[INFORME Nº01 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL-FIA] AMBIENTAL-FIA]
INFORME Nº01 Material de laboratorio de microbiología ambiental, limpieza, desinfección esterilización! "reparación de medios de c#lti$o
O%&E'I(O)* • • • •
Identificar y reconocer los instrumentos de laboratorio. Poner en práctica las técnicas de esterilización Métodos de desinfección y esterilización esterilización de los instrumentos y/o materiales Conocer las normas para la preparación adecuada de medios de cultivo
F+N-MEN'O 'EORI.O* PREE!"#CI$! %E& M#"ERI#& %E '(R#" '( R#"(RI( (RI( #demás de un ambiente apto para el traba)o microbioló*ico+ microbioló*ico+ el laboratorio de micr microb obio iolo lo*, *,a a re-u re-uie iere re de una una inst instru rume ment ntac ació ión n bási básica ca de uso uso corr corrie ient nte e en microbiolo*,a+ microbiolo*,a+ como la si*uiente "ubos de ensayo
%estinados a conservar medios de cultivo en pe-ueos vol0menes. e utilizan tubos de vidrio de diversos tamaos+ con tapa a rosca o a presión. El vidrio debe ser de buena calidad+ neutro+ transparente e inalterable a los tratamientos. Placas de Petri
Ca)as de vidrio de sección circular+ con tapa. E1isten de diferentes tamaos se*0n su uso+ aun-ue las más frecuentemente utilizadas tienen 23 cm de diámetro.
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Pipetas *raduadas
Para su uso en el laboratorio de microbiolo*,a se les coloca un tapón de al*odón en el e1tremo superior+ de manera de impedir -ue el operador aspire l,-uidos potencialmente contaminados+ o -ue contamine el medio de cultivo al aspirarlo. e utilizan para realizar inoculaciones y diluciones. Para mane)ar pe-ueos vol0menes 4menores de 2 ml5 se recomienda el uso de pipetas automáticas -ue miden e1actamente el volumen deseado 4633+ 263+ 63 7l etc.58 en el e1tremo se colocan puntas estériles -ue se reemplazan cuando se desea.
Pipetas Pasteur
son tubos de vidrio terminados en capilar. e usan para transportar pe-ueos vol0menes de l,-uido o para sembrar a partir de medios de cultivo l,-uidos.
Espátula de %ri*als9y
e construye con una pipeta Pasteur lar*a o con una varilla de vidrio. e calienta el e1tremo en la llama del mec:ero y se dobla en án*ulo recto unos ; cm+ esta 0ltima porción se dobla nuevamente del mismo modo. e utiliza para distribuir una muestra l,-uida -ue se siembra sobre la superficie de un medio de cultivo sólido.
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Man*o o cabo de
Marcador permanente al solvente :
on marcadores resistentes al a*ua+ se utilizan para marcar o escribir sobre superficies de vidrio. Portaob)etos
&ámina rectan*ular de vidrio incoloro de =+6 cm 1 >+6 cm y apro1imadamente 2 cm de espesor. e utilizan para :acer observaciones microscópicas de los microor*anismos+ ya sea en fresco o fi)ados. Portaob)etos e1cavados
e utilizan para realizar e1ámenes con *ota pendiente+ para ello presentan una depresión de unos 23 a 2= mm de diámetro. En este caso el material a observar es una *ota de l,-uido suspendido. Cubreob)etos
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Pe-ueas láminas de vidrio transparente+ de poco espesor 43+22 a 3+=? mm5+ usados para cubrir los preparados realizados sobre el portaob)etos para su posterior observación microscópica. "ubos o @campanitasA de %ur:am
Pe-ueos tubos 4de unos 61?3 mm5 -ue son colocados en forma invertida dentro de los tubos de ensayo -ue contienen medio de cultivo l,-uido+ sirven para verificar la producción de *as por parte de los microor*anismos. Erlenmeyer
e utilizan para preparar los medios de cultivo+ o para el desarrollo de microor*anismos en medio l,-uido con a*itación o aireación. (tros elementos y aparatos #l material citado debe a*re*arse por su uso frecuente+ mec:eros y *radillas. &os aparatos más com0nmente usados en el laboratorio de microbiolo*,a son microscopios+ lupas+ autoclave+ estufas de esterilización y cultivo+ bao termo re*ulable+ balanzas+ espectrofotómetro+ centr,fu*a+ :eladeras+ etc. &a microbiolo*,a es la ciencia -ue estudia los microor*anismos en cual-uiera de sus aspectos morfolo*,a+ estructura y composición -u,mica+ fisiolo*,a+ *enética+ ta1onom,a y ecolo*,a. #demás de estudiar otros aspectos colaterales relacionados de su interacción con el :ombre tales como+ capacidad de producir enfermedades o las aplicaciones biotecnoló*icas.
