UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUÍMICA II
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ICA – PERÚ
PRÓLOGO
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS
FACULTAD FARMACIA Y Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica son cada vez más más estrechas estrechas y se complement complementan an de una forma más evident evidente e cada día, como se pone de maniesto en esta “Guía “Guía ráctica ráctica de Bioquímica!" En este conte#to conte#to de continuos avances en la bioquímica y por la la pato$enia de las enfermedades% que e#iste una amplia evidencia de la importancia que puede &u$ar la in'amaci(n en el inicio y pro$resi(n de la enfermedad, así como los datos de “recientes! publicaciones que su$ieren que ciertas infecciones bacterianas o víricas podrían dar lu$ar al mencionado proceso in'amatorio" )e aquí la importancia de las determinaciones analíticas, que el laboratorio nos puede proporcionar en la detecci(n precoz y el estudio y conocimiento de la misma" *odo esto ha conducido a una nueva terminolo$ía para los avances de las fases a$uadas de las enfermedades hoy en día" Esta es la novedad que aporta esta “$uía de práctica!, avalada por los traba&os químicos y bioquímicos más recientes de la literatura m+dica" e prosi$ue a un protocolo analítico simple y a unas determinaciones bioquímicas s+ricas rápidas y precisas" Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un laboratorio de bioquímica en continua evoluci(n y que incorpora en todo momento los -ltimos avances en determinaciones analíticas" Estos hechos benecian a nuestros alumnos siendo este nuestro ob&etivo desde siempre"
OBJETIVO DE LA GUÍA PRÁCTICA OBJETIVO OBJETIVO GENERAL
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FACULTAD FARMACIA Y Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica son cada vez más más estrechas estrechas y se complement complementan an de una forma más evident evidente e cada día, como se pone de maniesto en esta “Guía “Guía ráctica ráctica de Bioquímica!" En este conte#to conte#to de continuos avances en la bioquímica y por la la pato$enia de las enfermedades% que e#iste una amplia evidencia de la importancia que puede &u$ar la in'amaci(n en el inicio y pro$resi(n de la enfermedad, así como los datos de “recientes! publicaciones que su$ieren que ciertas infecciones bacterianas o víricas podrían dar lu$ar al mencionado proceso in'amatorio" )e aquí la importancia de las determinaciones analíticas, que el laboratorio nos puede proporcionar en la detecci(n precoz y el estudio y conocimiento de la misma" *odo esto ha conducido a una nueva terminolo$ía para los avances de las fases a$uadas de las enfermedades hoy en día" Esta es la novedad que aporta esta “$uía de práctica!, avalada por los traba&os químicos y bioquímicos más recientes de la literatura m+dica" e prosi$ue a un protocolo analítico simple y a unas determinaciones bioquímicas s+ricas rápidas y precisas" Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un laboratorio de bioquímica en continua evoluci(n y que incorpora en todo momento los -ltimos avances en determinaciones analíticas" Estos hechos benecian a nuestros alumnos siendo este nuestro ob&etivo desde siempre"
OBJETIVO DE LA GUÍA PRÁCTICA OBJETIVO OBJETIVO GENERAL
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.l nal de semestr semestre e del curso curso práctico práctico el estudi estudiant ante e será capaz de e#plicar c(mo funcionan los principales procesos metab(licos y los mecanismos moleculares que le subyacen a la funci(n siol($ica de c+lulas, te&idos, y (r$anos del cuerpo humano, ba&o distintas condiciones siol($icas" OBJETIVO OBJETIVO ESPECIFICOS - /ue el estudiante entienda los fen(menos siol($ico desde el punto de vista vista bioquí bioquímic mico o y que sea sea capaz capaz de inte inte$rar $rar este este cono conocim cimie iento nto en la estructura siol($ica de la la c+lula, del te&ido y del or$anismo" - /ue el estudiante conozca los mecanismos bioquímico del funcionamiento del or$ani or$anismo smo humano humano de una manera manera dinámica dinámica e inte$ral inte$ral y, al mismo mismo tiempo, comprenda comprenda c(mo esos mecanismos se se encuentran alterados alterados en la enfermedad" - /ue el estudiante aplique el m+todo cientíco como una herramienta en la identicaci(n, el análisis y la soluci(n de problemas m+dicos" - /ue el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido inte$rar el conocimien conocimiento to a nivel bioquímic bioquímico o como una herramie herramienta nta fundamental fundamental para la comprensi(n comprensi(n de los procesos siol($icos siol($icos y de la siopatolo$ía y con ello entienda los los principios en los que se apoya la tecnolo$ía empleada en el dia$n(stico de enfermedades"
NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO Las prácticas de Bioquímica son una parte esencial en la formaci(n de un alumno en esta materia" ara el buen aprovechamiento de las mismas es necesario leer con atenci(n estas notas y en particular, cada práctica antes de entrar en el laboratorio" 0" 1ealizar 1ealizar las prácticas prácticas de Laboratorio con el debido debido inter+s inter+s y responsabilidad" 2" Lea cuidadosam cuidadosamente ente la Guía de ráctica ráctica y ten$a en cuenta cuenta las indicaciones indicaciones de los rofesores sobre el uso del material y equipo de Laboratorio, así como el orden, limpieza y se$uridad que debe mantenerse" 3" El o la es estu tudi dian ante te debe deberá rá ac acud udir ir a toda todass las las ráct ráctic icas as de Labor aborat ator orio io provisto de mandil blanco con su s u respectivo lo$o de la facultad" 4" or ca cada da rácti ráctica ca de La Labor borat ator orio io,, ca cada da me mesa sa de *raba& raba&o o pres presen enta tará rá un -nico -nico infor informe, me, el cual cual consta consta de las si$uient si$uientes es partes partes55 INTRODUCCIÓN,
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OBJETIVOS, RESULTADOS, DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS, CONCLUSIONES, CUESTIONARIO Y BIBLIOGRAFÍA" )ebi+ndose presentar a la semana si$uiente en el horario y $rupo respectivo que le corresponda% 6 ciertos informes de práctica puede ser entre$ados en el mismo día de la práctica realizada" La presentaci(n del informe será 789 LE*1. 7L.1. : LEG;BLE )E.118LL.)8 . <.98" =" El inicio de la práctica es en la hora e#acta pro$ramada" e tendrá una tolerancia de = minutos, lue$o de ese lapso de tiempo no se tendrá derecho a 9ota de prácticas" >" Las inasistencias a las rácticas de Laboratorio 98 89 1E7?E1.BLE E9 9;9G?98 )E L8 G1?8, por lo tanto dichas faltas deberán de ser &usticadas con un má#imo de una @A0 semana" C" 7ada .lumno será inte$rante de una
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FACULTAD FARMACIA Y PRACTICA N° BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO BIOQUÍMICO La biose$uridad es un con&unto de medidas probadamente ecaces para evitar la adquisici(n accidental de infecciones con pat($enos contenidos en las muestras, así como los ries$os relacionados con la e#posici(n a a$entes químicos, físicos o mecánicos a los que está e#puesto el personal en los laboratorios" 1ecuerden que la biose$uridad es un con&unto de medidas preventivas reconocidas internacionalmente orientadas a prote$er la salud y la se$uridad del personal y su entorno" 7omplementariamente se incluye normas contra ries$os producidos por a$entes físicos, químicos y mecánicos"
OBJETIVO! Establecer la normativa para prote$er la salud de las personas que puedan estar e#puestas a ries$os relacionados con la e#posici(n a a$entes biol($icos, químicos, físicos, en los laboratorios de ensayo clínicos"
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1;97;;8 )E B;8EG?1;).) 0" ?9;HE1.L;).)" Las medidas de biose$uridad deben involucrar a todas las dependencias de la instituci(n" *odo el personal, pacientes @si los hubiera y visitantes deben cumplir de rutina con las normas establecidas para prevenir accidentes" 2" ?8 )E B.11E1." Establece el concepto de evitar la e#posici(n directa a todo tipo de muestras potencialmente contaminantes, mediante la utilizaci(n de materiales o barreras adecuadas que se interpon$an al contacto con las mismas, minimizando los accidentes" 3"
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FACULTAD FARMACIA Y b AGENTES QUÍMICOS5 E#posici(n a productos corrosivos, t(#icos, irritantes o cancerí$enos por inhalaci(n, contacto con la piel o mucosas, por heridas o in$esti(n" E#posici(n a a$entes in'amables o e#plosivos" c AGENTES BIOLÓGICOS! El ries$o dependerá de la naturaleza del a$ente, su pato$enicidad, virulencia, modo de transmisi(n y la vía de entrada natural al or$anismo y otras rutas @inhalaci(n de aerosoles, inyecci(n por pinchazos con a$entes punzantes, contacto, concentraci(n en el in(culo, dosis infecciosa, estabilidad en el ambiente y la e#istencia de una prola#is eciente o la posibilidad de una intervenci(n terap+utica" Las prácticas que se realizan en los laboratorios presentan ries$os propios de cada actividad" BARRERAS DE BIOSEGURIDAD5 0" E/?;8 )E EG?1;).) @B.11E1. 1;<.1;.5 El concepto de barrera primaria incluye elementos de protecci(n personal, tales como5 $uantes, delantales, cobertores de zapatos, botas, respiradores, máscaras faciales, anteo&os de se$uridad, propipetas y cabinas de se$uridad biol($ica" - e traba&ará con $uantes en caso de que las tareas así lo requieran o de que e#istan lastimaduras o al$una erupci(n% es fundamental saber utilizarlos, esto implica que el usuario deberá abstenerse de tocar otros elementos de uso com-n con la mano en$uantada @por e&emplo5 tel+fono, mani&as de ca&ones o puertas, etc"" - e recomendará el uso de $uantes, mandiles o uniformes de laboratorio a n de evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar" - La protecci(n ocular se llevará a cabo si e#iste el ries$o de que durante los procedimientos se produzcan salpicaduras con microor$anismos u otros materiales peli$rosos" - Los equipos de protecci(n personal se utilizarán en forma individual, se$-n la necesidad, o en combinaci(n con las cabinas de se$uridad biol($ica y otros dispositivos que conten$an los a$entes, animales o materiales que se manipulan" - En cada lu$ar de traba&o, se deberá conocer la ubicaci(n de los elementos de se$uridad, tales como e#tintores, seFales de salidas, mantas i$nífu$as, lavao&os, Kits para contener derrames, alarmas, duchas, etc" - Ba&o nin$una circunstancia se podrá correr en los laboratorios" - Es fundamental que las rutas de escape o pasillos no est+n bloqueadas con bancos, sillas, equipos u otros elementos que entorpezcan la correcta circulaci(n"
