I.
JUDUL
II.
TUJUAN : 1. Memahami Memahami prosed prosedur ur pemerik pemeriksaan saan bakeri bakeri Enero Eneroba!eri ba!eria!eae a!eae ". Mamp Mampu u men# men#iso iso$a $asi si dan dan men# men#id iden eni i%ik %ikasi asi bak baker eri&b i&bak ake eri ri ke$o ke$omp mpok ok
III.
: IDENTIFIKASI BAKTERI ENTEROBACTERIACEAE ENTEROBACTERIACEAE
Bakeria!eae DASAR TEORI : Mikrob Mikrobio$ io$o#i o#i ada$ah ada$ah sau i$mu i$mu 'an# 'an# mempe$ mempe$a(ar a(arii kehidu kehidupan pan dan mikrob mikrobaa
or#an or#anism ismee hidup hidup 'an# 'an# beruku berukuran ran mikro mikro aau aau san#a san#a renik. renik. Mikroo Mikroor# r#ani anisme sme ini san#aera kaiann'a den#a kehidupan) baik 'an# berman%aa aau meru#ikan makh$uk hidup 'an# $ainn'a. Ada dianara mereka 'an# hidup da$am media a#ar 'an# dapa men'ebabk men'ebabkan an pen'aki pen'aki aaupun aaupun men#unun# men#unun#kan kan misa$n'a misa$n'a da$am proses pembuan pembuan an##ur) an##ur) ke(u) 'o#ur) produksi produksi penisi$in penisi$in dan proses pembuan#a pembuan#an n $imbah $imbah *Toror *Torora) a) 1++" , ""-. nuk nuk mene$a mene$aah ah bakeri bakeri di $abora $aboraor orium ium kia kia harus harus dapa dapa menumb menumbuhk uhkan an bakeri da$am biakan murni.nuk me$akukan ha$ iu) harus$ah men#eri (enis&(enis nur nurie ien n 'an# 'an# dis' dis'ara arak kan an o$eh o$eh bak bakeri eri dan dan (u#a (u#a ma!am ma!am $in# $in#kn kn#a #an n %isik %isik 'an# 'an# men'ediakan kondisi opimum ba#i perumbuhann'a. Ku$ur bakeri unuk keper$uan 'an# berman%aa) pada umun'a di$akukan den#an biakan murni) biakan murni han'a men#an men#andun dun# # sau sau (enis) (enis) unuk unuk men#is men#iso$a o$asi si biakan biakan murni) murni) umumn' umumn'aa di#una di#unakan kan " prosedur
'aiu!a/an
den#an
#oresan
dan
meode
a#ar
uan#
Biakan ada$ah medium 'an# men#andun# or#anism hidup. Medium iu men#andun# 0a&0a makanan unuk bakeri. Berba#ai resep ramuan unuk membua media e$ah dibua unuk memun#kinkan unuk umbuhan umbuhan (enis&(enis erenu. Medium Me dium pi$ihan dan di%erensia$ berman%aa unuk memisahka berba#ai (enis. *D/i(osepuro) 1++S'ara 'an# harus dipenuhi unuk media biakan. a. Men#andun# Men#andun# nurisi nurisi 'an# 'an# di buuhka buuhkan n o$eh mikroo mikroor#an r#anisme isme 'an# berkemban# berkemban#.. b. Memi$iki ke$embaban opimum ba#i perumbha mikroor#anisme. mikroor#anisme. !. Men#andun# Men#andun# oksi#en oksi#en *ku$ur *ku$ur bakeri bakeri aerobaerob- dan dan p2 p2 sesuai. sesuai. d. 2arus 2arus bebas bebas dari dari mikro mikroba ba $ain $ain dan dan seri seri$. $.
Ada i#a (enis media pen#emban#biakan berdasarkan konsenrasin'a anara $ain, a. Medi Mediaa pada pada) ) 'ai 'aiu u medi mediaa berb berben enu uk k pada pada 'an# 'an# men# men#an andu dun# n# a#ar a#ar 1&1) 1&1)34 34 misa$n'a nurien a#ar. b. Media !air 'aiu media 'an# berbenuk !air 'an# idak men#andun# a#ar) misa$n'a nurien broh.
