UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIA, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA DE ALIMENTOS
INFORME °N 08 EXTRACCIÓN DE ADN DEL TOMATE
ALUMNO
: MONTENEGRO CLAUDIO, Juan Henry
PROFESOR
: Dr. Pedro PELAEZ SANCHEZ
Tingo Maria – Perú Octubre - 2017
I. INTRODUCCIÓN Muchos estudios de Biología Molecular comienzan con la extracción de ácidos nucleicos. La lisis celular libera las moléculas en una fase acuosa que es separada de los restos celulares por centrifugación. Las proteínas son removidas de la fase acuosa con solventes orgánicos (fenol, cloroformo). El ADN, que permanece en la fase acuosa, precipita junto al etanol y posteriormente es purificado y resuspendido en un buffer adecuado.
OBJETIVOS - Aprender el método para la extracción de ADN - Extraer ADN de una muestra de tomate.
II. MARCO TEÓRICO 2.1. ADN El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el lugar donde reside la información genética de un ser vivo, su estructura es una cadena larga de piezas planas que se proyectan hacia afuera, denominadas bases. Esta escalera en espiral tiene la capacidad de enrollarse y desenrollarse para que la cadena de ácido nucleico pueda duplicarse. Ese proceso de duplicación, llamado replicación, sucede cada vez que una célula se divide ( CORFIELD et al., 1992).
2.2. Extracción de ADN La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación, debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último, hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol (HAGELBERG et al., 1989).
2.2.1. Extracción del ADN en las plantas El ADN genómico de las plantas es más difícil de extraer a causa de la pared celular de la planta, que se elimina por homogeneización o mediante la adición de celulosa para degradar la celulosa que forma la pared celular (ZAVALA 2005).
2.2.2. Extracción de ADN animal Los leucocitos de sangre periféricos son una fuente principal de ADN genómico en animales, pero la recogida de muestras es difícil ya que la sangre debe ser retirada del animal. La sangre contiene una serie de compuestos como proteínas, lípidos, glóbulos blancos, glóbulos rojos, plaquetas y plasma, que pueden contaminar la muestra de ADN (ZAVALA 2005).
2.2.3. Diferencias Las diferencias entre el ADN de las plantas y los animales se encuentran en la secuencia de bases en la hélice. Los compuestos que se encuentran en las células vegetales están ausentes en las células animales y las secuencias de bases de ADN reflejan esto, puesto que el ADN genómico de la planta es a menudo mayor que el ADN de los animales. Estas diferencias afectan los métodos de extracción, ya que impacta en el rendimiento y la pureza del ADN.
2.3. Métodos de extracción 2.3.1. Método CTAB Bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) de extracción es un método de extracción de ADN de plantas que elimina los polifenoles de las paredes celulares de las plantas. Los polifenoles son compuestos con cadenas largas de ADN que se asemejan y se precipitan de manera similar.
2.3.2. Método de acetato de potasio SDS El método de acetato de potasio de dodecilsulfato de sodio (SDS) de la extracción de ADN es otra forma común para extraer material genético de la planta. Este método utiliza el alcohol para romper las paredes celulares.
III. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. Materiales y Reactivos - Tomate maduro - Cuchillo y Tabla para picar - Vaso de precipitados - Tela - Detergente (Champú) - Varilla - Probeta - Pipeta - Etanol al 95% frío - Cloruro de sodio 2M
3.2. Metodología - El etanol debe ser colocado en el congelador al menos un día antes de la realización de la práctica. También se debe enfriar en cloruro de sodio. - Cortar el tomate en trozos pequeños - Licuar el tomate en trozos, filtrar en un vaso, sobre una tela para separar el resto de tejido que haya quedado por romper.
- Medir el volumen del filtrado en una probeta, luego depositar en un vaso. - Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M frio. - A continuación, se añade 2 mL de detergente (Champú). Mezclar bien. Y colocar la mezcla en una probeta. - Por las paredes de la probeta agregar muy despacio 50 mL de etanol 96% frio, de manera que se formen dos capas. - Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el ADN que precipita en la interfase de las dos capas y llega hasta la superficie. - Introducir una varilla de vidrio y remover lentamente en una misma dirección, se observará que sobre la varilla queda adherido el ADN, con aspecto de pequeñitos copos de algodón mojado.
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES - Se pudo observar que se formó en tres fases, en la fase 1 se observó el agua y en la fase 2 partículas y en la 3 las proteínas de ADN suspendidas en otros compuestos. - Según MALAJOVICH (2012), esta separación de fase se debe a la diferencia de densidades
V. CONCLUSIONES - Se aprendió el método de acetato de potasio de dodecilsulfato de sodio (SDS), para la extracción de ADN. - Se pudo extraer el ADN del tomate, la cual se le observo.
VI. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA CORFIELD V, Y VANDENPLAS E. (1992). Ancient DNA genotyping: HLA and CA repeats by PCR. Ancient DNA Newsletter 1: 31-34 HAGELBERG E. Y SYKES B. (1989). Ancient bone DNA amplified. Nature 342: 485. MALAJOVICH (2012). Biotecnología. Guías de actividades: enseñanza y divulgación. 2a ed. Bernal – Universidad Nacional de Quilmes. http://www.bteduc.bio.br. ZAVALA J. 2005. Manual de técnicas básicas de biología celular. 1ra ed. UADY. México: 19,27-28,43-49