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FACULTAD FARMACIA Y 2" MB;*8 E ;G;E9E E189.L5 - Las personas se lavarán las manos todas las veces que sea necesario, lue$o de manipular materiales viables, lue$o de quitarse los $uantes y antes de retirarse del laboratorio" - 9o estará permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en áreas de traba&o" - Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios deberán tambi+n utilizar antiparras o un protector facial" - e evitará el uso de accesorios col$antes @aros, pulseras, collares y, aquellas personas que así lo requieran deberán traba&ar con el cabello reco$ido" - Los alimentos se almacenarán fuera del área de traba&o en $abinetes o refri$eradores desi$nados y utilizados con este -nico n" - *ampoco se debe hervir a$ua a los nes de preparar mate, caf+ o te" 1E78
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9o se colocará nin$-n material en la boca ni se pasará la len$ua por las etiquetas"
- *odos los derrames, accidentes y e#posiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio" - e elaborará y se$uirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames" - Los líquidos contaminados deberán descontaminarse @por medios químicos o físicos antes de eliminarlos por el colector de saneamiento" - La ropa de traba&o debe estar abrochada en todo momento, evitando vestir man$as anchas o col$antes, y tener los cabellos reco$idos" - Los desperdicios, manchas y residuos de sustancias peli$rosas se eliminarán con rapidez" - El buen estado de los productos y materiales así como su etiquetado debe comprobarse antes de su utilizaci(n" - *odos los preparados deben estar etiquetados adecuadamente, estando prohibida la reutilizaci(n de los envases vacíos sin la retirada de la etiqueta ori$inal" - El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el traba&o" - Las supercies de traba&o se descontaminarán despu+s de todo derrame de material potencialmente peli$roso y al nal de cada &ornada de traba&o" - Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con re&illas que impidan el paso de artr(podos"
MANIPULACIÓN DE SUSTANCIAS QUÍMICAS5 roductos químicos como factores de ries$o" Las sustancias químicas peli$rosas, son aquellos elementos químicos y sus compuestos, tal y como se presentan en su estado natural o como se producen por la industria, que pueden daFar directa o indirectamente a personas, bienes yJo medio ambiente" Estas sustancias químicas, en funci(n de su peli$rosidad, se clasican como5 a E#plosivas" ustancias y preparados que pueden e#plosionar por el efecto de una llama o del calor, o que sean muy sensibles a los choques y a los roces" b 7omburentes" ustancias y preparados, que en contacto con otros, particularmente con los in'amables, ori$inan una reacci(n fuertemente e#ot+rmica"
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c ;n'amables" ustancias y preparados cuyo punto de i$nici(n es ba&o" En funci(n de su mayor o menor in'amabilidad se distin$uen tres $rupos5 a" E#tremadamente ;n'amables b" Oácilmente ;n'amables c" ;n'amables
d *(#icas" ustancias y preparados que por inhalaci(n, in$esti(n o penetraci(n cutánea pueden alterar la salud de un individuo" El $rado de to#icidad se establece en tres cate$orías5 a"
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;9O81
7?E*;89.1;85 0" En forma de cuadernillo5 )ibu&e y describa cada uno de los si$nos químicos @picto$ramas que se utilizan para clasicar el peli$ro de las sustancias químicas" )e cada si$no químico mencione 3 e&emplos" 2" 1ealizar un esquema indicado el proceso que debemos se$uir en una emer$encia en el laboratorio como son5 a" salpicadura de sustancias b" inhalaci(n de $ases" c" eridas punzantes, cortes y abrasiones d" )errames sobre la mesada de traba&o" B;BL;8G1.ON.5
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PRACTICA N° " DIGESTIÓN DE CARBO#;)1.*OS El carbohidrato más importante en la alimentaci(n es la $lucosa, la cual in$erimos ba&o la forma de disacáridos @maltosa, sacarosa y lactosa o de almid(n, polisacáridos formados por muchas mol+culas de $lucosa" El almid(n es el constituyente esencial de cereales, le$uminoso, tub+rculos y raíces" La di$esti(n de los carbohidratos se produce $racias a las enzimas di$estivas producidas por la $lándula salivares, el páncreas y la pared intestinal" Estas enzimas son5 o La alfa amilasa salivar o La alfa amilasa pancreática o La amilo 0,> $lucosidasa de la pared intestinal Las alfa amilasas son enzimas que act-an a p neutro y en presencia de iones cloro" 1ompen los enlaces amilo 0,4 dando como resultado oli$osacáridos y $lucosa" Los carbohidratos se comienzan a di$erir en la boca por acci(n de la Q amilasa de la saliva líquido or$ánico se$re$ado de modo re'e&o ante la presencia de la comida" La Qamilasa tambi+n llamada ptialina, cataliza la hidr(lisis de las unidades $lucosa a nivel del enlace $lucosidico Q0,4" E#isten dos formas de evaluar la actividad enzimática e la amilasa5 or desaparici(n de sustrato5 forma como desaparece el almid(n el o que se aprecia por la reacci(n del lu$ol"