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E"ERI&IB#CI(!
Para poder desempear correctamente las tareas en un laboratorio de microbiolo*,a+ es indispensable contar con conocimientos teóricos acerca de los diferentes métodos de control del crecimiento microbiano 4métodos de esterilización+ desinfección+ asepsia+ etc.5. "ambién con un buen mane)o práctico de los aparatos destinados a tal fin+ del flameado de tubos y esterilización de asas y a*u)as a la llama del mec:ero. .ON.E"'O) Por control del crecimientos microbiano+ se entiende tanto la in:ibición del @crecimientoA microbiano 4evitar su multiplicación5 como la destrucción de a-uellos. En este conte1to se emplean una serie de término Esterilización Es el proceso de destrucción o eliminación completa de toda forma de vida e1istente en el interior o en la superficie de cual-uier material+ por medio del calor+ radiaciones+ filtración+ etc. Por lo tanto+ la esterilización es un término absoluto e incluye la destrucción de las esporas y formas ve*etativas+ los virus+ etc. esinfección Es un proceso en el -ue se destruyen las formas ve*etativas de los microor*anismos más comunes pero no las esporas. eneralmente los desinfectantes son productos -u,micos e1cesivamente tó1icos para ser usados directamente sobre te)idos vivos. Muy pocos desinfectantes lle*an a esterilizar. -ntisepsia Es un proceso en el -ue se destruyen las formas ve*etativas de los microor*anismos pató*enos más comunes+ pero no necesariamente esporas+ presentes sobre el cuerpo+ la piel+ las mucosas+ los te)idos vivos+ etc. El a*ente empleado se denomina antiséptico. -sepsia e refiere a la condición de ausencia de microor*anismos de un ob)eto o área. Por e)emplo+ las técnicas asépticas son las -ue evitan la contaminación propia 5
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de otros o de los materiales durante el traba)o. Microbios tasis Es una condición por la -ue el crecimiento o la multiplicación de los microor*anismos están in:ibidos+ lo -ue no -uiere decir -ue sean destruidos. i el a*ente microbios ático es eliminado+ el crecimiento microbiano puede resur*ir. %e i*ual definición pero de aplicación a la correspondiente cate*or,a de microor*anismos son los fun*istáticos y los bacteriostáticos. Microbicida Es el a*ente -ue destruye las formas viables de los microor*anismos. %e i*ual si*nificado pero con ámbito más restrin*ido son los términos fun*icida y bactericida. &a naturaleza de estos a*entes en al*unos casos es f,sica y en otros -u,mica. E)emplos de #*entes desinfectantes y antisépticos de naturaleza -u,mica son ó1ido de etileno+ formalde:ido+ peró1ido de :idró*eno. Day una serie de posibilidades para el control de los microor*anismos basadas en el empleo de a*entes f,sicos como el calor+ las radiaciones+ la filtración. Métodos f,sicos •
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Calor :0medo 4en autoclave de vapor5 Calor seco 4en :orno de esterilización5 lama directa Incineración #ire caliente Pasteurización Ebullición Fapor "indalización Radiación Radiación ionizante
Radiación no ionizante 4p. e)Radiación infrarro)a y Radiación ultravioleta5 Métodos -u,micos
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#lco:oles Etanol #lco:ol isoprop,lico #lde:,dos ormol lutaralde:,do enoles enol 4Gcido carbólico5 Hileno $1ido de etileno Peró1ido de :idró*eno
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-/EN'E F)I.O* E .-OR El calor es uno de los a*entes f,sicos más usados. u acción depende de la temperatura alcanzada y del tiempo de aplicación. %e la consideración de éstos dos aspectos sur*en las si*uientes e1presiones •
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Punto térmico mortal es la menor temperatura capaz de matar una suspensión bacteriana en 23 minutos 4tiempo constante y temperatura variable5. "iempo térmico mortal es el menor tiempo necesario para matar una suspensión bacteriana a una temperatura determinada 4tiempo variable y temperatura constante5.