!. Media Media semi semi pada pada) ) 'ai 'aiu u medi mediaa 'an# 'an# berben berbenu uk k pada pada pada pada suhu din#i din#in) n) dan berbenuk !air bi$a suhu panas) misa$n'a media SIM *media 'an# di#unakan unuk u(i produksi su$%ur) indio$) moi$ias. Mikroor#anisme seperi bakeri 'an# erdapa di ikan aau $in#kun#an budida'a) umumn'a erdapa da$am popu$asi !ampuran. nuk keper$uan ideni%ikasi diper$ukan suau biakan murni sehin##a eknik iso$asi mu$ak diper$ukan. Mikroor#anisme 'an# e$ah diiso$asi ini be$um dapa dienukan si%a aau (enis bakerin'a. 5en#amaan men#enai benuk mor%o$o#i) si%a #ram) dan po$a penaaan se$ dapa dikeahui den#an !ara pe/arnaan #ram. Akan eapi) unuk men#eahui (enis bakeri idak !ukup han'a den#an den#an meode meode pe/arn pe/arnaan aan #ram. #ram. Seperi Seperi ha$n'a ha$n'a mikroo mikroor# r#ani anisme sme $ainn' $ainn'aa baker bakerii memperahankan kehidupann'a me$a$ui pen'esuaian diri erhadap $in#kun#an demi ke$an( ke$an(uan uan #eneras #enerasin' in'a. a. nuk nuk iu) iu) bakeri bakeri mampu mampu meromb merombak ak dan men##u men##unak nakan an bahan kimia *da$am benuk $aruan- 'an# ada di $inkun#ann'a seba#ai sumber ener#i dan 0a pemban pemban#un #unan. an. Seiap Seiap (enis (enis spesies spesies bakeri bakeri mempun mempun'ai 'ai karak karakeri erisasi sasi si%a si%a biokimia dan %isio$o#i 'an# khas. Si%a&si%a ini dapa di(adikan a!uan da$am proses ideni%ikasi. O$eh karena iu da$am prakikum ka$i ini di$akukan u(i en0imaik unuk men#eahui karakerisik si%a dari bakeri. *Torora) 1++" , ""-. nuk me$iha reaksi bakeri erhadap media 'an# di#unakan ) dapa diadakan beberapa u(i 'aiu u(i biokimia. (i biokimia ada$ah pen#u(ian $aruan aau 0a&0a kimia dari bahan&bahan dan proses&proses 'an# er(adi da$am ubuh makh$uk hidup) seba#ai upa'a unuk memahami proses kehidupan dari sisi kimia *6ehnin#er) 1++3-. Biokimia beru(uan unuk memahami ba#aimana ineraksi biomo$eku$ sau den#an $ainn'a 'an# memba/a si%a&si%a kehidupan ini. Be$um pernah da$am pen#amaan $o#ika mo$eku$ se$ hidup) kia menemukan suau pe$an##aran erhadap hukum&hukum 'an# 'an# e$ah e$ah dike dikena na$) $) seiri seirin# n# den# den#an an iu iu pu$a pu$a)) kia kia be$u be$um m pern pernah ah meme memer$ r$uk ukan an pende%inisian hukum baru. Mesin or#anik $unak se$ hidup ber%un#si di da$am keran#ka keran#ka hukum&hukum hukum&hukum 'an# sama men#aur mesin buaan buaan manusia. Akan Akan eapi) reaksi&reaksi kimia dan proses pen#auran se$ e$ah ma(u demikian pesa) me$ampaui kemampuan ker(a mesin buaan manusia *6ehnin#er) 1++3-. Ciri Ciri biok biokim imia ia meru merupa paka kan n kri krieri eriaa 'an# 'an# ama ama pen penin in# # di da$a da$am m iden ideni i%ik %ikasi asi spesim spesimen en baker bakerii 'an# 'an# ak dikena dikena$$ karena karena se!ara se!ara mor%o$ mor%o$o#i o#iss biakan biakan aaupu aaupun n se$ bakeri 'an# berbeda dapa ampak serupa) anpa hasi$ pen#amaan %isio$o#is 'an# memadai men#enai or#anik 'an# diperiksa maka penenuan spesiesn'a idak mun#kin di$akukan. Karakerisik dan k$asi%ikasi seba#ai mikroba seperi bakeri berdasarkan pada reaksi en0imaik aaupun biokimia. Mikroba dapa umbuh pada beberapa ipe
