Normalmente del 90-93% del paracetamol es conjugado en el hígado, aproximadamente cerca del 5% es eliminado inalteradamente por la orina.
Se conoce el mecanismo de la acción antipirética del paracetamol actuando en el hipotálamo regulando el centro de calor del organismo.
Se desconoce el mecanismo del efecto analgésico, aunque se cree que actúa a nivel central aumentando el umbral de dolor inhibiendo las COX2
Solución de estándar de p-aminofenol
Curva estándar de p-aminofenol a 5, 10, 20,40 y 50 µg/ml
Solución de fenol
Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar
¿Se disolvió el fenol?
1
Preparación Solución de NaOH sobresaturada
Verificar que la solución tenga un pH de 14
¿La solución tiene un PH 14?
Reacción entre p-aminofenol+ fenol
+ NaOH
(Medio básico, pH 14)
*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (15 muestras)
Agitar cada tubo de ensayo durante un minuto
2
¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción?
3
*Dejar reposar durante 30 min cada reacción
Verificación del Sistema
-Anteriormente se realizó un barrido para conocer la L.O para leer en el espectrofotómetro
1
2
SI
NO
SI
NO
Proseguir al desarrollo del método analítico
Análisis Estadístico de los resultados obtenidos
Lectura de la absorbancia de cada nivel de concentración y sus repeticiones a 630nm
¿La lectura de las muestras es lineal?
4
*Espectrofotómetro Hitachi V-2400
Discusión de Resultados
Conclusiones
1: Agitación de cada tubo de ensayo durante un minuto
¿Los resultados fueron satisfactorios para la verificación del sistema?
Repetir Verificación del sistema
3
4
NO
SI
NO
SI
Resultados
Verificación del sistema
x (µg/mL)
y
5
0.5039
5
0.5253
10
0.7524
10
0.7156
20
1.124
20
1.157
40
2.16
40
2.1821
50
2.58
50
2.5756
r
0.99902865
r2
0.99805825
Metodología: Diagrama de Flujo
Buscar un donante de saliva
Obtener 9ml de saliva del donante.
Hidrolisis acida a cada ml de la muestra.
Curva estándar de p-aminofenol a 3,4 y 5 µg/ml
¿Se disolvió el fenol?
1
2
Centrifugar cada mililitro de saliva y separar el sobrenadante transvasándolo a un nuevo tubo de ensayo
Solución de fenol
Verificar que la solución de NaOH tenga un pH 14
Preparación de la solución de NaOH
*Utilizar 9 tubos de ensayo, para hacer la reacción por triplicado
*Debe haber leído y firmado su consentimiento informado.
*Administración de paracetamol durante 2 días 500mg cada 8 horas.
*Primero 5min a 3000 rpm.
*Posterior 3 min a 2000rpm
Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar
Desarrollo del método analítico
1
SI
NO
Hipótesis:
Adecuar un método analítico para la cuantificación de paracetamol en una muestra de saliva por medio de una técnica Espectrofotométrica.
Objetivo:
Si el método analítico que se adecue, logra su objetivo de cuantificar el paracetamol en un rango de concentración de 3-5 mcg/ml, y además cumple con los parámetros de linealidad y especificidad entonces se obtendrá un método analítico, que posteriormente podrá ser validado.
Dosis terapéutica
500mg VO de acetaminofén cada 6hrs en situación de normalidad- concentración plasmática máxima 2.1mcg/ml.
650mg VO de acetaminofén liberación prolongada en situación de normalidad- concentración plasmática máxima 1.8mcg/ml.
Vida media de 2-3hrs.
Se ha observado que la dosis toxica de acetaminofén se encuentra entre 150-200 mg/kg, dependiendo de la funcionalidad y variabilidad del la ruta C-P-450.
La dosis letal se encuentra entre 13-25g.
Se debe tener especial cuidado en pacientes que padezcan enfermedades o insuficiencia hepática y renal.
El paracetamol produce signos de hepatotoxicidad tardíos, siendo rara su manifestación antes de las 12-18 h, de ahí que se tenga especial trascendencia en el control analítico y cuantificación en supuestas intoxicaciones.
Así, la ictericia se manifiesta a las 48-72 h y la necrosis masiva se hace aparente al 4º día, precedida usualmente de un cuadro de insuficiencia hepática.
Por este motivo es fundamental conocer cuáles son las dosis tóxicas.
JUSTIFICACIÒN
Otras formas de sobredosificación son:
Cálculo erróneo de la dosis.
Uso de fórmulas de adultos para niños.
Errores en el reconocimiento de las distintas formas de presentación del medicamento.
Adulteración del producto.
La intoxicación suele ocurrir dentro de distintos contextos, siendo el más frecuente la ingestión intencionada aguda en grandes dosis con fines suicidas, el padecimiento mas frecuente desarrollado por este abuso es el síndrome de Sthevens-Jhonson.
También se ha descrito la ingestión accidental, y la congestión no intencionada de grandes dosis con fármacos opiáceos como el propoxifeno o la codeína.
¿CUAL ES SU IMPORTANCIA CLÌNICA?
Se absorbe con rapidez por el conducto gastrointestinal. Las concentraciones máximas en el plasma comúnmente se alcanzan a los 30 a 60 minutos después de su administración.
Se metaboliza a través de la vía del citocromo P-450 para convertirse en sulfato de acetaminofeno y glucurónido de acetamonofeno , que son farmacológicamente inactivos. Los metabolitos farmacológicamente activos son: NAPBQ N-acetil-para-benzoquinoneimina y p-aminofenol en una menor proporción de tiempo.
Proceder a leer la absorbancia de las 9 muestras a 630 nm
Discusión de resultados
Realizar el análisis estadístico por adición de un estándar.