Para medir el efecto del calor se debe tener en cuenta si se trata de formas ve*etativas o esporuladas 4de resistencia5. Para eliminar las formas ve*etativas no se re-uiere de temperaturas muy altas ya -ue la mayor,a se destruye a los 63 y >3C+ especialmente las pató*enas. &as bacterias esporuladas re-uieren de temperatura superiores a los 233C. #demás de la temperatura y el tiempo de e1posición es importante tener en cuenta la 2#medad+ el p3 y la nat#raleza del material a esterilizar. &a :umedad :ace más efectivo el poder de penetración del calor8 en cuanto al pD+ el a*re*ado de ciertas sales alcalinas aumenta la temperatura de ebullición. F#ndamento de la esterilización por calor El calor act0a desnaturalizando 4coa*ulando5 las prote,nas. En las formas esporuladas 4de resistencia5+ esta acción se ve disminuida por la presencia de l,pidos formando parte de su estructura -u,mica+ -ue act0a prote*iendo las uniones pept,dicas de las prote,nas. FORM-) "O)I%E) E - +'II4-.I5N E .-OR .OMO -/EN'E E)'ERII4-N'E El calor puede ser aplicado para la esterilización de tres maneras diferentes .-OR )E.O ! Es aire a temperatura elevada. E1isten tres tipos a6 F#ego directo Consiste en e1poner directamente a la llama el material a esterilizar+ lo -ue se lo*ra por o1idación violenta. Este método se utiliza para asas+ a*u)as+ flameado de bocas de tubos u otros recipientes y destrucción de material contaminado. En las llamas de los mec:eros 'unsen se alcanzan temperaturas superiores a los =.633C+ por lo -ue una breve e1posición es suficiente. in embar*o+ cuando las ansas de siembra están muy car*adas con microor*anismos+ la aplicación directa de la llama provoca la dispersión irre*ular del contenido de a-uéllas+ con el consi*uiente peli*ro de la contaminación. 7n sistema alternativo a los mec:eros son los incineradores eléctricos bacterianos+ en los -ue el ries*o de contaminación no e1iste.+ ya -ue la dispersión es reco*ida en el tubo del aparato. b6 Incineración en 2ornos crematorios: e aplica a elementos contaminados de los -ue no importa su destrucción+ como apósitos+ cadáveres de animales infectados o material plástico contaminado. e utiliza la combustión directa o el :orno crematorio. c6 -ire caliente 7e8! 3orno "aste#r6: e emplean las estufas de calor seco+ en las -ue el aire caliente circula por el espacio -ue e1iste entre la doble pared+ transmitiendo as, el calor a los ob)etos -ue se encuentran en su interior. &os
microor*anismos se mueren por o1idación de sus estructuras previa des:idratación+ pudiéndose lle*ar a una li*era carbonización. "iempo re-uerido 7na :ora y media a dos :oras+ a una temperatura de 2J3 a 2K3LC. El tiempo se mide desde el momento en -ue se alcanzó la temperatura indicada y está condicionado por la cantidad de material y su distribución dentro de la estufa. El aire caliente no tiene muc:o poder de penetración+ por esta razón es -ue se re-uiere mayor temperatura y tiempo -ue con otros métodos. #plicación se utiliza preferentemente para esterilizar material de vidrio. Recordar -ue todo el material debe ir perfectamente acondicionado+ preferentemente envuelto en papel blanco de modo tal -ue una vez retirado de la estufa+ permanezca estéril :asta el momento de ser usado. %escripción de la estufa &a estufa de esterilización a seco es una ca)a metálica de paredes triples. &a pared interior es *eneralmente de acero ino1idable y presenta orificios para la libre circulación del aire caliente. &a pared intermedia encierra+ )unto con la e1terna+ el material aislante+ -ue puede ser lana de vidrio o amianto. &a fuente de calor es una resistencia eléctrica aun-ue también e1isten estufas a *as. Fiene provista de un termorre*ulador para *raduar la temperatura deseada. En la cara superior de la estufa e1isten orificios para permitir la salida de *ases y vapores+ pudiendo e1istir otro para la colocación de un termómetro en caso de no traerlo incorporado. En el interior posee re)illas metálicas de altura *raduable para acondicionar sobre ellas el material a esterilizar. 