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FACULTAD FARMACIA Y or formaci(n de producto5 forma como desaparece carbohidratos reductores @$lucosa en el medio, los que se aprecian por reducci(n del cobre"
OBJETIVO - 7omprender la importancia de la acci(n de la Qamilasa" - 1ealizar e#perimentalmente la di$esti(n enzimática del almid(n por acci(n de la Qamilasa" - Evaluar de forma e#perimental el efecto del cloruro de sodio y del p sobre la actividad enzimática de la amilasa" - ;denticar cualitativamente la presencia del sustrato de la reacci(n enzimática" - ;denticar cualitativamente los productos de la reacci(n enzimática" - Oundamentar las resultados obtenidos" T$CNICA E%PERIMENTAL5 )i$esti(n del almid(n por la amilasa salivar C&'())*+ ( '. /.'*0.! El donante de saliva no debe haber in$erido alimento durante un mínimo de 2 horas, antes de la colecci(n se procederá a un en&ua$ue simple de la cavidad oral con a$ua% lue$o, manteniendo la boca cerrada esperara entre = a C minutos" Evitando hablar y pasar la saliva" La colecci(n se realizara en un recipiente de boca ancha de&ando caer por $ravedad la saliva, evitando la formaci(n de espuma" TECNICA E%PERIEMENTAL! reparar un batería de tubos como si$ue5 REACTIVOS TUBOS
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ml .lmid(n al 0R 0 ml BuSer Oosfato p >,> =,2 ml 7loruro de sodio 0,>R A"D ml bicloruro de mercurio A"D 0R ml oluci(n Enzimática ervida ml oluci(n Enzimática A"2 Oresca
= A"= A"=
0 > A"D
0 > A"D
2 0 >,D
A"2
A"2
A"2
2A minutos, al t+rmino de los2A TUBOS " 1 = = A"= A"= A"= A"=
2 = A"= A"=
ml 7l ml soluci(n iodada ml soluci(n de tubos anteriore
EQUIPOS - BaFo de a$ua o baFo maría - 7ocina El+ctrica - Balanza .nalítica
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MATERIALES - robetas de 0AAm robetas de =A ml ipetas de 2 ml ipetas de 0 ml ipetas de = ml Oiola 0AA ml Haso de precipitado - Gradilla para tubos de ensayo - *ubos de ensayo - ropipetas
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- 7elda para espectrofot(metro - Hasos descartables -
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REACTIVO - .lmid(n BuSer fosfato p >,> 7l uero siol($ico .$ua destilada arana
INFORME N°" DIGESTIÓN DE CARBO#IDRATOS INTRODUCCIÓN!
OBJETIVO!
CUESTIONARIO!
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INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS!
CONCLUSIÓN!
BIBLIOGRAFÍA!
PRACTICA N° 1 GLICEMIA ENZIMÁTICA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN MUESTRA BIOLOGICA La $lucosa es la principal fuente de ener$ía en los seres vivos" or tal raz(n es un metabolito fundamental en los procesos biol($icos" La determinaci(n cuantitativa de este compuesto, ha sido ob&eto de muchos estudios y la literatura ofrece diversas t+cnicas de análisis que varían de acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los contenidos de $lucosa y la viabilidad e#perimental" El <+todo enzimático para la determinaci(n de $lucosa en san$re y otros líquidos biol($icos Oundamento del m+todo5 El esquema de reacci(n es el si$uiente5 Glucosa + O2 + H 2 O GOD Acido Gluconico + H 2 O 2
2 H 2 O 2+ 4 − AF + Fenol POD Quinona Coloreada+ 4 H 2 O
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OBJETIVO - )eterminar por espectrofotometría el contenido de la $lucosa en suero yJo en plasma san$uíneo humano" - 7omprender la importancia de la $lucosa - )eterminar cuantitativamente la determinaci(n de la $lucosa EQUIPOS Espectrofot(metro 7entrifu$as
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.$u&a de 20 Li$adura .l$od(n y alcohol
T$CNICA E%PERIMENTAL! -
1E78LE77;I9 )E
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Lue$o de obtener la muestra @plasma o suero"
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En tres tubos de ensayos marcados con B @blanco, @tandard @desconocido o muestra, colocar se$-n el si$uiente esquema5
STANDARD MUESTRA
B
S 0A ul
D 0Aul
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y )
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0 ml
0ml
0ml
;ncubar minutos en baFo de a$ua a 3CP7" lue$o leer en espectrofot(metro a =A= nm o en fotocolorímetro con ltro verde @4A =3A nm llevando el aparato a cero con el blanco" 789);7;89E )E 1E.77;I95 lon$itud de onda5 =A= nm en espectrofot(metro o en fotocolorímetro o con ltro verde @4A V =3A nm" o *emperatura de reacci(n 5 3CP7 o *iempo de reacci(n5 0A minutos Holumen de muestra5 2Aul o Holumen de reactivo de traba&o5 2 ml" o o Holumen nal de reacci(n5 2,A2 ml" E*.B;L;).) )E L.
RESULTADO! - El *ubo B se emplea para la calibraci(n" - El tubo nos da la lectura del reactivo de traba&o y del factor" - El tubo ) nos da la lectura de las muestras" GLICEMIA = D x f
)(nde5 )X es la absorbancia de la muestra @desconocido fX 7oncentraci(n de estándar # 0AA .bsorbancia del estándar VALORES NORMALES - uero o plasma5 A,CA V 0,0A $JL - En los niFos p+queFos se aceptan valores de 4A a 0AA m$J L"
DIAGNOSTICO POSIBLES EN VALORES ANORMALES DE GLUCEMIA!