!. Media Media semi semi pada pada) ) 'ai 'aiu u medi mediaa 'an# 'an# berben berbenu uk k pada pada pada pada suhu din#i din#in) n) dan berbenuk !air bi$a suhu panas) misa$n'a media SIM *media 'an# di#unakan unuk u(i produksi su$%ur) indio$) moi$ias. Mikroor#anisme seperi bakeri 'an# erdapa di ikan aau $in#kun#an budida'a) umumn'a erdapa da$am popu$asi !ampuran. nuk keper$uan ideni%ikasi diper$ukan suau biakan murni sehin##a eknik iso$asi mu$ak diper$ukan. Mikroor#anisme 'an# e$ah diiso$asi ini be$um dapa dienukan si%a aau (enis bakerin'a. 5en#amaan men#enai benuk mor%o$o#i) si%a #ram) dan po$a penaaan se$ dapa dikeahui den#an !ara pe/arnaan #ram. Akan eapi) unuk men#eahui (enis bakeri idak !ukup han'a den#an den#an meode meode pe/arn pe/arnaan aan #ram. #ram. Seperi Seperi ha$n'a ha$n'a mikroo mikroor# r#ani anisme sme $ainn' $ainn'aa baker bakerii memperahankan kehidupann'a me$a$ui pen'esuaian diri erhadap $in#kun#an demi ke$an( ke$an(uan uan #eneras #enerasin' in'a. a. nuk nuk iu) iu) bakeri bakeri mampu mampu meromb merombak ak dan men##u men##unak nakan an bahan kimia *da$am benuk $aruan- 'an# ada di $inkun#ann'a seba#ai sumber ener#i dan 0a pemban pemban#un #unan. an. Seiap Seiap (enis (enis spesies spesies bakeri bakeri mempun mempun'ai 'ai karak karakeri erisasi sasi si%a si%a biokimia dan %isio$o#i 'an# khas. Si%a&si%a ini dapa di(adikan a!uan da$am proses ideni%ikasi. O$eh karena iu da$am prakikum ka$i ini di$akukan u(i en0imaik unuk men#eahui karakerisik si%a dari bakeri. *Torora) 1++" , ""-. nuk me$iha reaksi bakeri erhadap media 'an# di#unakan ) dapa diadakan beberapa u(i 'aiu u(i biokimia. (i biokimia ada$ah pen#u(ian $aruan aau 0a&0a kimia dari bahan&bahan dan proses&proses 'an# er(adi da$am ubuh makh$uk hidup) seba#ai upa'a unuk memahami proses kehidupan dari sisi kimia *6ehnin#er) 1++3-. Biokimia beru(uan unuk memahami ba#aimana ineraksi biomo$eku$ sau den#an $ainn'a 'an# memba/a si%a&si%a kehidupan ini. Be$um pernah da$am pen#amaan $o#ika mo$eku$ se$ hidup) kia menemukan suau pe$an##aran erhadap hukum&hukum 'an# 'an# e$ah e$ah dike dikena na$) $) seiri seirin# n# den# den#an an iu iu pu$a pu$a)) kia kia be$u be$um m pern pernah ah meme memer$ r$uk ukan an pende%inisian hukum baru. Mesin or#anik $unak se$ hidup ber%un#si di da$am keran#ka keran#ka hukum&hukum hukum&hukum 'an# sama men#aur mesin buaan buaan manusia. Akan Akan eapi) reaksi&reaksi kimia dan proses pen#auran se$ e$ah ma(u demikian pesa) me$ampaui kemampuan ker(a mesin buaan manusia *6ehnin#er) 1++3-. Ciri Ciri biok biokim imia ia meru merupa paka kan n kri krieri eriaa 'an# 'an# ama ama pen penin in# # di da$a da$am m iden ideni i%ik %ikasi asi spesim spesimen en baker bakerii 'an# 'an# ak dikena dikena$$ karena karena se!ara se!ara mor%o$ mor%o$o#i o#iss biakan biakan aaupu aaupun n se$ bakeri 'an# berbeda dapa ampak serupa) anpa hasi$ pen#amaan %isio$o#is 'an# memadai men#enai or#anik 'an# diperiksa maka penenuan spesiesn'a idak mun#kin di$akukan. Karakerisik dan k$asi%ikasi seba#ai mikroba seperi bakeri berdasarkan pada reaksi en0imaik aaupun biokimia. Mikroba dapa umbuh pada beberapa ipe