¿La lectura de las muestras es lineal?
1: Preparación de la solución de NaOH sobresaturada
Conclusiones
¿La solución tiene un PH 14?
Reacción entre muestra de saliva+ std. p-aminofenol+ fenol
+ NaOH
(Medio básico, pH 14)
Agitar cada tubo de ensayo durante un minuto
4
¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción?
3
*Dejar reposar durante 30 min cada reacción
*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (9 muestras)
2
3
Espectrofotómetro Hitachi V-2400
NO
SI
SI
NO
ACETAMINOFEN
Fue introducido por primera vez por Josef Von Mering en 1893
y a sido utilizado como un analgésico/antipirético .
Es una amida aromática asilada que recibe el nombre de
N- acetil – p – aminofenol ò 4- acetaminofenol.
Desarrollo del método cuantificación de paracetamol en saliva.
x (µg/mL)
y
vv2.01
0.1015
2.01
0.076
2.68
0.1081
2.68
0.1018
3.35
0.1708
3.35
0.1803
r
0.91952102
r2
0.84551891
[STD] µg/mL
A
[muestra] µg/mL
2.01
0.1015
0.1041
2.01
0.076
0.1415
2.68
0.1081
0.1299
2.68
0.1018
0.1384
3.35
0.1708
0.101
3.35
0.1805
0.0955
media
0.1184
S
0.020481797
CV
17.29881486
Formula para el calculo de concentración por adición de un estándar:
= +
V= volumen de la muestra
Cx= Concentración de la sustancia a determinar
v= Volumen de estándar añadido
Ce= Concentración del std. Añadido.
Ax=Absorbancia de la muestra problema.
Análisis de Resultados
De acuerdo a los resultados obtenidos en la verificación del sistema (linealidad y especificad) se puede asegurar que el funcionamiento de los equipos e instrumentos así como la calidad de los reactivos no afectaron en la experimentación.
Por tanto los resultados posteriores son consecuencia de el donador y experimentador.
Observaciones:
Se peso una mayor cantidad de estándar para realizar la curva por adición de un estándar.
Se realizo una hidrolisis acida por 30 min.
Se centrifugo cada muestras
Las muestras obtenidas no se leyeron inmediatamente después de su preparación (reacción), por lo que se resguardaron en refrigeración por dos días.
La solución estándar de igual forma se mantuvo en congelación por dos días, por lo que para realizar la curva estándar de p-aminofenol, la solución pudo haberse concentrado.
Se agrego una doble cantidad de NaOH para contrarrestar el pH acido de la hidrolisis.
Durante la experimentación, se realizaron algunas pesadas inexactas, contrario a la verificación del sistema que no represento ningún problema, durante el desarrollo del método una balanza utilizada fallo no pudiendo contabilizar el peso real del estándar.
De acuerdo a la teoría se debía realizar una hidrolisis acida durante 30 min para llevar el acetaminofén a p-aminofenol sin embargo por los resultados obtenidos, pudo haber sido necesario un mayor tiempo en la hidrolisis acida para que todo el acetaminofén en saliva pasara a su metabolito requerido.
Se realizo la curva estándar correspondiente para conocer la concentración verdadera del estándar de p-aminofenol, calculo requerido para la utilización del método de adición de un estándar, pero ya que la concentración se mantuvo en refrigeración por dos días pudo haber dado lugar a que se concentrara aumentando la concentración real del estándar lo que pudo haber restado en cuestión de cálculos concentración a la muestra obtenida en saliva.
De acuerdo a la dosis terapéutica utilizada para 500mg que requiere de una administración cada 6hrs para obtener una concentración plasmática de 2.1mcg/ml, también afecto debido a que el donador se administro 500mg cada 8 horas lo que reduce su concentración plasmática, que de acuerdo a lo obtenido su concentración plasmática oscila entre .09 mcg/ml-.1415mg/ml. El metabolismo del donador y el funcionamiento de la ruta del C-P-450 influye también en la cuantificación.
Sin embargo se puede asegurar que este método es adecuado para la cuantificación de paracetamol en saliva ya que se obtuvieron concentraciones en pequeñas proporciones; no así la linealidad del método ya que un CV= 17 nos habla de una amplia dispersión de los datos en comparación con la media.
CONCLUSIONES
El método desarrollado muestra especificidad para la cuantificación de paracetamol en muestras de saliva con lo que se cumple con la adecuación del método de muestras de saliva a muestras de orina, sin embargo en el tratamiento de las muestras no se observa linealidad.
Este método es candidato a Validación.
4
Los resultados fueron satisfactorios para el Desarrollo del método Analítico
Repetir el Desarrollo del Método Analítico
Validación del método analítico
Adecuación de un método analítico para la cuantificación de paracetamol en saliva
Presenta:
Sánchez Reyes Norberto
Universidad Nacional Autónoma de México
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
LABORATORIO
DESARROLLO ANALÍTICO
ÀREA TERMINAL FARMACIA
CLINICA
Bibliografía.
-Las bases farmacológicas de la terapéutica, Lois S. Goodman, 8° edición, MC Graw Hill Interamericana 1996.
-Farmacología Humana, Jesús Flórez, Elsevier España 2003.
https://prezi.com/rp8nfsq1pnin/validacion-de-un-metodo-analitico-para-la-cuantificacion-de/#
http://www.ugr.es/~fgil/proyecto/paracetamol/procedimiento7a.html
http://facultadfarmacia.uv.cl/index.php/60-crean-metodo-para-detectar-intoxicacion-por-paracetamol
El Acetaminofén es uno de los medicamentos más importantes que se usan en el tratamiento del dolor leve a moderado cuando no se requiere un efecto antiinflamatorio.
15/04/2016
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Verificacción del sistema
Concentración
Absorbancia
