, tansfomaci&n ' com$aaci&n !e se(a"$ 6$ Sistemas Sistemas de regist registro ro de se-al se-al o almacenam almacenamient iento o de datos$ datos$ 7odos 7odos estos componentes componentes se pueden ensamblar ensamblar de di3ersas maneras maneras dependiendo de 3arios factores$ 8o obstante, las dos con9guraciones m.s empleadas son las de espectrofotómetros de ha" sencillo o espectrofotómetros espectrofotómetros de doble ha"$
Imagen 1. Diagrama de los componentes básicos de un
C)*SI+IC*CIÓN Es$ectofot&meto !e a- senci""o Los espectrofotómetros de simple ha" son aquellos en los cuales el ha" de lu" sigue una 1nica tra&ectoria entre la fuente & el detector$ La banda de lu" atra3iesa la muestra que se halla contenida en una celda, la lu" transmitida por la muestra pasa al detector origin.ndose una corriente el'ctrica que por medio de diferentes circuitos permite obser3ar una se-al, &a sea el mo3imiento de una agu#a, se-al digital o un registro gr.9co$ Son utili"ados si los resultados no requieren de mu& alta precisión$ La calibración se la reali"a así: 0$ Se a#usta el medidor a cero (* 7 o 0** /, cuando no llega radiación al detector (obturador cerrado$ )$ ;on el blanco en posición de medida, se abre el obturador & se a#usta la intensidad de la fuente hasta que la lectura sea del 0** 7 o * /$ 2$ Se coloca la muestra en posición de medida & se lee la correspondiente 7 o/ ebido a que, con la 3ariación de la longitud de onda, 3aría tambi'n la respuesta del detector & la potencia de salida de la fuente, los par.metros de a#uste iniciales deben rea#ustarse periódicamente si se utili"a el instrumento por m.s de 2* min$ Los espectrofotómetros de ha" simple 3arían mucho en comple#idad & especi9caciones de funcionamiento$ !l m.s sencillo & barato consta de una bombilla de
Imagen 2. Diagrama del espectrofotómetro de haz simple Thermo Scientic’s Spectronic 2D!.
enta/as 0$ Son adecuados para las mediciones cuantitati3as de absorción a una sola longitud de onda$ )$ !quipo sencillo & económico$ 2$ =acilidad de mantenimiento$
Des0enta/as 0$ 8o son pr.cticos para el registro de espectros debido al a#uste manual de la longitud de onda & tener que 3ol3er a calibrar el espectrofotómetro es incómodo & requiere mucho tiempo$ )$ 8ecesita una fuente estabili"adora de 3olta#e para e3itar errores que resultarían de 3ariaciones en la intensidad del ha" entre la medida del blanco & la de la muestra$
Es$ectofot&meto !e !o#"e a!n los espectrofotómetros de doble ha" la lu" pro3eniente de la fuente es di3idida en dos haces despu's de salir del monocromador mediante un sistema de espe#os di3isores$ !sta di3isión produce dos haces de lu", uno de ellos se dirige a la celda de referencia, que contiene el blanco, & el otro ha" se dirige hacia la celda de muestra$ Los dos haces de lu" despu's de atra3esar la celda de referencia & la de muestra llegan a detectores separados para obtener la se-al correspondiente$ Son m.s comple#os$ Reali"an la medida a cualquier longitud de onda$ La calibración se la reali"a así: 0$ ;on el blanco en ambas celdas, se a#usta el medidor a (* o 0** 7$
)$ ;on el blanco en la celda por la que pasa el ha" de referencia & sin que llegue ninguna radiación al detector (obturador cerrado u ob#eto opaco, se lle3a el medidor hasta su 3alor m.imo (0** / o * 7$
Imagen ". Diagrama de un espectrofotómetro de doble haz.
enta/as 0$ Son m.s 3ers.tiles que los instrumentos de un solo ha", siendo 1til tanto para los an.lisis cuantitati3os & cualitati3os$ )$ ;ualquier 3ariación en la intensidad de la fuente, la e9ciencia de la red, la re>ecti3idad de los espe#os, la fotosensibilidad del detector, etc$, afecta simult.neamente a los dos haces$ !n consecuencia, la relación de energía de los dos haces permanece siempre constante$ 2$ !l dise-o se adapta bien a un registro continuo de los espectros de transmitancia o de absorbancia$
Des0enta/as 0$ Los equipos son m.s costosos que los de ha" sencillo$
CÓMO *PROEC*R DE ESTOS E3UIPOS4 0$ ?uena ubicación$ Sobre una base 9rme & sin 3ibraciones, en un ambiente libre de pol3o & agentes corrosi3os, sin recibir la lu" directa de sol & manteniendo una temperatura entre 05@25A;$ )$ %reparación de la muestra$ Sin partículas en suspensión & 9ltradas$ 2$ Bane#o adecuado de las celdas$ /segurarse de que no queden burbu#as, protegerlas de ara-a"os & tomarlas por las super9cies esmeriladas$
Refeencias •
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SCoog, Dest, Eoller, ;rouch$ FUGBI;/ /8/LG7I;/$ +ma edición$ Bc Hra< Eill$ B'ico$ )**2$ %aginas: 6*+@ 6*$ Recuperado 0,*J, )*06, de https:KK<<<$clubensa&os$comK7emas@VariadosKI8S7RUB!87S@!@E/M@ S!8;ILL@N@!@?L!@E/MK5656$html Recuperado 0, *J, 06, de http:KKrepositorio$inno3acionumh$esK%ro&ectosK%O));ursoBaterialesKBigu elO/ngelOSogorbKDimbaK!spectroscopiaO*4$htm Recuperado 0, *J, 06 de http:KKchem$libretets$orgK7etbooCOBapsK/nal&ticalO;hemistr&O7etbooC OBapsKBap 2/O/nal&ticalO;hemistr&O)$*O(Ear3e&K0*OSpectroscopicOBethodsK0*$2 2/OUV)=)=VisOandOIROSpectroscop&