media memproduksi memproduksi meabo$i meabo$i enun'a enun'a 'an# dideeksi den#an ineraksi ineraksi mikroba mikroba den#an rea#en es 'an# mana men#hasi$kan perubahan /arna rea#en re a#en *Murra') "773-. "773-. (i %isio$o#i bisan'a idenik den#an u(i biokimia. (i biokimia 'an# biasan'a dipakai dipakai da$am ke#iaan ideni%ikasi ideni%ikasi bakeri bakeri aau mikroor#anism mikroor#anismee 'an# anara $ain u(i kaa$ase) koa#u$ase) dan $ain&$ain. 5en#u(ian biokimia merupakan sa$ah sau ha$ 'an# san#a penin# da$am dunia mikrobio$o#i *6im) 1++-. (i&u(i biokimia 'an# biasan'a dipakai da$am ke#iaan ideni%ikasi bakeri aau mikroor#anisme 'aiu anara $ain ada$ah u(i MR&85) u(i #u$au$a) u(i SIM) (i TSIA) (i Indo$) dan (i Simmons Cirae *D/id(osepuro) 1+39-. Beriku beberapa u(i biokimia 'an# di#unakan unuk ideni%ikasi bakeri) anara $ain, 1.
Reaksi Fermentasi Karbohidrat (!"a#$!"a%
Fermen Fermenasi asi merupa merupakan kan sa$ah sa$ah sau sau aki:i aki:ias as biokim biokimia ia 'an# 'an# di$aku di$akukan kan o$eh o$eh mikroba. Fermenasi ada$ah proses pen#unahan sen'a/a makromo$eku$ or#anik men(ad men(adii sen'a/ sen'a/aa 'an# 'an# $ebih $ebih sederha sederhana na o$eh o$eh aki:i aki:ias as mikrob mikrobaa pada pada kondis kondisii anaero anaerob. b. Fermen Fermenasi asi dapa dapa men#ha men#hasi$ si$kan kan berba# berba#ai ai sen'a/ sen'a/aa akhir akhir)) !onoh !onohn'a n'a %ermenasi karbohidra 'an# dapa men#hasi$kan berba#ai sen'a/a asam seperi asam $aka dan propione) eser&eser) keon dan #as *5e$!0ar) "77-. Seba#i Seba#ian an besar besar mikroo mikroor# r#ani anisme sme memper mempero$e o$eh h ener# ener#ii dari dari subsra subsra berupa berupa karboh karbohidr idra a 'an# 'an# se$an( se$an(un un'a 'a di %ermen %ermenas asii men#ha men#hasi$k si$kan an asam&asa asam&asam m or#an or#anik ik *sep *seper eri i asam asam $ak $aka a)) %orm %orma a)) ase asea a-) -) den# den#an an dise diser rai ai aau aau ida idak k dise diser rai ai pembenukan #as. Or#anisme&or#anisme 'an# berbeda akan men##unakan karboh karbohidr idra; a;#u$ #u$au au$a $a 'an# 'an# berbed berbedaa er#an er#anun un# # dari dari kompon komponen en en0im en0im 'an# 'an# dimi$ikin'a. 5erbenihan #u$au$a di#unakan unuk me$iha adan'a pembenukan asam 'aiu 'aiu den#an den#an adan'a adan'a peruba perubahan han /arna /arna indika indikaor or *merah *merah %eno$ %eno$ aau aau biru biru bromimo$- 'an# erdapa da$am perbenihan men(adi kunin# 'an# sebe$um dianami ber/arna merah *indikaor merah %eno$- aau ber/arna biru *indikaor biru bromimo$- sera unuk pembenukan #as) 'aiu den#an er$ihan'audara di da$am da$am abun# abun# pera#i pera#ian; an;%erm %ermen enasi asi *abun# *abun# durham durham-. -.