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uede aparecer la $lucemia aumentada @hiper$licemia en5 o )iabetes
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ueden aparecer la $lucemia disminuida @hipo$lucemia en5 o )ieta e#cesivas Enfermedades hepáticas o Enfermedades de .ddison o o E#ceso de insulina en diab+ticos o ipotiroidismo ipotituarismo o ;nsulinoma o o .lcohol y anal$+sico puede disminuirla
INFORME N°1
GLICEMIA ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN! OBJETIVO!
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RESULTADOS!
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS! CONCLUSIÓN! CUESTIONARIO! 0 Ycuáles son los valores de referencia de $lucosa en la san$re, orina, sueroZ 2 7omo interviene la $lucolisis en la muestra problema @san$re" En el suero y líquidos biol($icos" 3 /ue ob&eto tiene el dia$nostico precoz y el control de los pacientes diab+ticos" 4 Enumere las 3 cate$orías principales de diabetes mellitus @)< y cuál es la más com-n" = 1ealice las características diferenciales de la )< tipo 0 y la )< tipo 2" >
CASOS CLINICOS 0" aciente de = aFos, in$resa por $uardia central con dia$n(stico de 7etoacidosis )iab+tica @7.)" .ntecedentes atol($icos5 )iabetes tipo 0 de 3A aFos de evoluci(n" ancreatitis a$uda un mes previo a la internaci(n actual acompaFada de 7.) con necesidad de asistencia respiratoria mecánica"
2" aciente de se#o femenino de 2D aFos de edad que consulta por consultorio e#terno de diabetolo$ía"
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.rdor para orinar" )olor quemante continuo de ambos pies con imposibilidad en la deambulaci(n" .ntecedentes personales patol($icos5 )iabetes tipo 0 de 0D aFos de evoluci(n con mal control metab(lico, tratada en la actualidad con insulina 9 2A ?;Jdia [ insulina re$ular pre prandial se$-n $lucemias a raz(n de 0A?;Jdía" 7on anterioridad estuvo tratada con insulina Glar$ina por períodos cortos de tiempo, la paciente se ne$aba a usar analá$os" DESARROLLAR EN CADA CASO CLÍNICO! 0" E#plique las bases bioquímica del problema de salud, indicando los valores normales, los síntomas y si$nos del paciente" 2" 1ealizar la posible soluci(n para el problema de salud"
PRACTICA N° 2 E%TRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS #EPÁTICO EN POLLO Los hidratos de carbono son almacenados como sustancia de reserva por los seres vivos en forma de polisacáridos% el almid(n y la inulina son las formas de almacenamiento en ve$etales, mientras que el $luc($eno es la reserva $lucídica de los animales" El $luc($eno consta de unidades de $lucosa unidas por enlace $lucosídicoα@04 formando cadenas% cada D ( 0A unidades de $lucosa, la cadena presenta ramicaciones que se unen mediante enlace α@0>" El $luc($eno es especialmente abundante en el hí$ado @entre 3= $ por 0AA $ de te&ido fresco y en, en menor medida, el m-sculo" El ayuno disminuye las reservas de $luc($eno fundamentalmente hepático" OBJETIVOS5 - 1ecordar la importancia del $luc($eno - 1ecordar las fuentes de $luc($eno - Es la e#tracci(n del $luc($eno hepático - er capaz de realizar la hidrolisis ácidas enzimática MATERIAL BIOLOGICA
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?na pollo bien alimentado durante unas semanas antes EQUIPO 7entrifu$a Balanza analítica MATERIALES ipetas de = ml ipetas de 0A ml *ubos de ensayo *ubos de centrifu$a
robeta de 0AA ml Hasos de precipitaci(n de 2=A ml Luna de relo& Oiola de 0AA ml
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GUÍA DE
T$CNICA E%PERIMENTAL -
repare el ácido tricloroacetico al =R y al 0AR en la ola" )ecapitarun pollo bien alimentado con una dieta alta en carbohidratos @una semana antes" E#trai$a el hí$ado con sumo cuidado" ;nmediatamente colocar el hí$ado en una luna de relo& bien helada y pesar @previamente realizar pesada de la luna de relo& para obtener el peso del material biol($ico por diferencia 7ortar el hí$ado en trozos pequeFos y de&arlo caer en un mortero muy frio, y adicionar 0 ml de *7. al = R por cada $ramo de hí$ado" esar A,=$ de arena lavada y a$re$arlo al mortero para iniciar la trituraci(n @mantener el mortero en hielo hasta obtener una masa liquida homo$+nea" *rasvasar el preparado a los tubos de ensayo equitativamente hasta las dos cuartas partes de la capacidad" Llevar los tubos a centrifu$ar durante = minutos a 2AAA 1< )ecantar el líquido sobrenadante opalescente en la probeta de 0AAAml En&ua$ar el mortero con un volumen mayor de *7. al 0AR con el ob&etivo de conse$uir una e#tracci(n más completa del $luc($eno hepático" Herter el líquido de los lavados en los tubos y llevar a centrifu$ar durante = minutos a 2AAA 1< )ecantar el sobrenadante uniendo al primer e#tracto *7. en la probeta y anotar el volumen total" 1epetir los pasos anteriores para mayor rendimiento
.Fadir con a$itaci(n a los e#tractos *7., 2 vol-menes de etanol por cada volumen de e#tracto" .$itar la mezcla y de&ar en reposo hasta que el precipitado 'ocule" ?na vez observada la 'oculaci(n a$itar ener$+ticamente y trasvasar el contenido en el n-mero mayor posible de tubos de ensayos, para llevar a la centrifu$a por = minutos a 2AAA 1< Eliminar el sobrenadante trasparente .islar en la luna de relo& el $luc($eno de cada tubo de ensayo para su posterior secado"
RECONCIMIENTO DEL GLUCOGENO! o *ome una pequeFa cantidad del $luc($eno y disu+lvalo en 2 ml de a$ua destilada en un tubo de ensayo, a$re$ue unas $otas de reactivo de lu$ol" 8bserve el color"
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GUÍA DE
INFORME N°2 E%TRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS #EPÁTICO EN POLLO INTRODUCCIÓN! OBJETIVO! RESULTADOS! INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS! CONCLUSIÓN! CUESTIONARIO! 0" 7ompare las características del almid(n, $luc($eno, celulosa y quitina 2" /ue factores pueden in'uir sobre el porcenta&e del $luc($eno en el hí$ado 3" /u+ importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimática 4" 7uáles son las enzimas claves que participan en el metabolismo de los carbohidratos" BIBLIOGRAFÍA!