7so esterilización de material de vidrio y otros materiales termo resistentes -ue interese mantenerlos secos. "odo el material a esterilizar debe estar debidamente empa-uetado con papel de estraza o contenido dentro de ca)as metálicas. .-OR 39MEO ! El vapor de a*ua es uno de los métodos más eficaces para destruir microor*anismos y+ a i*ualdad de temperatura+ es muc:o más eficaz -ue el calor seco 4aire5. Day varias formas de emplear el calor :0medo. a6 -g#a a eb#llición* e colocan los ob)etos en el a*ua y se lleva a ebullición durante un tiempo no menor de -uince minutos. e utiliza para )erin*as+ a*u)as+ ampollas+ etc. Precaución &os *érmenes esporulados y ciertos virus no mueren con 26 minutos de ebullición. b6 (apor fl#ente* Consiste en colocar el material en el autoclave pero con la espita abierta. e utiliza para esterilizar sustancias -ue se descomponen por encima de los 233 LC. E)emplos medios de cultivo -ue contienen ciertos *l0cidos+ lec:e+ antibióticos+ etc. Este método puede complementarse con la "indalización 4se e1plica más adelante5. c6 (apor a presión* Es uno de los métodos más utilizados8 se emplea el autoclave para esterilizar material en *eneral y particularmente para medios de cultivo y otros compuestos -u,micos utilizados en el laboratorio de microbiolo*,a. %escripción del autoclave El autoclave consiste en un cilindro de bronce+ :orizontal o vertical+ con una tapa del mismo material -ue se apoya sobre una arandela de *oma y se cierra por pestillos o cerro)os -uedando :erméticamente cerrado. #demás+ posee en la parte superior una llave de vapor 4o espita5+ un manómetro y una válvula de se*uridad. En el interior del
autoclave se coloca un volumen de a*ua -ue se :ace :ervir+ ya sea por medio de -uemadores e1ternos -ue se encuentran en la parte inferior del aparato+ o mediante calentadores eléctricos de inmersión. e cierra lue*o la tapa+ se atornilla de)ando abierta la espita :asta -ue todo el aire del interior :aya sido desplazado por el vapor. %ebe de)arse -ue el vapor sal*a por la espita unos 6 minutos antes de cerrarla. Es muy importante -ue la eliminación del aire ya -ue+ de lo contrario+ la presión marcada por el manómetro indicará la temperatura a la -ue se encuentra la mezcla vapor aire en el interior+ -ue es menor a la esperada para el vapor saturado a esa presión. 7na vez -ue se :a cerrado la llave de vapor 4espita5+ comienza a elevarse la presión en el interior del autoclave8 usualmente se fi)a la válvula de se*uridad para -ue se abra a 26 libras/pul*ada=+ estas presiones corresponden a 226 y 2=2LC. Presión 4&ibras/pul*. =5 6 > 23 26 =3
"emperatura 4LC5 23> 223 226 2=2 2=J
&os e-uipos autoclaves son probados por los fabricantes :asta presiones de J3 libras/pul*.= o más+ pero para mayor se*uridad puede fi)arse una virola sobre la válvula de se*uridad para -ue no pueda ser desplazada accidentalmente+ pudiendo alcanzarse una presión mayor -ue la necesaria. Cuando el manómetro indica -ue se :a alcanzado la presión deseada+ se disminuye la entrada de *as+ y as, la llama del mec:ero+ ya -ue el calor necesario para mantener la presión es menor -ue el re-uerido para alcanzarla.
