Ministerio de educación
Jean franco Giono
Tatiana T atiana Gómez
Biología
Informe de laboratorio 3: Modelos de sondas de ADN
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Introducción
'na sonda de ADN es una molecula de ADN con una sola (ebra) ligada a un marcador identi*cable como una tintura +uorescente, -omo la sonda consta de una sola (ebra .uede ligarse a otro ADN /ue tenga una secuencia com.lementaria, -on el *n de (allar una secuencia es.eci*ca de ADN) los cientí*cos mezclan una sonda de muestra de ADN desconocida, 0a sonde solo se ligara a una muestra de ADN /ue contenga una secuencia de deseada, 1n esta acti2idad de laboratorio (aras un modelo del uso cientí*co de una sonda de ADN,
Antecedentes
'na sonda es un fragmento de ADN o raramente A4N5 de .e/ue6o tama6o normalmente entre &77 8 &777 bases5 usado en biología molecular como (erramienta .ara detectar la .resencia de ADN o A4N de secuencia com.lementaria .arecida o igual, 1n su uso) la sonda se une a la secuencia diana monocatenaria ADN&c o A4N5 mediante un mecanismo de (ibridación /ue forma una estructura bicatenaria) una de las (ebras .ertenece a la sonda) 8 la otra a la secuencia diana, 1sta unión se establece .or/ue tanto la sonda como la diana tienen secuencias en .arte o totalmente com.lementarias) form9ndose .ares de bases com.lementarias,
1n de*niti2a una sonda de ADN es un mtodo molecular /ue consta de una secuencia de ADN de un microorganismo de inters) /ue .uede ser utilizada .ara detectar un ADN (omólogo o secuencias de A4N, 1l ADN de la sonda se (ibrida con el ADN del organismo /ue se /uiere detectar) unión /ue como .uedes su.oner) se establece .or/ue ambas molculas tienen secuencias com.lementarias) form9ndose así .ares de bases com.lementarias, ;ara conocer si esto (a sucedido se utilizan marcadores f9ciles de detectar en un e/ui.o /ue mida el cambio, 1stos marcadores .ueden ser de 2arios ti.os, 0os m9s utilizados son los siguientes:
<4adioisóto.os: .ara marcar radiacti2amente la sonda se utilizan nucleótidos /ue contienen alguno de sus 9tomos un isóto.o radiacti2o, 1stos marcadores son mu8 sensibles) .ero entra6an ciertos riesgos .ara la salud,
em.lo .ara detectar la .resencia de .atógenos 8 de organismos modi*cados genticamente, Inde.endientemente de la naturaleza de la sonda utilizada ADN o A4N5) las (ibridaciones efectuadas sobre 9cidos nucleicos inmo2ilizados en membranas o in situ) ser9n de ti.o ?out(ern cuando se use ADN como diana a detectar 8 de ti.o nort(ern cuando la diana a detectar sea ma8oritariamente de A4N, ?out(ern blot) (ibridación ?out(ern o) sim.lemente) ?out(ern es un mtodo de biología molecular /ue .ermite detectar la .resencia de una secuencia de
ADN en una mezcla com.le>a de este 9cido nucleico, ;ara ello) em.lea la tcnica de electroforesis en gel de agarosa con el *n de se.arar los fragmentos de ADN de acuerdo a su longitud 8) des.us) una transferencia a una membrana en la cual se efect@a la (ibridación de la sonda, ?u nombre .rocede del a.ellido de su in2entor) un biólogo ingls llamado 1din ?out(ern, Nort(ern blot es una tcnica de detección de molculas de 9cido ribonucleico A4N5 de una secuencia dada dentro de una mezcla com.le>a .or e>em.lo) un A4N mensa>ero .ara un ..tido dado en una e=tracción de A4N total5, ;ara ello) se toma la mezcla de A4N 8 se somete a una electroforesis en gel a *n de se.arar los fragmentos en base a su tama6o, Tras esto) se trans*ere el contenido del gel) 8a resuelto) a una membrana cargada .ositi2amente en la cual se efect@a la (ibridación de una sonda molecular marcada radiacti2a o /uímicamente, 1l nombre de la tcnica deri2a de la tcnica anterior, 1l nort(ern blot fue desarrollado en &CC .or James Aline) Da2id em. 8 George ?tarE en la 'ni2ersidad de ?tanford,
Formulación de la (i.ótesis -ómo a8udan la sondas de ADN a identi*car indi2iduosH i.ótesis eri*car de formar .ractica /ue las sondas de ADN son im.ortantes .ara a8udar a identi*car a un indi2iduo a tra2s de las bases nitrogenadas) buscando la secuencia com.lementaria de la sonda de ADN,
?elección 8 organización de datos •
