Ma M akala kalah h Teknik Teknik La L abor ator ium
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (T H I N LAYER CHR OMATO MATOGR APHY AP HY )
KELOMPOK II ANDI IRWAN GUNAWAN
(H311 15 511)
RISKAWATI
(H311 15 021)
SALMIYAH
(H311 14 032)
YOGIE IMANUEL PUTRA B
(H311 15 309)
DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 2017
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kami panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa karena atas Ridho-Nya lah makalah
ini dapat terselesaikan. Tidak lupa pula kami
ucapkan banyak terima kasih atas bantuan dari pihak yang telah berkontribusi dalam memberikan sumbangan baik materi maupun pikirannya. Dalam penyusunan makalah ini, kami bermaksud untuk memaparkan mengenai kromatografi lapis tipis baik manfaat maupun metodenya untuk memenuhi tugas dari dosen, sebagai salah satu syarat penilaian mata kuliah teknik Laboratorium. Harapan kami semoga makalah ini dapat bermanfaat dan dapat dijadikan salah satu referensi mengenai materi terkait. Kritik dan saran membangun juga sangat kami harapkan.
Makassar, 30 Agustus 2017
Penyusun
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR .....................................................................................
i
DAFTAR ISI ....................................................................................................
ii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................
1
A. Latar Belakang ................................................................................... B. Rumusan Masalah .............................................................................. C. Tujuan ................................................................................................ BAB II PEMBAHASAN ................................................................................. A. Pengertian .......................................................................................... B. Teknik kromatografi lapis tipis .......................................................... C. Cara pendeteksian bercak pada kromatografi lapis tipis ..................... D. Kelebihan dan kekurangan kromatografi lapis tipis .......................... E. Faktor yang memengaruhi analisis kromatografi lapis tipis .............. F. Aplikasi kromatografi lapis tipis ....................................................... BAB III PENUTUP ......................................................................................... A. Kesimpulan ........................................................................................ B. Saran................................................................................................... DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
iii
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Kromatografi ialah suatu metode pemisahan yang didasarkan pada perbedaan kecepatan migrasi dan merupakan suatu metode analisis yang banyak mengalami perkembangan dewasa ini. Selain itu dengan teknik kromatografi, suatu senyawa dapat ditentukan secara kualitatif maupun kuantitatif. Kromatografi digunakan untuk pertama kalinya pada tahun 1903 oleh seorang ahli botani Rusia M.S.CVET (di Inggriskan TSWEET) untuk memisahkan dan mengisolasi zat warna daun tumbuh-tumbuhan. Salah satu teknik kromatografi yang akan dibahas yaitu tentang kromatografi Lapis Tipis (KLT). KLT merupakan kromatografi yang tetap banyak digunakan dan juga banyak mengalami pengembangan, karena pengerjaannya mudah dan sederhana serta biayanya murah. Pemisahan dengan teknik ini dijalankan dengan mengadakan manipulasi atas dasar perbedaan sifat-sifat fisik dari zat-zat yang menyusun suatu campuran. Karena perbedaan satu atau lebih dari sifat-sifat yang dimiliki, maka campuran berbagai zat dapat dipisahkan dalam suatu sistem yang bergerak secara kontinyu, sehingga dapat dikatakan bahwa tidak ada dua zat yang mempunyai sifat-sifat yang sama. Oleh karena itu, pemisahan tersebut dapat dilakukan. B. Rumusan Masalah
1. Apa yang dimaksud dengan kromatografi lapis tipis ? 2. Bagaimana teknik kromatografi lapis tipis? 3. Bagaimana cara mendeteksi bercak pada kromatografi lapis tipis ? 4. Apa kelebihan dan kekurangan kromatografi lapis tipis ? 5. Faktor apa saja yang mempengaruhi analisis kromatografi lapis tipis? 6. Bagaimana aplikasi kromatografi lapis tipis? C. Tujuan
1. Untuk mengetahui pengertian dari kromatografi lapis tipis. 2. Untuk mengetahui teknik kromatografi lapis tipis.
3. Untuk mengetahui cara mendeteksi bercak pada plat. 4. Untuk mengetahui kelebihan dan kekurangan kromatografi lapis tipis. 5. Untuk mengetahui faktor yang mempengaruhi analisis kromatografi lapis tipis. 6. Untuk mengetahui aplikasi kromatografi lapis tipis.