&a presión se mantiene durante unos =3 minutos momento en -ue se cierra el paso del *as. !o deben abrirse ni el autoclave ni la espita :asta -ue el manómetro indi-ue @3A 4cero5. i la presión se libera violentamente los l,-uidos en el interior del aparato :ierven tumultuosamente+ pudiendo a0n reventar los elementos de vidrio. 7na vez -ue el manómetro indi-ue -ue no :ay sobrepresión en el interior del aparato+ se abre primero la llave de vapor y lue*o de al*unos minutos se puede levantar la tapa del autoclave. !o se debe retirar el contenido inmediatamente
"iempo re-uerido usualmente+ para esterilizar medios de cultivo son necesarias temperaturas de 23>2=2LC durante 23 a 26 minutos. &imitaciones en función de la termolabilidad de ciertos materiales y componentes de medios de cultivo. #demás es inadecuado para sustancias -ue son inmiscibles en a*ua+ como las *rasas+ en las -ue la penetración del vapor es muy limitada. d6 'indalización* Es un procedimiento de calentamiento discontinuo creado por "yndall+ -ue permite esterilizar+ a ba)as temperaturas+ a-uellas sustancias -ue se alteran a altas temperaturas como al*unos az0cares. e puede realizar a bao Mar,a o autoclave abierta. &a temperatura utilizada es *eneralmente de J3K3 LC8 a esta temperatura se eliminan las formas ve*etativas pero no las esporuladas. Por esta razón es -ue después de un per,odo de calentamiento de ?3 minutos+ se de)a el material a ?3?>LC :asta el d,a si*uiente+ y se lo somete nuevamente al tratamiento inicial. Esta operación se repite después de =; :oras 4esterilización fraccionada5. &a discontinuidad de calor reposo permite a las bacterias desarrollar nuevas células ve*etativas a partir de sus esporas+ :asta -ue por 0ltimo+ en el tercer calentamiento+ ya no -uedarán formas esporuladas. e6 "aste#rización* %ebe su nombre a Pasteur -uien fue el primero en utilizar este método -ue actualmente presenta una serie de modificaciones. "iene muy poca aplicación en bacteriolo*,a y es usada especialmente en lec:e+ ya -ue destruye la totalidad de los *érmenes pató*enos y la mayor,a de la flora banal+ respetando la estructura f,sica y composición -u,mica de la misma 4otros e)emplos son la nata+ bebidas alco:ólicas+ mosto+ etc.5. Consiste en someter el l,-uido a un calentamiento rápido se*uido de un enfriamiento posterior. &a temperatura aplicada es de J?LC+ durante ?3 minutos con lo -ue se consi*ue la destrucción de las formas ve*etativas+ e1cepto las termófilas. E1iste una pasteurización denominada alta o instantánea+ en las -ue mantienen del*adas pel,culas de lec:e vaporizada sobre tubos o placas a >2LC+ con lo -ue se re-uiere una e1posición de sólo -uince se*undos #plicaciones 2. En investi*ación de laboratorios cient,ficos es empleado principalmente para eliminar microor*anismos de los elementos de traba)o+ evitando as, la contaminación de la muestra+ recipientes y material de traba)o. =. En la industria alimentaria se emplea para aumentar la vida 0til de los alimentos. &os alimentos esterilizados más comunes son los enlatados. ?. e usa también para la conservación y alar*amiento de la vida de libros+ muebles+ obras de arte y otros bienes. ;. En los :ospitales es empleado principalmente para eliminar a*entes pató*enos de los instrumentos -uir0r*icos reutilizables. 6. &os fabricantes de productos sanitarios esterilizan los productos para poder utilizarlo con asepsia en un procedimiento -uir0r*ico o de laboratorio por los profesionales sanitarios.
