BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Tubuh manusia memiliki suatu sistem pertahanan untuk melindungi diri dari benda asing yang mungkin bersifat patogen. Sistem pertahanan tubuh inilah yang disebut sistem imun. Sistem imun terdiri dari semua sel, jaringan, dan organ yang membentuk imunitas, yaitu kekebalan tubuh terhadap infeksi atau suatu penyakit. Sistem imun memiliki beberapa fungsi pada tubuh, yaitu penangkal
“benda”
asing
yang
masuk
ke
dalam
tubuh,
menjaga
keseimbangan fungsi tubuh, sebagai pendeteksi adanya sel-sel yang tidak normal, termutasi, atau ganas dan segera menghancurkannya. Antibodi terbentuk akibat masuknya bahan kimia spesifik dari spesies lain ke dalam sistem imun. Sistem imun mempunyai kemampuan untuk mengenali setiap asam amino, karbohidrat, atau lipid dan bereaksi terhadap bahan-bahan kimia ini melalui molekul reseptor spesifik. Keberadaan antigen spesifik dalam jaringan dapat ditentukan dengan mengikatkan antibodi monoklonal atau poliklonal pada antigen tersebut, dan menentukan lokasi ikatan- ikatan ini dengan sistem deteksi yang dirancang untuk mengidentifikasi imunoglobulin antibodi spesies tertentu. Banyak teknik yang digunakan namun secara keseluruhan teknologinya sama; menggunakan antibodi terhadap bahan yang akan diperiksa, diikuti dengan sistem deteksi yang mengenali imunoglobulin dari spesies asal antibodi, kemudian membuat molekul pelapor (reporter molecule) dari sistem deteksi (enzim, fluochrome, gold particle, dan lain-lain) untuk bereaksi dengan substratnya. Substrat yang sudah dikenal ini cukup permanen untuk didokumentasi lokasinya menggunakan mikroskop. Jaringan yang diperlukan untuk pemeriksaan imunokimia adalah blok paraffin dan sediaan sitologi. Blok paraffin adalah produk pengo-lahan jaringan-jaringan biopsi atau operasi yang dikirim ke Bagian Patologi. Sediaan sitologi dapat berupa cairan jaringan yang diperoleh secara biopsi
Imunositokimia
1
aspirasi, effusi pleura, ascites, cervix smear dan lain-lain. Pemeriksaan imunokimia
terhadap
jaringan
blok
paraffin
disebut
pemeriksaan
imunohistokimia (IHK) (imunohistochemistry, IHC) dan terhadap jaringan sitologi disebut imunositokimia (ISK) (immunocytochemistry, ICC). Setelah diproses, semua jenis antibodi spesifik yang berikatan dengan antigen, baik pada pemeriksaan imunohistokimia atau imunositokimia akan memberikan warna yang sama (Hastuti dan Lubis, 2011).
B. Rumusan Masalah
1. Apa yang dimaksud dengan metode imunositokimia? 2. Apa
saja
metode
yang
dilakukan
dalam
melakukan
proses
imunositokimia?