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CASO CLINICO Har(n de raza blanca de 0> aFos de edad lle$( a la sala de ur$encias del hospital en estado estuporoso" .l efectuar el e#amen físico se observ( que presentaba respiraci(n profunda y taquipnea, su aliento tenía olor a frutas y su piel y membranas mucosas estaban secas" )atos de laboratorio odio 02D mmolJL @03D04= mmolJL 7alcio 0A m$JdL @D2= m$JdL otasio >,0 mmolJL @3,0=,= mmolJL O(sforo 3,> m$JdL @3"A 4"= m$JdL 7loruro DD mmolJL @=0A= mmolJL Bicarbonato mmolJL @202C mmolJL ?rea en san$re =A m$JdL @D2= m$JdL p C,02 @C,3=C,4= p782 2D mm$ @3=4= mm$ Glucosa s+rica C=A m$JdL @CA00A m$JdL .cetona s+rica 3[ @A ematocrito =3R @424=R emo$lobina 0C,> $Jd\L @040> $JdL 1ecuento leucocitos 02AAAJmm3 @4"3AA0AAAA mm3 1ecuento eritrocitos > millones Jmm3 @4,==,2Jmm3 • • • • • • • • • • • • • • •
R(/4&(! 0" ;denticar los datos de laboratorio y los si$nos y síntomas anormales 2" 7on base a los antecedentes clínicos de la paciente, las observaciones clínicas y datos de laboratorio, el tipo de intolerancia a la $lucosa se clasicaría como% 3" Yor qu+ aumentan los cuerpos cet(nicosZ 4" Y/u+ observaciones indican p+rdida de a$uaZ =" /u+ parámetro nos indica un buen control sobre los estados de $lucemia en los -ltimos 02A días" PRACTICA N° 5 SCHOCK INSULINICO EN CONEJO EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA SANGUINEA
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FENOMENOS DEL SHOCK INSULNICO El término shock insulínico se utiliza ara !escri"ir la hio#licemia se$era %ue ro!uce ér!i!a !el conocimiento & otros trastornos' La hio#licemia se ro!uce cuan!o la #lucosa !el cuero se #asta con !emasia!a rai!ez( cuan!o ésta es li"era!a en el torrente san#uíneo con ma&or lentitu! %ue lo re%ueri!o or el cuero( o cuan!o se li"era !emasia!a insulina en el torrente san#uíneo' La insulina es una hormona ro!uci!a or el )ncreas en resuesta a ma&ores ni$eles !e #lucosa en san#re( cu&a funci*n es re!ucir estos altos ni$eles !e #lucosa' La hio#licemia es relati$amente com+n en las ersonas !ia"éticas' ,e resenta or un exceso !e insulina oral o !e me!icamento oral anti!ia"ético( cuan!o no se come lo suficiente( o or un incremento reentino !el eercicio sin comensarlo con una ma&or in#esta !e alimentos' La hio#licemia relati$a( es !ecir( cuan!o la #lucosa en la san#re !e un recién naci!o est) "aa( es "astante com+n' .n "e"é naci!o !e una ma!re !ia"ética o con !ia"etes #estacional /causa!a or el em"arazo0 ue!e resentar hio#licemia se$era' En estos casos el ni1o es llama!o 2"e"é !e ma!re !ia"ética2' ,i !urante el em"arazo el ni$el !e az+car en la san#re !e la ma!re es ersistentemente alto( el )ncreas !el feto inter$iene en el control !el exceso !e az+car ro!ucien!o insulina a!icional' Cuan!o el ni1o nace( &a no reci"e m)s #lucosa !e la ma!re( ero a+n ro!uce -ma&or canti!a! !e insulina( & este exceso hace %ue el az+car en la san#re !el "e"é !escien!a a ni$eles eli#rosos' Esto es una emer#encia mé!ica %ue !e no tratarseue!e ro$ocar con$ulsiones & !a1os al sistema ner$ioso !el "e"é'
OBJETIVOS -
Demostrar lo %ue asa cuan!o se a!ministra #lucosa al coneo %ue se
-
encuentra en esta!o !e shock' ,er caaz !e !escri"ir los muchos cam"ios %ue ocurren como resulta!o !e la a!ministraci*n !e la insulina'
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3"ser$ar los efectos !e un exceso !e insulina en los coneos
-
4ecor!ar los rocesos "io%uímicos %ue ocurren !urante !icho roceso & relacionarlo con eiso!ios !e la !ia"etes
EQUIPO -
5alanza analítica
MATERIALES BIOLÓGICO -
6 coneos en a&unas !urante 78 horas
MATERIALES 9iola !e 6:: ml
erin#a !e tu"erculina
