UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE FILOSOFÍA, LETRAS Y CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN CARRERA DE CIENCIAS NATURALES Y DEL AMBIENTE, BIOLOGÍA Y QUÍMICA Laboratorio de Bioquímica Integrantes: Curso: 4to semestre de CC.NN Fecha: 28 de mayo del 2013 Informe de práctica NO 2 TEMA: Identificación de proteínas por coloración y precipitación a partir de la
clara (albumina) de huevo OBJETIVOS GENARAL:
Identificar proteínas por coloración y precipitación a partir de la clara (albumina) de huevo.
MATERIALES: -
Gradilla para tubos de ensayo 6 tubos de ensayo Pinzas para tubos de ensayo Fósforos Mechero de Bunsen Vaso de precipitación Agitador de vidrio
REACTIVOS Y SUSTANCIAS: -
Agua Clara de huevo diluida en agua Ácido nítrico concentrado Amoniaco concentrado Sulfato cúprico al 1% Hidróxido de sodio al 40% Acetato de plomo 5% Alfa naftol al 1% en alcohol Ácido acético concentrado Ácido sulfúrico concentrado Reactivo de ESBASH
H2O Albumina + H2O HNO3 NH3 CuSO4 NaOH Pb(C2 H3 O2)2 C10 H7 OH CH3-COOH H2 SO4 mezcla de una solución acuosa de ácido pícrico al 1% y otra solución de ácido cítrico al 2 %.
MARCO TEORICO: Proteínas Las proteínas son moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. El término proteína proviene de la palabra francesa protéine y ésta del griego πρωτεῖος (proteios), que significa
'prominente, de primera calidad'.
Por sus propiedades físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples (holoproteidos), que por hidrólisis dan solo aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrólisis dan aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Las proteínas son indispensables para la vida, sobre todo por su función plástica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por su s funciones biorreguladoras (forman parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son proteínas). Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más versátiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo y realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan: Estructural. Esta es la función más importante de una proteína (Ej: colágeno), Inmunológica (anticuerpos), Enzimática (Ej: sacarasa y pepsina), Contráctil (actina y miosina). Homeostática: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actúan como un tampón químico), Transducción de señales (Ej: rodopsina) Protectora o defensiva (Ej: trombina y fibrinógeno) Las proteínas están formadas por aminoácidos los cuales a su vez están formados por enlaces peptídicos para formar esfingocinas. Las proteínas de todos los seres vivos están determinadas mayoritariamente por su genética (con excepción de algunos péptidos antimicrobianos de síntesis no ribosomal), es decir, la información genética determina en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo. Las proteínas se sintetizan dependiendo de cómo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a señales o factores externos. El conjunto de las proteínas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma. Aspecto bioquímico Las proteínas son biopolímeros, están formadas por un gran número de unidades estructurales simples repetitivas (monómeros). Debido a su gran tamaño, cuando estas moléculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman siempre dispersiones coloidales, con características que las diferencian de las disoluciones de moléculas más pequeñas. Por hidrólisis, las moléculas de proteína se dividen en numerosos compuestos relativamente simples, de masa molecular pequeña, que son las unidades fundamentales constituyentes de la macromolécula. Estas unidades son los aminoácidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen entre sí mediante enlaces peptídicos. Cientos y miles de estos aminoácidos pueden participar en la formación de la gran molécula polimérica de una proteína. Todas las proteínas tienen carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, y casi todas poseen también azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes proteínas, el contenido de nitrógeno representa, por término medio, 16% de la masa total de la molécula; es decir, cada 6,25 g de
proteína contienen 1 g de N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la cantidad de proteína existente en una muestra a partir de la medición de N de la misma. La síntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las células según las directrices de la información suministrada por los genes. Las proteínas son largas cadenas de aminoácidos unidas por enlaces peptídicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de residuos de aminoácido adyacentes. La secuencia de aminoácidos en una proteína está codificada en su gen (una porción de ADN) mediante el código genético. Aunque este código genético especifica los 20 aminoácidos "estándar" más la selenocisteína y —en ciertos Archaea— la pirrolisina, los residuos en una proteína sufren a veces modificaciones químicas en la modificación postraduccional: antes de que la proteína sea funcional en la célula, o como parte de mecanismos de control. Las proteínas también pueden trabajar juntas para cumplir una función particular, a menudo asociándose para formar complejos proteicos estables. Estructura de las proteínas
CLASIFICACION Según su composición.- pueden clasificarse en proteínas "simples" y proteínas "conjugadas".