#$ukosa. Monosakarida (enis manosa dan #a$akosa er$ebih dahu$u akan diubah men(ad men(adii #$ukos #$ukosaa me$a$u me$a$uii reaksi reaksi epimer epimerisa isasi. si. Sedan# Sedan#kan kan %ruko %rukosa sa akan akan diubah diubah er$ebih er$ebih dahu$u dahu$u men(adi men(adi %rukosa %rukosa >&%os%a >&%os%a dan kemudian kemudian %rukosa >&%os%a diubah diubah men( men(ad adii #$uk #$ukos osaa >&%o >&%os%a s%a. . =$uk =$ukos osaa >&%o >&%os%a s%a dan dan #$uk #$ukos osaa hasi hasi$$ epim epimeri erisas sasii #a$akosa dan manosa akan masuk da$am ahap a/a$ proses %ermenasi unuk men#hasi$kan asam piru:a) asam asea dan CO" dan kemudian pada ahap kedua %ermenasi asam piru:a dan asam asea di reduksi kemba$i o$eh aom hidro#en 'an# di$epaskan da$am ahap perama) membenuk asam $aka dan eano$ *8o$k dan ?hee$er) 1++@-. 2.
U&i Im'i (Indo") *eth+" Red) ,o$es#-roska!er) Simmons /itrate%
Ideni%ikasi basi$ enerik san#a penin# da$am men#enda$ikan in%eksi usus den#an men!e#ah konaminasi pasokan makanan dan air. Ke$ompok bakeri 'an# dapa dapa die diemu muka kan n di sa$ur sa$uran an usus usus manu manusia sia dan dan mama mama$i $iaa 'an# 'an# $ebih $ebih rend rendah ah dik$asi%ikasikan seba#ai an##oa %ami$' Enteroba %ami$' Enterobacteriaeae cteriaeae.. an# ermasuk da$am ke$uar#a ini ada$ah, a. 5aho#en seperi an##oa #enera Salmonella dan Salmonella dan Shigella b. Seseka$i paho#en seperi an##oa #enera Proteus #enera Proteus dan dan Klabsie Klabsie c. an# norma$ %$ora usus seperi Escherichia an## an##o oaa
mar# mar#aa
dan Enteroba dan Enterobacter cter ) 'an# 'an# meru merupa paka kan n pend pendud uduk uk saprophytic saprophytic dari dari sa$uran sa$uran usus. Di%eren Di%erensias siasii ke$omp ke$ompok ok uama uama Enterobacteriaceae Enterobacteriaceae dapa dapa di!apa di!apaii aas dasar si%a biokimia dan reaksi en0imaik di hadapan subsra erenu. Seri es IM8iC) IM8iC) indo$) mei mei$& $&me mera rah) h)
8o#es o#es&5 &5re resk skau auer er))
dan dan
pema peman% n%aa aaa an n
sir sira a
dapa dapa
di#u di#una naka kan n
unuk ideni%ikasi ini. 0.1. 0.1. Indo Indo""
Tryptophan merupakan Tryptophan merupakan asam amino esensia$ 'an# dapa men#a$ami oksidasi den#an den#an !ara ke#iaa ke#iaan n en0ima en0imaik ik beberap beberapaa baker bakeri. i. Kon:er Kon:ersi si ripo ripo%an %an men(ad men(adii produk meabo$ik di mediasi o$eh en0im Tryptophanase. Tryptophanase . Medi Mediaa ini ini biasa biasan' n'aa di#unakan da$am indei%ikasi 'an# !epa. 5erbenihan indo$ di#unakan unuk me$iha kemampuan bakeri mende#radasi asam amino ripo%an se!ara en0imaik. 2asi$ u(i indo$ 'an# dipero$eh ne#ai% karena idak erbenuk $apisan *!in!in- ber/arna merah muda muda pada pada permuk permukaan aan biakan biakan)) arin' arin'aa bakeri bakeri ini idak idak memben membenuk uk indo$ indo$ dari dari
r'popan seba#ai sumber karbon) 'an# dapa dikeahui den#an menambahkan $aruan ko:aks. Asam amino ripo%an merupakan komponen asam amino 'an# $a0im erdapa pada proein) sehin##a asam amino ini den#an mudah dapa di#unakan o$eh mikroor#anisme akiba pen#uraian proein *8o$k dan ?hee$er) 1++@-. 0.0.