C. Tujuan
1. Untuk mengetahui metode imunositokimia 2. Untuk
mengetahui
metode
yang
digunakan
dalam
melakukan
imunositokimia
Imunositokimia
2
BAB II PEMBAHASAN
A. Imunositokimia
Imunositokimia
merupakan
suatu
metode
yang
digunakan
untuk
mendeteksi adanya ekspresi suatu protein spesifik atau antigen dalam sel dengan menggunakan antibodi spesifik yang akan berikatan dengan protein atau antigen (Firiasari, 2009). Imunositokimia dapat digunakan untuk mempelajari distribusi enzim yang spesifik pada struktur sel, mendeteksi komponen sel, biomakro molekul seperti protein, karbohidrat. Imunositokimia dapat digunakan untuk mendeteksi berbagai penyakit, seperti kanker dan tumor. Tempat pengikatan antara antibodi dengan protein spesifik diidentifikasi dengan marker yang biasanya dilekatkan pada antibodi dan bisa divisualisasi secara langsung atau dengan reaksi untuk mengidentifikasi marker. Adapun beberapa marker yang berupa senyawa berwarna antara lain: 1. Luminescence 2. Zat berfluoresensi : fluorescein, umbelliferon, tetrametil rodhamin 3. Logam berat : colloidal, microsphere, gold, silver, label radioaktif 4. Enzim : Horse Radish Peroxidase (HRP) dan alkaline phosphatase. Antibodi adalah suatu imunoglobulin yang dihasilkan oleh sistem imun dalam merespon kehadiran suatu antigen tertentu. Antibodi dibentuk berdasarkan antigen yang menginduksinya. Beberapa antibodi yang telah teridentifikasi adalah IgA, IgD, IgE, IgG, dan IgM. Antigen adalah suatu zat atau substansi yang dapat merangsang sistem imun dan dapat bereaksi secara spesifik dengan antibodi membentuk kompleks terkonjugasi. Ikatan antibodiantigen divisualisasikan menggunakan senyawa label/marker. Sistem imun mempunyai kemampuan alami yang dibawa lahir untuk mengenali tiap ikatan asam amino, karbohidrat, atau lemak serta bereaksi terhadap bahan-bahan tersebut. Pengenalan ini tergantung dari besarnya molekul. Banyak protein yang cukup besar untuk merangsang terjadinya
Imunositokimia
3
respons imun, yang dengan demikian bersifat antigenik. Namun banyak juga molekul-molekul lain, atau protein-protein kecil yang tidak bersifat antigenik dan harus terlebih dahulu berikatan dengan molekul yang lebih besar agar dapat dikenal oleh sistem imun. Bahan kimia atau protein dengan molekul kecil ini disebut hapten. Ikatan antibodi-antigen dapat dilihat dengan menggunakan berbagai cara, paling sering dengan mengkonjugasi antibodi dengan enzim, misalnya peroxidase, yang dapat mengkatalisa reaksi dan menghasilkan warna. Reaksi antigen dan antibodi adalah reaksi yang sangat spesifik, sehingga sangat mendukung diagnosis berbagai macam penyakit (Elisa, 2014). Molekul asing (foreign) masuk kedalam tubuh, maka ia akan dikenali sebagai bahan yang terikat dengan reseptor Human Leukocyte Antigen (HLA) tertentu pada makrofag. Makrofag mencerna molekul asing tersebut dan menampilkan ikatan tertentu dari kelompok luar atom yang disebut epitop pada permukaan dari makrofag. Epitop tersebut kemudian kontak dengan limfosit T helper, yang menolong menampilkan epitop tersebut pada limfosit sel B. Sel B akan mensintesa rantai protein immunoglobulin yang mampu mengikat epitop secara spesifik. Tiap bahan antigenik mempunyai banyak tempat (site) epitop, juga disebut determinan, yang mampu berikatan dengan antibodi. Secara in vivo, respons terhadap antigen dapat bersifat luas dan antibodi yang bereaksi dengan determinan-determinan pada antigen ini disebut antibodi poliklonal (Hastuti dan Lubis, 2011).
B. Metode Imunositokimia
Prinsip dari metode imunositokimia adalah perpaduan antara reaksi imunologi dan kimiawi, dimana reaksi imunologi ditandai adanya reaksi antara antigen dengan antibodi, dan reaksi kimiawi ditandai adanya reaksi antara enzim dengan substrat. Pemeriksaan imunositokimia dimaksudkan untuk mengenali bahan spesifik tertentu didalam jaringan dengan menggunakan antibodi dan sistem deteksi yang memungkinkan untuk mengenali bahan spesifik tersebut (Sudiana, 2005).