;u"os !e ensa&o
Al#o!*n & alcohol
Materiales !e limieza
A#ita!ores !e $i!rio
erin#a !e 6: cc
Gra!illas ara tu"os !e ensa&o
REACTIVOS Glucosa anhi!ra Insulina !e acci*n r)i!a A#ua !estila!a A!renalina
TÉCNICA EXPERIMENTAL -
El coneo es un animal mu& sensi"le a la acci*n !e la insulina( cu&a resuesta a esta hormona es mu& !iferente !e la !el erro' >or esta raz*n( el coneo es el animal !e elecci*n en el ensa&o "iol*#ico oficial !e estan!arizaci*n !e las rearaciones insulínicas' Efecti$amente( la !efinici*n !e la uni!a! est)n!ar !e insulina est) "asa!a en la resuesta
-
o"ser$a!a con este animal' El coneo !e"er) estar en a&unas 78 horas antes !el exerimento' ,e in&ectan :'?ml !e insulina or $ía su"cut)nea al comenzar la sesi*n !e
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la"oratorio' @o !e"en usarse reara!os !e insulina !e a"sorci*n lenta -
/Insulina-n( Insulina-inc-ortaminas0' Lue#o !e me!ia hora se le in&ectan tam"ién or $ía su"cut)nea !e :(7ml
-
!e insulina' Mientras uste! esera los !ram)ticos efectos !e la insulina( reare una soluci*n al 6: B !e #lucosa %ue se le a!ministrar) al animal & ten#a lista tam"ién una erin#a !e 6: ml' Desués !e un tiemo $aria"le( ero se#uramente cerca !e una hora !esués !e la se#un!a in&ecci*n !e insulina( el animal entrar) en con$ulsiones' Antes !e %ue esto ocurra el animal ha"r) asa!o or una serie !e cam"ios característicos( los cuales
-
recuer!an los cam"ios %ue exerimenta un in!i$i!uo con shock insulínico' ,i al animal no se le resta atenci*n osterior( ue!e ocurrir %ue no se o"ser$e el erío!o !e con$ulsiones sino el erio!o en el cual( el coneo en esta!o comatoso ermanece tran%uilo' Al#unas $eces la muerte so"re$iene !urante este rimer ciclo !e con$ulsiones' Mu& ronto sin em"ar#o( se esta"lece otro erío!o !e con$ulsiones( !urante el cual el animal arece encontrarse al "or!e !e la muerte' El animal ue!e so"re$i$ir sin em"ar#o
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a esta nue$a crisis' .na $ez %ue el animal ha suera!o esta rimera crisis & estan!o( a+n en esta!o comatoso( se le a!ministran 6: ml !e la soluci*n al 6:B !e #lucosa
-
or $ía intraeritoneal' Como el animal ha"ía si!o so"recar#a!o !e insulina( la in&ecci*n !e la soluci*n !e #lucosa s*lo lo rote#er) en una forma temoral' En las horas si#uientes es se#uro %ue el animal caer) !e nue$o en shock m)s !e una $ez' .ste! ten!r) entonces la resonsa"ili!a! !e rote#erlo !e la muerte' Ase#+rese !e %ue ha&a alimento en la aula !el animal' Dos insecciones !e"en hacerse !el animal( la rimera a las 7 * ? horas & la se#un!a a las horas' En ca!a una !e estas $isitas( como me!i!a !e rotecci*n( se in&ectan intraeritonealmente 6: ml !e soluci*n al 6:B !e #lucosa'
SNTOMAS DE HIPOGLICEMIA
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INFORME N°5 SHOCK INSULINICO EN CONEJO INTRODUCCIÓN! OBJETIVO! RESULTADOS! INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS! CONCLUSIÓN! CUESTIONARIO! 6' Defina el conceto !e shock( shock hio #licémico
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7' Fué cam"ios o"ser$* uste! en la con!ucta !el animal a me!i!a %ue los ni$eles !e #lucosa se acerca"an al ni$el !el shock ?' A %ué ni$el esta"a la #lucosa san#uínea cuan!o el animal ca&* en shock 8' A cierto tio !e acientes /es%uizofrénicos0 se les ro$oca shock insulínico !e un mo!o similar al %ue uste! ha ro$oca!o en el coneo & arece %ue estos acientes son "eneficia!os or este tratamiento' Cree uste! %ue es el efecto so"re los m+sculos & sus correson!ientes conclusiones lo %ue "usca el si%uiatra ,er) acaso el efecto so"re el sistema ner$ioso lo cual con!uce a cam"ios en la con!ucta a+n !e un coneo H' Descri"a %ué es lo %ue asa cuan!o uste! a!ministra #lucosa al animal %ue se encuentra en esta!o !e shock' ' .ste! !e"e ser caaz !e !escri"ir los muchos cam"ios %ue ocurren en un animal como resulta!o !e la in&ecci*n !e insulina' ' >ara %ue utilizamos la a!renalina Cu)l es su mecanismo !e acci*n
