UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DATOS INFORMATIVOS: TEMA: USO DEL HEMOCITÓMETRO NOMBRE: Raquel Jurado CARRERA: Ingeniería Bioquímica CICLO ACADÉMICO: septiembre 2017 - febrero 2018 ASIGNATURA: Microbiología II NIVEL: Cuarto PARALELO: Único PROFESOR: Dr. Carlos Rodríguez PRÁCTICA DE LABORATORIO N: 6 FECHA DE REALIZACIÓN: 01/12/2017 FECHA DE PRESENTACIÓN: 11/12/2017 1. OBJETIVOS 1.1 Objetivo General
Reconocer el uso del hemocitómetro mediante el cálculo de la concentración de esporas
1.2 Objetivos Específicos
Determinar la concentración en esporas por litro mediante el conteo de esporas presentes en una solución
Establecer el uso correcto del hemocitómetro así como las utilidades y características del mismo.
2. RESULTADOS Y CÁLCULOS Cuatro celdas
4 + 12 + 14 + 12 + 33 + 16 + 8 + 6 8
ó =
13 6.25 ×
10−
= 13.125 = 13
= 2.08 × 10 /
Cinco celdas
6 + 8 + 39 + 43 + 22 6
ó =
24 4×
10−
= 23.6 = 24
= 6 × 10 /
Tabla 1. Concentración de colonias por litro Celdas
Esporas
Volumen (litros)
4
4 – 12 – 14 - 12
4
33 – 16 – 8 - 6
6.25 × 10−
5
6 – 8 – 39 – 43 - 22
4 × 10−
Concentración
Concentración Promedio
2.08 × 10 / 4.04 × 10 / 6 × 10 /
3. DISCUSIÓN En la práctica de laboratorio se utilizó el hemocitómetro, para lo cual se colocó la muestra entre el portaobjetos y el cubreobjetos del mismo, se dejó reposar sobre la plataforma del microscopio unos minutos y se procedió a contar el número de esporas en varias celdillas, se obtuvo varios datos de los cuáles se obtuvo un promedio del número de esporas obtenido en las celdas de 4 y otro promedio de las celdas de 5, se dividió para un volumen de 6.25 × 10− y 4 × 10− litros respectivamente y se obtuvo la concentración en esporas/litro. El hemocitómetro es un portaobjetos especializado en el cual una retícula es grabada con láser, su construcción permite conocer el volumen de cualquier líquido colocado sobre él y por debajo de su cubreobjetos, la retícula se encuentra compuesta por nueve cuadros de 1 mm2 cada uno. Los cuatro cuadros de 1 mm2 localizados en cada esquina poseen a su vez 16 cuadros de 0.0625 mm2. El cuadro central (también de 1 mm2) se encuentra compuesto por 25 cuadros de 0.04 mm2, estos cuadros a su vez se encuentran compuestos por cuadros menores de tan solo 0.0025 mm2. Dada la profundidad de la cámara de tan solo 0.1 mm, cada una de estas unidades corresponde a volúmenes fijos conocidos, dependiendo del tipo de muestra a medir, se ha de preparar una muestra con una concentración apta para su recuento. Típicamente, el rango de concentraciones que permite contar el hematocitómetro
está entre 250.000 células y 2,5 millones de células por ml. Intentaremos que la muestra tenga una concentración en torno a 10 (1 millón) aplicando las diluciones correspondientes. Por debajo de 250.000 células / ml (2,5 * 10 ) la cantidad de células contadas no es suficiente para poder dar una estimación lo suficientemente fiable de la concentración celular. La concentración óptima para conteo en hematocitómetro es de 1 millón de células por ml = 10 células /ml. Por encima de 2,5 millones (2,5 * 10 ) la probabilidad de cometer errores de conteo crece demasiado, y también el tiempo y esfuerzo necesario para realizar un recuento con fiabilidad. Por encima de esta concentración es conveniente diluir la muestra para acercar la concentración al rango óptimo (Gonzáles, 2008), (Bastidas, 2004). La ventaja principal del uso del hemocitómetro es que es un método muy rápido y muy eficaz para las células relativamente grandes, las desventajas son que sólo sirve para suspensiones celulares relativamente concentradas puesto que si se tiene una concentración muy elevada no se realizará un conteo adecuado y resultará muy complicado, no hace distinción entre células vivas y células muertas puesto que simplemente se realiza el conteo de las células observadas y, con respecto a bacterias móviles, se debe inmovilizarlas previamente para poder realizar el conteo correctamente. Pueden existir errores de hasta 20% y 30% con este método de recuento, a los errores estadísticos por ser la muestra poco representativa, errores del volumen de muestra realmente introducido en la cámara, etc. Sin embargo, el hematocitómetro sigue siendo uno de los métodos más ampliamente utilizados en los laboratorios de todo el mundo (Pamo, 2014), (Aquiahuatl, y otros, 2010).
4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 4.1 Conclusiones
La concentración de esporas se obtuvo mediante el conteo de las mismas, el cálculo del promedio de esporas y su división con respecto al volumen utilizado respectivamente, dando una concentración de 4.04 × 10 esporas/litro. El hemocitómetro es un portaobjetos especializado utilizado para realizar el conteo de células (esporas), su ventaja principal es que es un método muy rápido y muy eficaz, las desventajas son que sólo sirve para suspensiones celulares relativamente concentradas, no hace distinción entre células vivas y células muertas, y con respecto a bacterias móviles, se debe inmovilizarlas previamente para poder realizar el conteo correctamente. Sin embargo, este sigue siendo uno de los métodos más ampliamente utilizados en los laboratorios de todo el mundo
4.2 Recomendaciones
Se recomienda realizar una limpieza del hemocitómetro antes de ser utilizado
Es recomendable diluir la solución a utilizar, para evitar errores en el caso de existir un gran número de esporas.
Realizar una correcta utilización del microscopio al momento de mover la placa para el conteo de esporas para así obtener datos fiables.
5. BIBLIOGRAFÍA Aquiahuatl, M., Volke, T., Ramírez, F., Salazar, M., Prado, L., & Matsumoto, k. (2010). MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL. Recuperado el 10 de Diciembre de 2017, de http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/crl/Microbiologia/16P/Manual_Micro16P.pdf Bastidas, O. (2004). Conteo Celular con Hematocitómetro. Recuperado el 10 de Diciembre de 2017, de http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara Neubauer.pdf Gonzáles. (2008). Conteo celular y evaluación de viabilidad. Life Science, 230-231. Pamo, M. (11 de Septiembre de 2014). Recuento Microbiano. Recuperado el 10 de Diciembre de 2017, de https://prezi.com/_mhvyohrhmiq/recuento-microbiano/