*R#,-
(i MR 5erbenihan ini di#unakan unuk mendeeksi bakeri 'an# memi$iki kemampuan unuk men#oksidasi #$ukosa men#hasi$kan produk asam berkonsenrasi in##i 'an# sabi$ sehin##a men'ebabkan p2 media urun hin##a diba/ah 9)9 'an# diandai den#an hasi$ posii%) er(adi perubahan /arna men(adi merah see$ah diambahkan Methyl Red . Arin'a) bakeri ini men#ahasi$kan asam !ampuran *mei$en #$ikon- dari proses %ermenasi #$ukosa 'an# erkandun# da$am medium MR&85 *6ehnin#er) 1++3-. 0.2.
U&i ,-
Den#an hasi$ ne#ai%) karena idak erbenuk /arna merah pada medium see$ah diambahkan &napho$ dan KO2) arin'a hasi$ akhir %ermenasi bakeri inibukan asei$ mei$ karbino$ *aseo$in- *8o$k dan ?hee$er) 1++@-. 0.3.
Simmons /itrate
5erbenihan ini di#unakan unuk me$iha kemampuan or#anisme enerik berdasarkan kemampuan mem%ermenasi sira seba#ai sumber karbon. 5erbenihan Simmons Cirae ini men#andun# indikaor biru bromimo$ 'an# akan berubah men(adi biru pada reaksi posii% dan eap hi(au (ika reaksi ne#ai% *8o$k dan ?hee$er) 1++@-. 0.4.
(i
U&i kata"ase
kaa$ase
merupakan
suau
pen#u(ian
erhadap
bakeri
erenu
unuk men#eahui apakah bakeri ersebu merupakan bakeri aerob) anaerob %aku$ai%) aau anaerob ob$i#a dan di#unakan unuk men#eahui kemampuan mikroor#anisme unuk men#uraikan hidro#en peroksida den#an men#hasi$kan
en0im kaa$ase. Bakeri 'an# memer$ukan oksi#en man#hasi$kan hidro#en peroksida *2"O"- 'an# sebenarn'a bera!un ba#i bakeri sendiri. Namun mereka dapa eap hidup den#an adan'a ani meabo$i ersebu karena mereka men#hasi$kan en0im kaa$ase 'an# dapa men#ubah hidro#en peroksida men(adi air dan oksi#en. En0im merupakan kaa$isaor se(ai) dimana mo$eku$ ini menin#kakan den#an n'aa ke!epaan reaksi kimia spesi%ik 'an# anpa en0im akan ber$an#sun# san#a $amba. En0im idak dapa men#ubah iik keseimban#an reaksi 'an# dikaa$isn'a) en0im (u#a idak akan habis dipakai aau diubah se!ara permanen o$eh reaksi&reaksi ini. En0im merupakan biokaa$is 'an# ber%un#si unuk membanu proses meabo$isme. En0im memi$iki kemampuan unuk men#kaa$isis suau reaksi. Suau en0im ada$ah suau kaa$is bio$o#is. 2ampir iap rekasi biokimia dikaa$is o$eh en0im. En0im merupakan kaa$is 'an# $ebih e%isien daripada keban'akan kaa$is $aboraorium aau indusri. En0im (u#a memun#kinkan suau se$eki:ias pereaksi&pereaksi dan suau pen#enda$ian $a(u reaksi 'an# idak dimun#kinkan o$eh ke$as kaa$is $ain. Kespesi%ikan en0im disebabkan o$eh benukn'a 'an# unik dan o$eh #u#usu#us po$ar *aau nonpo$ar- 'an# erdapa da$am srukur en0im ersebu. Beberapa en0im beker(a bersama suau ko%akor non proein) 'an# dapa