Las "simples" o "Holoproteínas" son aquellas que al hidrolizarse producen únicamente aminoácidos, y son: Globulares Prolaminas:Zeína (maíz),gliadina (trigo), hordeína (cebada) Gluteninas:Glutenina (trigo), orizanina (arroz). Albúminas:Seroalbúmina (sangre), ovoalbúmina (huevo), lactoalbúmina (leche) Hormonas: Insulina, hormona del crecimiento, prolactina, t irotropina Enzimas: Hidrolasas, Oxidasas, Ligasas, Liasas, Transferasas...etc. Fibrosas Colágenos: en tejidos conjuntivos, cartilaginosos Queratinas: En formaciones epidérmicas: pelos, uñas, plumas, cuernos. Elastinas: En tendones y vasos sanguineos Fibroínas: En hilos de seda, (arañas, insectos) Las "conjugadas" o "Heteroproteínas" son proteínas que al hidrolizarse producen también, además de los aminoácidos, otros componentes orgánicos o inorgánicos. La porción no protéica de una proteína conjugada se denomina "grupo prostético". Las proteínas conjugadas se subclasifican de acuerdo con la naturaleza de sus grupos prostéticos. NOMBRE Nucleoproteínas
COMPONENTE NO PROTEICO Acidos nucléicos
EJEMPLOS
Lipoproteínas
Lípidos
de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL)
Fosfoproteínas
Grupos fosfato
Metaloproteínas
Metales
serina, treonina, tirosina, aspartato o histidina. Hemoglobina, citocromos,
Nucleosomas de la cromatina Ribosomas
rubredoxina, ceruloplasmina
Glucoproteínas
Monosacáridos
Ribonucleasa Mucoproteínas Anticuerpos Hormona luteinizante
DESARRROLLO DE PRÁCTICA: 1) En el vaso de precipitación colocar clara de un huevo añadir el doble de agua y agitar con el agitador de vidrio. 2) Colocar 2ml de la mescla en 5 tubos de ensayo, y numerar cada tubo del 1, 2, 4, 5. 3) En el tubo de ensayo sobrante (3) colocar clara de huevo pura. Tubo de ensayo 1
REACCION XANTOPROTEICA
1. En el tubo 1 con clara huevo diluida colocar Ácido nítrico concentrado HNO3 2. Encender el mechero de Bunsen, proceder a calentar lentamente el tubo con la mescla hasta lograr un precipitado. 3. Dejar enfriar, y una vez frio añadir gotas de amoniaco NH3 hasta lograr un cambio en el precipitado anterior
4. Observar detenidamente los cambios de coloración y apuntarlos en observaciones. Tubo de ensayo 2
REACCION DE BEURET
1. En el tubo 2 con clara de huevo diluida, colocar con mucho cuidado Hidróxido de sodio al 40% NaOH 2. Añadir a esta mescla 2 gotas de Sulfato cúprico al 1% CuSO4. 3. Observar detenidamente los cambios de coloración o de textura y apuntarlos en observaciones. Tubo de ensayo 3 1. 2. 3. 4.
REACCION DE AZUFRE
En el tubo 3 con clara pura, colocar Hidróxido de sodio al 40% NaOH Proceder a calentar lentamente el tubo con la mescla durante 2 min. Dejar enfriar, y una vez frio añadir gotas de acetato de plomo Pb(C2 H3 O2). Observar detenidamente los cambios de coloración o de textura y apuntarlos en observaciones.