BAB II PEMBAHASAN
A. Pengertian Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Teknik ini dikembangkan tahun 1938 oleh Ismailoff dan Schraiber. Kromatografi lapis tipis adalah suatu teknik pemisahan komponen-komponen campuran senyawa-senyawa yang melibatkan partisi suatu senyawa di antara padatan penyerap (adsorbent , fasa diam) yang dilapiskan pada plat kaca atau plastik kaku dengan suatu pelarut (fasa gerak) yang mengalir melewati adsorbent (padatan penyerap). KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa
yang
sifatnya
hidrofobik
seperti
lipida-lipida
dan
hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara kromatografi, dan isolasi senyawa murni skala kecil. Kromatografi lapis tipis (TLC), juga dikenal sebagai kromatografi planar adalah metode yang sangat berharga yang digunakan dalam kimia dan biokimia, hampir sama dengan HPLC meski kedua metode ini penerapannya berbeda, tetapi prinsip pemisahan dan sifat fasa tetap sama. Fase diamnya (Stationary Phase) berbentuk lapisan tipis yang melekat pada gelas/kaca, plastik, aluminium. Sedangkan fase geraknya (Mobile Phase) berupa cairan atau campuran cairan, biasanya pelarut organi dan kadangkadang juga air. Fase diam yang berupa lapisan tipis ini dapat dibuat dengan membentangkan /meratakan fase diam (adsorbent=penjerap=sorbent) diatas plat/lempeng kaca plastik ataupun aluminium.
B. Teknik Kromatografi Lapis Tipis
Teknik standar dalam melaksanakan pemisahan dengan kromatografi lapis tipis adalah pertama kali lapisan tipis adsorben dibuat pada permukaan plat kaca atau plat lain, misalnya berukuran 5×20 cm. Tebal lapisan adsorben tersebut dapat bervariasi, tergantung penggunaannya. Sering digunakan
ketebalan 250 μ. Larutan campuran senyawa yang akan dipisahkan diteteskan pada kira-kira 1,5 cm dari bagian bawah plat tersebut dengan menggunakan pipiet mikro atau syringe. Zat pelarut yang terdapat pada sampel yang diteteskan tersebut kemudian diuapkan lebih dahulu. Selanjutnya plat kromatografi tersebut dikembangkan dengan mencelupkannya pada tangki yang berisi campuran zat pelarut (Solvent System). Tinggi permukaan zat pelarut dalam tangki harus lebih rendah dari letak tetesan sampel pada plat kromatografi (kurang dari 1,5 cm). Dengan pengembangan tersebut masingmasing komponen senyawa dalam sampel akan bergerak ke atas dengan kecepatan yang berbeda. Perbedaan kecepatan gerakan ini merupakan akibat dari terjadinya pengaruh proses dengan kromatografi lapis tipis, mulai pemilihan adsorben sampai identifikasi masing-masing komponen yang telah terpisah. Pada KLT, fasa diam berupa plat yang biasanya diisi dengan silica gel. Sebuah garis pensil digambar dekat bagian bawah fasa diam dan setetes larutan sampel ditempatkan di atasnya. Sampel ditotol dengan bantuan pipa kapiler. Garis pada fasa diam berguna untuk menunjukkan posisi asli sampel. Pembuatan garis harus menggunakan pensil karena jika semua ini dilakukan dengan tinta, pewarna dari tinta juga akan bergerak sebagai kromatogram berkembang. Ketika titik campuran kering, fasa diam diletakkan berdiri dalam gelas tertutup yang telah berisi fasa gerak dengan posisi fasa gerak di bawah garis. Digunakan gelas tertutup untuk memastikan bahwa suasana dalam gelas jenuh dengan uap pelarut. Pelarut (fasa gerak) perlahan-lahan bergerak naik. Komponen-komponen yang berbeda dari campuran berjalanan pada tingkat yang berbeda dan campuran dipisahkan memiliki warna yang berbeda. Diagram menunjukkan plat setelah pelarut telah bergerak sekitar setengah jalan. Pelarut diperbolehkan untuk naik hingga hampir mencapai bagian atas plat yang akan memberikan pemisahan maksimal dari komponen-komponen pewarna untuk kombinasi tertentu dari pelarut dan fase diam.