berupa sen'a/a or#anik maupun anor#anik. 2idro$isis =e$ain erdapa en0im&en0im 'an# men#uraikan #o$on#an poein disebu protenase/protease) kedua nama ini dian##ap sinonim. Conoh pada hidro$isis #e$ain dimana proein dipero$eh dari hidro$isis ka$o#en) 'aiu 0a pada (arin#an pen#hubun# dan endon dari he/an. =e$ain akan erurai o$eh mikrobia 'an# mensinesis en0im proeo$isis. 6aruan #e$ain bersi%a !air pada suhu ruan# aau suhu kamar dan pada apabi$a berada di da$am re%ri#eraor. Dan apabi$a #e$ain sudah dihidro$isis o$eh mikroba) maka akan eap bersi%a !air *2adioeomo) 1++@-. 3.
*or5o"o$i 6akteri E. coli dan S. aureus
Berdasarkan perbedaan mor%o$o#i bakeri E. Coli dan Staphylococcus aureus ada$ah seba#ai beriku, *or5o"o$i E. Coli
Dari an##oa %ami$' Enterobacteriaceae. kuran se$ den#an pan(an# ")7>)7 m dan $ebar 1)11)3 m. Benuk se$ dari benuk seperi coocal hin##a membenuk sepan(an# ukuran flamentous. Tidak diemukan spora. E. Coli baan# #ram ne#ai%. Se$n'a bisa erdapa un##a$) berpasan#an) dan da$am ranai pendek) biasan'a idak berkapsu$. Bakeri ini aerobik dan dapa (u#a aerobik %aku$ai%. E. Coli merupakan pen#huni norma$ usus) serin#ka$i men'ebabkan in%eksi. Kapsu$a aau mikrokapsu$a erbua dari asamasam po$isakarida. Mukoid kadan#kadan# memproduksi pembuan#an eksrase$u$ar 'an# idak $ain ada$ah sebuah po$isakarida dari speksii%ias ani#en K enenu aau erdapa pada asam po$isakarida 'an# dibenuk o$eh ban'ak E. Coli seperi pada Enterobacteriaceae. Se$an(un'a) di#ambarkan seba#ai ani#en M dan dikomposisikan o$eh asam ko$anik. 5en'aki 'an# serin# diimbu$kan o$eh E. Coli ada$ah Diare. *or5o"o$i Staphylococcus aureus
Benukn'a bu$a aau $on(on# *7) sampai 7)+-) (enis 'an# idak ber#erak) idak berspora dan #ram posii%. Tersusun da$am ke$ompok seperi buah an##ur. 5embenukan ke$ompok ini er(adi karena pembe$ahan se$ er(adi da$am i#a bidan# dan se$ anakn'a !enderun# deka den#an se$ indukn'a. Si%a biakan bersi%a aerob dan umbuh baik pada pembenihan 'an# sederhana pada emperaur opimum @ oC dan p2 )9. Staphylococcus GSaphH ada$ah kuman 'an# diemukan pada ku$i dan hidun# kia. Spesies Staphylococcus ini ada$ah #ram posii% 'an# %aku$ai% anaerob. Saph'$o!o!!us paho#en mempun'ai si%a seba#ai beriku,
Dapa men#hemo$isa erirosi
Men#hasi$kan koa#u$asi dapa membenuk pi#men *kunin# keemasan-
Dapa meme!ah manio$ men(adi asam
