informe 5 organizacion subcelular

Universidad Andrés Bello Facultad de Ciencias de la Salud Departamento de Ciencias Biológicas Laboratorio de Biología Celular BIO 035

Trabajo Práctico n° 5 “Organización Subcelular”

Introducción Se cree que la vida en la tierra hace mucho tiempo comenzó debido a una integración espontanea de moléculas, creando lo que actualmente conocemos como la unidad básica, estructural y funcional de todos los seres vivos llamada célula célula.. Los precur precursor sores es en adopta adoptarr este este concep concepto to como como tal fueron fueron célula células s simples y sencillas conocidas como procariontes (bacterias), gracias a estos se dio paso a formas más complejas de vida como es el caso de las células eucariontas, que a diferencia de las primeras primeras poseen núcleo núcleo manteniendo así  el material genético aislado de otros compartimientos celulares. Además la célula célula eucari eucariont onta a contie contiene ne una gran gran varied variedad ad de organe organelos los para para realiz realizar ar funcio funciones nes especí específic ficas as por ejemp ejemplo lo mitoco mitocondr ndrias ias (prod (producc ucción ión de energí energía), a), cloroplastos (fotosíntesis), retículo endoplasmatico rugoso (síntesis proteínas) y

liso (síntesis de lípidos), lisosomas (digestión celular), peroxisoma (degradación peróxido de hidrogeno) entre otros. A través del tiempo, la microscopia subcelular dio abasto para la visualización de estructuras en forma más detallada y concisa, pero no para definir su funcionalidad. Debido a esta inquietud se adoptaron técnicas que pudieran permitir el aislamiento de estos componentes celulares, obteniendo así una función específica para cada organelo y comprendiendo como funciona esta gran maquinaria llamada célula. Una de las técnicas más usadas es el fraccionamiento celular que consiste en dos etapas: homogeneización y fraccionamiento propiamente tal. La homogeneización es la ruptura de la célula en sus componentes más pequeños y el fraccionamiento una serie de centrifugaciones sucesivas obteniéndose una sedimentación de cuerpos celulares, dependiendo de su densidad.(1)

Hipótesis 

En el primer precipitado de la centrifugación, no encontraremos solamente núcleos celulares.



Al ser rotas las células, no todos los organelos celulares conservarán intactas sus propiedades bioquímicas originales.(2)

Objetivos Objetivo general: Conocer y comprender correctamente el fraccionamiento subcelular a través de las técnicas empleadas en este método tales como la homogeneización y centrifugación. 

Descubrir las técnicas de homogeneizado existentes.



Entender los principios en los que se basa la técnica de centrifugación.



Reconocer el concepto de moléculas marcadoras y comprender su utilidad para la evaluación del fraccionamiento celular



Lograr manipular de manera correcta el objetivo de inmersión del microscopio y además comprara una muestra fresca de un a fijada. Materiales y métodos

Resultados Experimento n° 1

Pellet + 1 ml de buffet (fracción nuclear)

P1 



P2



Sobrenadante de p1, el cual se vuelve a

Sobrenadante S1 (fracción  

Pellet + 1ml buffet (fracción P2  mitocondrial) Experimento n° 2 Suspensión de núcleos visto a microscopio a 40X

Suspensión de núcleos con azul de tripan visto en el microscopio a 40X

Fracción enriquecida en mitocondrias P2 vista en el microscopio a 40X

Fracción enriquecida en mitocondrias P2 más azul de tripán vista en el microscopio a 40X

Experimento n° 3

Rotulado

Tubo

-

Blanco

P1

Fracción nuclear Fracción mitocondrial Fracción microsomal

P2 S1

Succinato 0.1 M 1 ml

Azul de metileno 2 gotas

Agua microsomal 1 mL

2 mL

1ml

2 gotas

1 mL

2 mL

1ml

2 gotas

1 mL

2 mL

1ml

2 gotas

1 mL

2 mL

 Tubos colocados a un baño termoregulado a 37° C

En el tubo blanco no se presentación cambios. En el tubo P1 se presento una decoloración. En el tubo P2 cambio el color celeste a un celeste verde agua. En el tubo S1 cambio el tono del celeste a uno mas claro. Discusión

Vaselina

Conclusión

Bibliografía

(1) guia