Gambar 1. Proses elusi sampel Kecepatan senyawa-senyawa sebagai komponen-komponen contoh memanjat pelat dibandingkan dengan kecepatan pelarut yang mendahuluinya. Harga perbandingan ini dikenal sebagai harga Rf , dan didefisikan sebagai:
dengan titk asal adalah titik tengah noda contoh yang terdapat pada pelat KLT.
Pada kondisi tertentu (adsorbent , pelarut, ketebalan lapisan, temperatur, dan kelembaban), harga Rf merupakan sifat karakteristik dari suatu senyawa.
Adapun macam-macam adsorban untuk kromatografi lapis tipis yaitu: a. Silica gel: Asam-asam amino, alkaloid, gula, asam lemak, lemak, minyak esensial, anion dan kation anargonik, steroid, terpanoid. b. Alumina: Alkaloid, zat warna bahan makanan, phenol, steroid, steroid, vitamin, carotan, asam-asam amino. c. Kieselguhr: Gula, oligosaccharida, asam berbasa dua, asam lemak, trigliserida, asam amino, steroid. d. Celite: Steroid, kation anorganik e. Tepung selulosa: Asam-asam amino, zat warna bahan makanan, alkaloid, nukleotida. f. Pati untuk: Asam amino g. Tepung
poliamida:
Anthocyanin,
asam-asam
aromatik,
antioxidant,
flavonoid, protein h. Sephadex: Asam amino, protein.
C. Pendeteksian bercak / visualisasi
Cara mengamati bercak pada TLC dapat digolongkan menjadi dua : a. Menyemprotkan pereaksi penanda. Banyak pereaksi-pereaksi yang digunakan dapat dilihat dalam literature dan dijual dipasaran (niaga). Contoh pereaksi semprot yang umum untuk senyawa organik adalah asam sulfat dalam metanol, selanjutnya bercak dipanaskan di dalam oven, sebaiknya digunakan oven yang ada jendela kacanya sehingga dapat diikuti perubahan bercak selama pemanasan menjadi bercak warna hitam. Pada dasarnya adalah reaksi oksidasi pada senyawa organic oleh asam sulfat. Pereaksi lain adalah dengan disemprot dengan larutan lodium dan paling mudah adalah dengan memasukkan plat kedalam bejana yang berisi uap lodium (kristal lodium diletakkan dalam bejana, tidak merusak 75% senyawa). b. Tidak merusak komponen/ senyawa di bercak. Untuk senyawa berwarna atau berpendar
dibawah
lampu
UV
(berfluoresensi)
tidak
ada
masalah
menggunakan silika tanpa tambahan zat berpendar. Sedang untuk senyawa yang tidak berpendar dibawah lampu UV digunakan fase diam dengan tambahan zat berpendar.
Tabel 1. Macam pereaksi warna / penanda dan penggunaannya
D. Kelebihan dan Kekurangan
Beberapa kelebihan KLT yaitu: 1. KLT lebih banyak digunakan untuk tujuan analisis. 2. Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna, fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet. 3. Dapat dilakukan elusi secara mekanik (ascending), menurun (descending), atau dengan cara elusi 2 dimensi. 4. Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak. 5. Hanya membutuhkan sedikit pelarut. 6. Biaya yang dibutuhkan terjangkau. 7. Jumlah perlengkapan sedikit. 8. Preparasi sample yang mudah. 9. Dapat untuk memisahkan senyawa hidrofobik (lipid dan hidrokarbon) yang dengan metode kertas tidak bisa. Adapun kekurangan KLT yaitu:
1. Butuh ketekunan dan kesabaran yang ekstra untuk mendapatkan bercak/noda yang diharapkan. 2. Butuh sistem trial and eror untuk menentukan sistem eluen yang cocok. 3. Memerlukan waktu yang cukup lama jika dilakukan secara tidak tekun.