Tubo de ensayo 4
REACCION DE MOLISH
1. En el tubo 4 con clara de huevo diluida, colocar 1ml. de Alfa naftol al 1% en alcohol C10 H7 OH. 2. Inclinar el tubo de ensayo y con mucho cuidado hacer resbalar lentamente por las paredes del tubo gotas de ácido sulfúrico concentrado H2 SO4. 3. Observar detenidamente los cambios de coloración o de textura y apuntarlos en observaciones. Tubo de ensayo 5
REACCION DE ADAM
1. En el tubo 5 con clara de huevo diluida, colocar 1ml. de ácido acético concentrado CH3-COOH 2. Inclinar el tubo de ensayo para evitar una reacción brusca, añadir gotas de ácido sulfúrico concentrado H2SO4. 3. Observar detenidamente los cambios de coloración o de textura y apuntarlos en observaciones. Tubo de ensayo 6
REACCION DE ESBASH
1. En el tubo 6 con clara de huevo diluida, colocar barias gotas del r eactivo de ESBASH, y añadir gotas de agua. 2. Observar detenidamente los cambios de coloración o de textura y apuntarlos en observaciones. OBSERVACIONES: Tubo de ensayo 1
REACCION XANTOPROTEICA
clara de huevo diluida al colocar nítrico ácido concentrado HNO3
se forma precipitado color blanco
un de
al calentar mescla
la
Al añadir gotas de amoniaco NH3
se forma un precipitado de color amarillento
Se el precipitado cambia de color a uno mucho más anaranjado
Tubo de ensayo 2
REACCION DE BEURET
clara de huevo diluida al colocar Hidróxido de sodio al 40% NaOH
Al añadir a esta mescla 2 gotas de Sulfato cúprico al 1% CuSO4.
No tiene un cambio fácilmente visible
la mescla toma un color violeta azulado
Tubo de ensayo 3
REACCION DE AZUFRE
clara pura al colocar Hidróxido de sodio al 40% NaOH
Al calentar lentamente la mescla durante 2 min. La mescla toma un color amarillento
No tiene un cambio fácilmente visible
Tubo de ensayo 4
Se forma un anillo sobrenadante de color marrón obscuro
REACCION DE MOLISH
Clara de huevo diluida al colocar 1ml. de Alfa naftol al 1% en alcohol C10 H7 OH.
Se forma un anillo sobrenadante de color marrón claro
Tubo de ensayo 5
Al añadir gotas de acetato de plomo Pb(C2 H3 O2).
Al añadir lentamente gotas de ácido sulfúrico concentrado H2 SO4. Se forma un anillo de color verdoso entre las dos sustancias
REACCION DE ADAM
clara de huevo diluida al colocar 1ml. de ácido acético concentrado CH3-COOH
La mezcla lechoso
tomo
un
aspecto
al añadir a la mezcla gotas de ácido sulfúrico concentrado H2SO4. Se forma un anillo de color violeta entre las dos sustancias
Tubo de ensayo 6
REACCION DE ESBASH
clara de huevo diluida al colocar barias gotas del reactivo de ESBASH, y añadir gotas de agua.
La mezcla se torna de un color amarrillo fosforescente
CONCLUSIONES:
Hemos identificado la existencia de proteínas en la albumina de la clara de huevo a través de varias técnicas de reacción como son: la reacción xantoproteica, reacción de Beuret, de Azufre, de Molish, de Adam y de Esbash. Hemos demostrado como las proteínas reaccionan con distintos reactivos, tornándose de distintos colores según el reactivo o incluso con un cambio en su aspecto.
RECOMENDACIONES:
Tener mucho cuidado al momento de manejar los distintos ácidos pero en especial el ácido sulfúrico H2 SO4, el cual para su manejo es recomendable, inclinar el tubo de ensayo y con mucho cuidado hacer resbalar lentamente por las paredes del tubo gotas de dicho acido, con el fin de evitar una reacción brusca o desfavorable..
FUENTE DE INFORMACION: -
Practica de autoría de Dra. Portero http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna http://www.monografias.com/trabajos10/compo/compo.shtml Fotos a cargo de la estudiante Katherine Simbaña. .