Imunositokimia
4
Menurut Fitriasari (2009), ada dua jenis metode imunositokimia, yaitu metode langsung dan metode tidak langsung. 1. Metode langsung Pada metode langsung, antibodi yang mengikat fluoresen atau zat warna langsung berikatan dengan antigen pada sel. Prinsip dari metode ini adalah menggunakan antibodi primer yang sudah terlabel dan berikatan langsung dengan antigen target secara langsung. Metode langsung (direct method) merupakan metode pengecatan satu langkah karena hanya melibatkan 1 jenis antibodi, yaitu antibodi yang terlabel, contohnya antiserum terkonjugasi fluorescein isothiocyanate (FITC) atau rodhami Pada metode ini, antibodi spesifik yang mengenali antigen jaringan akan dimodifikasi dengan mengkonjugasikan molekul indikator pada antibodi tersebut. molekul indikator tersebut dapat berupa molekul yang berpendar seperti biotin atau enzim peroksidase, sehingga apabila diberikan substrat akan memberikan warna pada jaringan tersebut. 2. Metode Tidak Langsung Prinsip metode imunohistokimia indirect menggunakan antibodi primer yang tidak ada labelnya, namun digunakan juga antibodi sekunder yang sudah memiliki label dan akan bereaksi dengan IgG dari antibodi primer. Metode tidak langsung menggunakan dua macam antibodi, yaitu antibodi primer (tidak berlabel) dan antibodi sekunder (berlabel). Antibodi primer bertugas mengenali antigen yang diidentifikasi pada jaringan (first layer), sedangkan antibodi sekunder akan berikatan dengan antibodi primer (second layer). Antibodi kedua merupakan anti-antibodi primer. Pada metode tidak langsung, antigen diikatkan pada antibodi primer secara langsung, kemudian ditambahkan antibodi sekunder yang mengikat enzim seperti peroksidase, alkali fosfatase, atau glukosa oksidase. Antibodi sekunder akan berikatan dengan antibodi primer. Pelabelan antibodi sekunder diikuti dengan penambahan substrat berupa kromogen.
Imunositokimia
5
Kromogen merupakan suatu gugus fungsi senyawa kimiawi yang dapat membentuk senyawa berwarna bila bereaksi dengan senyawa tertentu. Namun diperlukan antibodi lain yang dapat berikatan dengan antibodi primer yang disebut dengan antibodi sekunder. Antibodi sekunder ini dimodifikasi sehingga memiliki molekul indikator pada antibodi tersebut. Setiap 1 antibodi primer dapat dikenali oleh lebih dari 1 antibodi sekunder, oleh karena itu, setelah diberikan substrat akan terbentuk warna yang lebih jelas pada jaringan tersebut. Untuk menjamin antibodi agar dapat mengikat antigen, sel harus difiksasi dengan ditempelkan pada bahan pendukung padat sehingga antigen akan immobile. Hal ini dapat dilakukan dengan cara menumbuhkan sel pada slide mikroskop, coverslip, atau bahan pendukung plastik yang sesuai. Ada dua macam metode fiksasi, yaitu pelarut organik dan reagen cross-linking. Pelarut organik seperti alkohol dan aseton akan memindahkan lipid, mendehidrasi sel, dan mengendapkan protein. Reagen cross-linking seperti paraformaldehid membentuk jembatan intermolekuler melalui gugus amino bebas. Imunositokimia melibatkan inkubasi sel dengan antibodi. Antibodi akan berikatan dengan antigen atau protein spesifik di dalam sel. Antibodi yang tidak berikatan dipisahkan dengan pencucian, sedangkan antibodi yang berikatan dideteksi secara langsung dengan antibodi primer berlabel, maupun secara tidak langsung dengan antibodi sekuder berlabel enzim atau fluoresen (Firiasari, 2009).
Imunositokimia
6
BAB III PENUTUP
A. Kesimpulan
1. Imunositokimia merupakan suatu metode yang digunakan untuk mendeteksi adanya ekspresi suatu protein spesifik atau antigen dalam sel dengan menggunakan antibodi spesifik yang akan berikatan dengan protein atau antigen. 2. Metode yang digunakan dalam imunositokimia ada 2 yaitu metode langsung dan metode tidak langsung.
Imunositokimia
7