ME%I( %E C7&"IF( 7n medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes -ue permite el desarrollo de microor*anismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo+ se debe sembrar sobre el medio de cultivo ele*ido las muestras en las -ue los microor*anismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. &os microor*anismos son los seres más abundantes de la tierra+ pueden vivir en condiciones e1tremas de pD+ temperatura y tensión de o1,*eno+ colonizando una amplia diversidad de nic:os ecoló*icos. Entre los re-uerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono+ el o1,*eno+ nitró*eno+ dió1ido de carbono e :idró*eno. Muc:as bacterias sin embar*o necesitan del aporte e1tra de factores de crecimiento espec,ficos en forma de suero+ san*re y e1tracto de levadura entre otros.
.lasificación de los medios de c#lti$o
e*0n su ori*en a5 !#"7R#&E son los preparados a partir de sustancias naturales de ori*en animal o ve*etal como ser e1tractos de te)idos o infusiones y cuya composición -u,mica no se conoce e1actamente. b5 I!"N"IC( son los medios -ue contienen una composición -u,mica definida cualitativamente y cuantitativamente. c5 EMII!"N"IC( son los sintéticos a los -ue se les aaden factores de crecimiento ba)o una forma de un e1tracto or*ánico comple)o+ como por e)emplo e1tracto de levadura. e*0n su consistencia a5 &O7I%( se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa. b5 $&I%( se preparan aadiendo un a*ar a un medio l,-uido 4caldo5 a razón de 26*/litro. El a*ar es una sustancia inerte polisacárido 4:idrato de carbono5 -ue se e1trae de las al*as. Como esta sustancia no es di*erida por las bacterias no constituye nin*0n elemento nutritivo. Este con)unto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias+ Qprocesos -ue antes no eran posibles en medio l,-uidoQ. c5 EMI$&I%( contienen >+6 * de a*ar /litro de caldo. e utilizan para determinar la motilidad de las especies en estudio e*0n su composición # causa de los re-uerimientos -u,micos del mundo microbiano+ a veces es necesario a*re*ar o eliminar componentes -u,micos del medio. a5 C(M7!E ( 7!IFER#&E su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microor*anismos poco e1istentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por e)emplo a*ar com0n o caldo com0n. b5 E!RI7ECI%( están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede a*re*ar un *ran e1ceso de nutrientes como suplementos nutritivos+ por e)emplo san*re+ suero+ l,-uido asc,tico+ etc. e utiliza para microor*anismos -ue tienen *randes e1i*encias nutricionales. c5 E&EC"IF( son sólidos en los -ue la selectividad se consi*ue alterando las condiciones f,sicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes -u,micos espec,ficos con el fin de in:ibir el crecimiento de especies -u,micas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de un *rupo de microor*anismos e in:ibiendo el de otros. e utiliza para seleccionar y aislar microor*anismos a partir de poblaciones mi1tas. Por e)emplo #*ar saladomanitol o C:apman 4permite el crecimiento de ciertos estafilococos5.