E. Faktor-faktor yang memengaruhi Kromatografi Lapis Tipis
Faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam kromatografi lapisan tipis yang juga mempengaruhi harga Rf adalah : 1. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan. 2. Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya Biasanya aktifitas dicapai dengan pemanasan dalam oven, hal ini akan mengeringkan molekul-molekul air yang menempati pusat-pusat serapan dari penyerap. Perbedaan penyerap akan memberikan perbedaan yang besar terhadap harga Rf meskipun menggunakan fase bergerak dan zat terlarut yang sama tetapi hasil akan dapat diulang dengan hasil yang sama, jika menggunakan penyerap yang sama, ukuran partikel tetap dan jika pengikat (kalau ada) dicampur hingga homogen. 3. Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap Pada prakteknya tebal lapisan tidak dapat dilihat pengaruhnya, tetapi perlu diusahakan tebal lapisan yang rata. Ketidakrataan akan menyebabkan aliran pelarut menjadi tak rata pula dalam daerah yang kecil dari plat. 4. Pelarut (dan derajat kemurniannya) fase bergerak Kemurnian dari pelarut yang digunakan sebagai fase bergerak dalam kromatografi lapisan tipis adalah sangat penting dan bila campuran pelarut digunakan maka perbandingan yang dipakai harus betul-betul diperhatikan. 5. Derajat kejenuhan dan uap dalam bejana pengembangan yang digunakan. 6. Teknik percobaan Arah pelarut bergerak di atas plat. Metoda aliran penaikan yang hanya diperhatikan, karena cara ini yang paling umum meskipun teknik aliran penurunan dan mendatar juga digunakan. 7. Jumlah cuplikan yang digunakan
Penetesan cuplikan dalam jumlah yang berlebihan memberikan hasil penyebaran noda-noda dengan kemungkinan terbentuknya ekor dan efek tak kesetimbangan lainnya, hingga akan mengakibatkan kesalahan-kesalahan pada harga-harga Rf. 8. Suhu Pemisahan-pemisahan sebaiknya dikerjakan pada suhu tetap, hal ini terutama untuk mencegah perubahan-perubahan dalam komposisi pelarut yang disebabkan oleh penguapan atau perubahan-perubahan fase. 9. Kesetimbangan Ternyata bahwa kesetimbangan dalam lapisan tipis lebih penting dalam kromatografi kertas, hingga perlu mengusahakan atmosfer dalam bejana jenuh dengan uap pelarut. Suatu gejala bila atmosfer dalam bejana tidak jenuh dengan uap pelarut, bila digunakan pelarut campuran, akan terjadi pengembangan dengan permukaan pelarut yang berbentuk cekung dan fase bergerak lebih cepat pada bagian tepi-tepi dan keadaan ini harus dicegah.
F. Penggunaan umum Kromatografi Lapis Tinggi
Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan banyaknya komponen dalam campuran, identifikasi senyawa, memantau berjalannya suatu reaksi, menentukan efektivitas pemurnian, menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta memantau kromatografi kolom, melakukan screening sampel untuk obat.
BAB III PENUTUP
A. Kesimpulan
Kromatografi Lapis Tipis Yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng gelas atau alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau bahan serbuk lainnya. Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode pilihan pertama pada pemisahan dengan kromatografi. B. Saran
Penulis menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu penulis sangat mengharapkan saran dan kritik yang sifatnya membangun agar dalam pembuatan makalah selanjutnya bias lebih baik lagi, atas perhatiannya penulis ucapkan terimakasih.
DAFTAR PUSTAKA
Adnan, M., 1997, Teknik Kromatografi untuk Analisis Bahan Makanan, Andi, Yogyakarta. Rompas, R.A., Edy, H.J., dan Yudistira, A., 2015, Isolasi dan Identifikasi Flavonoid dalam Daun Lamun (Syringodium Isoetifolium), 59-63. Rouessac, F., and Rouessac, A., 2007, Chemical Analysis Modern Instrumentation Methods and Techniques, John Wiley and Sons, France. Zenta, F., 2011, Teknik dalam Laboratorium Kimia Organik, Universitas Hasanuddin.