BIBLIOGRAFA! PRACTICA N° "
INTERPRETACIÓN CLNICA INTEGRACIÓN DE LAS RUTAS METABÓLICAS DE LOS HIDRATOS DE CARBONOS CASO CLNICO N°# .na ni1a !e 68 a1os !e e!a! in#reso a un hosital infantil en esta!o !e coma' La ma!re refiri* %ue la ni1a se encontra"a con "uena salu! hasta !os semanas re$ias al in#reso( cuan!o !e forma reentina !esarrollo fie"re mo!era!a & una ulcera en el cuello' ,u"secuentemente( !isminu&* su aetito & resento malestar #eneral'
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resiraci*n rofun!a & susiros /resiraci*n !e KA,,MA.L0( a!em)s !e %ue su aliento tenía un olor extra1o a frutas' ,u tensi*n arterial era e :: mmN# & su ulso !e 66HminJ no lo#ro !esertar'
R$%&'()*+% *$ '),+)(+.+! A' En suero o lasma a' Glucosa ?HmmolL /?' a '6 mmolL0 "' O-Ni!roxi"utarato 6?': mmolL /P:'7H mmolL0 c' Acetato 7'Q mmolL /P :'7 mmolL0 !' 5icar"onato H mmolL /78 a 7Q mmolL0 e' @itr*#eno ureico 67 mmolL /7' a Q' mmolL0 f' >otasio H'Q mmolL /?'H a H': mmolL0 #' Creatinina 6: ummolL /R a 6?7 ummolL0 5' En orina a' Glucosa SSSS "' Cueros cetonicos SSSS SEGÚN EL CASO CLNICO/ DESARROLLE!
#0 S.12+% 3 %42(+)% 60 D.)12+%(.7+ 80 B)%$ ,.+9&4.7) :0 D.%7&%.;2 50 S+'&7.;2
CASO CLNICO N°6 La aciente era una ni1a !e 67 a1os %ue resenta"a una !istensi*n a"!ominal mu& imortante' ;enía antece!entes !e eiso!ios frecuentes !e !e"ili!a!( su!oraci*n & ali!ez %ue !esaarecían comien!o' ,u !esarrollo ha"ía si!o al#o lento se sent* al a1o !e e!a! & camin* sin a&u!a a los 7 a1os & su ren!imiento escolar era o"re' La exloraci*n física re$el* resi*n arterial !e 66:HQ mmN# /68(( k>a0( temeratura !e ?Q TC( eso !e 77(8 K#' /"ao0 & talla !e 67Q CM, /"aa0' La
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aciente resenta"a unas auscultaciones ulmonares & car!iacas normales' ,e o"ser$* una !ilataci*n $enosa le$e en el a"!omen !isten!i!o' El hí#a!o esta"a aumentan!o !e tama1o con una consistencia firme & lisa & lle#a"a hasta el el$is' @o se ala"a el $aso ni los ri1ones' El resto !e la exloraci*n física estu$o !entro !e los límites normales( sal$o or el Uescaso !esarrollo muscular'
R$%&'()*+% *$ '),+)(+.+! A' En suero o lasma a' Glucosa 7(Q mmolL /?( - H( mmolL0 "' Lactato ' mmolL / :'H- 7': mmolL0 c' >iru$ato :'8? mmolL /:':H V :'6: mmolL0 !' Wci!os #rasos li"res 6' mmolL /:'?- :(Q mmolL0 e' ;ri#licéri!os ?'6H #l /:(? -:(Q #L0 f' Cueros cetonicos totales 8:: m#L /?: m#L0 #' N (7H /'?H -(880 h' C37 total 67 mmolL /78-?: mmolL0 SEGÚN EL CASO CLNICO/ DESARROLLE!
#0 S.12+% 3 %42(+)% 60 D.)12+%(.7+ 80 B)%$ ,.+9&4.7) :0 D.%7&%.;2 50 S+'&7.;2 CASO CLNICO N°8 iura
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!on!e arece %ue tu$o un in#reso con osi"les !ia#n*stico !e es%uizofrenia' @ie#an h)"itos t*xicos' >arece %ue !es!e hace H a1os lle$a una !ieta estricta a "ase !e frutas & al#unas $er!uras' En la exloraci*n física se one a manifiesto ali!ez cut)nea( no ca%uéctico( se%ue!a! !e mucosas' Consciente & reacti$o( afe"ril( no ri#i!ez en la nuca( no a!enoatías' >resi*n arterial 66:: mmN#' A"!omen "lan!o !eresi"le( no mase ni me#alias( no !oloroso a la alaci*n' Extremi!a!es( ulsos conser$afos( no e!emas( no !atos !e trom"osis $enosa rofun!a( mo$iliza las 8 extremi!a!es'
R$%&'()*+% *$ '),+)(+.+!
SEGÚN EL CASO CLNICO/ DESARROLLE!
#0 S.12+% 3 %42(+)% 60 D.)12+%(.7+ 80 B)%$ ,.+9&4.7) :0 D.%7&%.;2 50 S+'&7.;2