d5 %IERE!CI#&E son medios de cultivos -ue nos permiten distin*uir entre varios *éneros y especies de microor*anismos. Por e)emplo si al medio se le :a aadido un carbo:idrato y un indicador y la bacteria -ue se cultiva es capaz de fermentar dic:o carbo:idrato+ se produce una acidificación del medio con el consi*uiente vira)e de color del indicador por el cambio de pD. El citrato de immons es un medio cuya 0nica fuente de carbono es el citrato sódico+ entonces en él solo crecerán las bacterias capaces de desarrollarse utilizando como 0nica fuente de carbono ese componente. # menudo la separación se basa en la diferencia de color de las colonias aisladas+ como en el a*ar con azul de metileno eosina -ue permite diferenciar E. coli 4colonias oscuras y de brillo metálico5 de Enterobacter aero*enes 4colonias rosadas de centro azul sin brillo5. Estos dos microor*anismos en a*ar nutritivo producen colonias de color *ris blancuzco. e5 %E E!RI7ECIMIE!"( son medios l,-uidos -ue contienen un a*ente -ue in:ibe las especies no deseadas pero -ue favorece el crecimiento irrestricto del a*ente infeccioso. El medio de Muller
"RO.EIMIEN'O E:"ERIMEN'- Materiales
Matraz Erlenmeyer. Mec:ero de 'unsen. Faso precipitado 'alanza anal,tica. Espátula "ubos de ensayo 2J1263mm. Pipeta
Reactivos
Peptona #*ua destilada "riptona lucosa E1tracto de levadura #*ar #*ar
#*ua peptonada • • • •
Pesar 3.26*r de Peptona y diluir en 263ml de #*ua destilada Calentar en el mec:ero 'unsen para disolver la peptona. Domo*enizar Repartir 3ml de medio en un matraz y ml en cada tubo de ensayo. Cubrir el matraz y los tubos con al*odón y papel craft.
Pesar 3.26 *r de Peptona y diluir
%iluir en 263ml de #*ua destilada y calentar para disolver
Repartir 3ml en un matraz+ y ml en cada tubo de ensayo
Cubrir el matraz y tubos de ensayo con al*odón y papel craft
#*ar Platecout 4#*ar para recuento total de bacterias5. •
• •
Pesar 3.>6*r de "riptona+ 3.26*r de lucosa+ 3.?K*r de E1tracto de levadura+ =.?*r de #*ar #*ar. Mezclar todo en 263ml de #*ua destilada. Calentar en el mec:ero 'unsen para disolver. Domo*enizar Cubrir el matraz con al*odón y papel craft.
Pesar 3.>6*r triptona+ 3.26 *lucosa+ 3.?K e1tracto levadura+ =.? *r #*ar #*ar
%iluir en 263ml de #*ua destilada y calentar para disolver
Cubrir el matraz con al*odón y papel craft
RE)+'-O)*
&ue*o de esperar varios d,as llevamos el #*ua Peptonada y el #*ar Platecout a la refri*eradora.
Estas muestras servirán para poder realizar el laboratorio !L3= donde utilizaremos muestra de carne y muestra de suelo+ identificando distintos microor*anismos.
O%)ER(-.IONE)*
Para la preparación del a*ua peptonada y #*ar platecout debemos traba)ar con el mec:ero encendido para crear un campo con condiciones de esterilidad.
&as proporciones de los reactivos a utilizar deben ser las adecuadas para obtener el resultado óptimo.
RE.OMEN-.IONE)* •
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#ntes de utilizar los materiales 4pipetas+ tubos+ asas+ etc.5 éstos deben de ser esterilizados correctamente en el laboratorio tomando siempre las precauciones. Es obli*atorio el uso del mandil en el laboratorio+ no se debe comer ni beber a fin de evitar contaminaciones. &a mesa del laboratorio debe estar libre para poder llevar a cabo la práctica. !o debemos acercar nuestra boca con los tubos de ensayo+ ya -ue :ay -ue recordar -ue :ay -ue evitar todo contacto de contaminación
%I%IO/R-FI
:ttp//cienciamicrobiolo*ica.blo*spot.com/=322/2=/microbiolo*iadefinicion.:tml :ttp//:tml.rincondelva*o.com/microbiolo*iaSconceptoycontenido.:tml :ttp//es.Ti9ipedia.or*/Ti9i/EsterilizaciUC?U'?nS4microbiolo*UC?U#%a5 Manual Práctico de Microbiología. R. Díaz, y colaboradores, 2 a edicin. !d. Masson, "arcelona, 1### Manual de bioseguridad $ara t%cnicos de laboratorio. &elia !. &oto y colaboradores, $ublicacin de la 'sociacin 'rgentina de Microbiología, 1##2 Manual de "ioseguridad en (aboratorio, )rganizacin Mundial de la *alud, 1#+3