;rocedimiento &5 A/uí .uede 2er las secuencias de ADN de cinco indi2iduos, -o.ie el n@mero de cada indi2iduo 8 su secuencia de ADN en .a.el cuadriculado) colocando cada letra de la secuencia de ADN en un cuadro, De>e cinco líneas en blanco entre una secuencia 8 la siguiente, "5 1n el .a.el cuadriculado) co.ie la siguiente secuencia de una onda de ADN de seis bases) como (izo con las secuencias de ADN en el .aso & :T - - G A G , 35 0lene el cuadrado /ue sigue a la secuencia de la sonda con un l9.iz o marcador de color .ara re.resentar la tintura +uorescente ligada a la sonda, %5 4ecorte la tira del .a.el cuadriculado /ue re.resenta la sonda 8 su tintura +uorescente K5 Mue2a la sonda sobre la secuencia de ADN de cada indi2iduo, Mientras lo (ace) bus/ue las
.artes de la secuencia de ADN /ue sean com.lementarias a la secuencia de la sonda, 5 1ncierre en un circulo la .arte de la secuencia de ADN de cual/uier indi2iduo /ue sea com.lementaria a la secuencia de la sonda de ADN, C5 Anote la cantidad de indi2iduos /ue fueron identi*cados .or la sonda de ADN, #5 1li>a uno de los cinco indi2iduos 8 cree una nue2a son de ADN /ue identi*/ue solo a ese indi2iduo, 1scriba la secuencia de ADN de la nue2a sonda como en el .aso " , ?u nue2a sonda no debe tener) necesariamente) una longitud de seis bases, 5 4ecorte su nue2a sonda e interc9mbiela .or la /ue escribió un com.a6ero$a, &75 -on la sonda /ue recibió) re.ita los .asos K 8 .ara identi*car al indi2iduo /ue seleccionó su com.a6ero o com.a6era &&5 0as enzimas de restricción di2iden el ADN en secuencias de bases es.eci*cas, -ree un modelo de una sonda de ADN 8 una enzima de restricción, 'se sus modelos .ara mostrar cómo .odrían combinarse las sondas de ADN 8 las enzimas de restricción .ara crear las (uellas de ADN de los cinco indi2iduos de este laboratorio,
Indi2iduo & A T - T - G A G A - T G A T A G G - T -TAAG-T-GAG Indi2iduo " A T T G G - - A - T - G A G A - G T T GG--AAGT--G Indi2iduo 3 A T G A - - A T G G - - A G G - T - G AG-TGATGA-G Indi2iduo % A T A T G G - - A T T G - T - G A G T GG--AGAT--G Indi2iduo K A - T - G A G G T - - - T - G A G T G T A G G - T - A T - G 4ecolección de datos a5 Lu secuencia de ADN es com.lementaria a la secuencia de la sonda /ue muestra el .aso "H 4: 0a secuencia com.lementario a la secuencia de la sonda /ue muestra el .aso " T - - G A G5 es A G G - T b5 Lue indi2iduos5 fueron5 identi*cadoss5 .or la sonda de ADN del .asoH 4: 0os indi2iduos /ue fueron identi*cados fueron los indi2iduos &3K c5 1s .osible /ue la misma sonda de ADN identi*/ue a mas de un indi2iduoH 1=.li/ue su res.uesta 4: Lue una misma sonda de ADN identi*/ue a mas de un indi2iduo es .osible debido a /ue esta sonda /ue la com.onen bases nitrogenadas .ueden re.etirse en distintos indi2iduos identi*c9ndolos con una misma sonda a todos,
1sto es demostrado .or el traba>o .ractico el cual con una misma sonda identi*ca 3 indi2iduos,
d5 -ree /ue las sondas de ADN con secuencias mas largas o cortas tendrían ma8or .robabilidad de identi*car a un solo indi2iduoH 1=.li/ue su res.uesta 4: 0as sondas de ADN con secuencias mas largas tienen ma8or .robabilidad de identi*car a un solo indi2iduo debido a /ue com.renden mas bases nitrogenas .roduciendo /ue esto abar/ue marco cantidad del indi2iduo ) .or el contrario mientras mas cortas las sondas menor .robabilidad tienen de identi*car a un solo indi2iduo 8a /ue .or su .oca cantidad,
-onclusiones Des.us de (aber desarrollado este traba>o .ractico se .uede concluir /ue .ara identi*car a un indi2iduo con una sonda de ADN estas son .arte fundamental en su reconocimiento .uesto /ue lo caracterizan a tra2s las bases nitrogenas 8 las secuencias com.lementarias /ue forman el ADN del indi2iduo, 1n el desarrollo de este informe se .udieron obtener los resultados 8a e=.uestos a los cuales se llego su.erando diferentes obst9culos tanto en el 9mbito .ractico como el teórico los cuales se lograron su.erar a tra2s de una me>or com.resión de los .rocedimientos 8 del an9lisis de los resultados,
ndice &, Introducción ", Antecedentes 3, Formulación de la .regunta %, i.ótesis K, ?elección 8 organización de datos , 4ecolección de datos C, conclusiones