Seba#ian besar seba#ai %$ora norma$ ku$i 'an# idak berbaha'a. Seba#ian besar Staphylococcus aureus *SA- dapa dira/a den#an anibioik seperi methicillin *sa$ah sau ipe penicillin-. Teapi) SA men(adi menin#ka perahanann'a den#an anibioik 'an# biasa di#unakan. In%eksi S. aureus diasosiasikan den#an beberapa kondisi pao$o#i) dianaran'a bisu$) (era/a) pneumonia) meningitis) dan arthritits. Ideni%ikasi biakan mikroor#anisme serin#ka$i memer$ukan pemindahan ke biakan se#ar anpa er(adi pen!emaran. 5emindahan mikroor#anisme ini di$akukan den#an eknik asepik unuk memperahankan kemurnian biakan se$ama pemindahan beru$an#ka$i. Mikroor#anisme dapa diumbuhkan da$am biakan !air aau pada. Kekeruhan da$am ka$du menun(ukkan er(adin'a perumbuhan mikroor#anisme. Bi$a mikroor#anisme menumpuk pada dasar abun# maka akan membenuk sedimen) sedan#kan pada permukaan ka$du perumbuhann'a er$iha seba#ai pe$ike$ *6a') 1++-. Da$am eknik biakan murni idak sa(a diper$ukan ba#aimana mempero$eh suau biakan 'an# murni) eapi (u#a ba#aimana meme$ihara sera men!e#ah pen!emaran dari $uar. Media unuk membiakkan bakeri harus$ah seri$ sebe$um di#unakan. 5en!emaran eruama berasa$ dari udara 'an# men#andun# ban'ak mikroor#anisme. 5emindahan biakan mikroba 'an# dibiakkan harus san#a hai&hai dan memauhi prosedur $aboraorium a#ar idak er(adi konaminasi. O$eh karena iu) diper$ukan eknik&eknik da$am pembiakan mikroor#anisme 'an# disebu den#an eknik inoku$asi biakan *D/i(osepuro) 1++-. 5embiakan mikrobia di $aboraorium memer$ukan media 'an# berisi 0a hara sera $in#kun#an perumbuhan 'an# sesuai ba#i mikroba. Menuru 6a'*Annon'mous) "71>-) media ada$ah suau bahan 'an# di#unakan unuk menumbuhkan mikroba 'an# erdiri aas !ampuran nurisi aau 0a0a makanan. Se$ain unuk menumbuhkan mikroba) media dapa (u#a di#unakan unuk iso$asi) memperban'ak) pen#u(ian si%a& si%a %isio$o#is dan perhiun#an (um$ah mikroba. Su$%ida indo$e moi$i' *SIM- ada$ah media a#ar semiso$id di#unakan unuk menenukan hidro#en su$%ida *2 " S- produksi) pembenukan indo$) dan moi$ias. Media SIM *Su$%ide Indo$e Moi$i'- ada$ah media di%%erensia$. SIM media di#unakan
unuk membedakan an##oa ke$uar#a Enterobacteriaceae. Kekaburan 'an# men'ebar dari #aris menusuk menun(ukkan es posii% unuk moi$ias. Tabun# harus dibandin#kan den#an abun# anpa inoku$asi unuk membedakan anara kekaburan samar dan moi$ias. Adan'a /arna merah see$ah penambahan rea#en Ko:!s menun(ukkan produksi indo$e. Terbenukn'a endapan hiam menun(ukkan produksi 2 " S. *Anoname)"71"-. Media =u$a&=u$a ermasuk media Ideni%ikasi) media ideni%ikasi ada$ah perbenihan 'an# di#unakan unuk menenukan (enis bakeri. Biasan'a di#unakan beberapa media bersama&sama. Disebu media #u$au$a karena erbua dari beberapa #u$a seperi) #$ukosa) $akosa) mannosa) ma$osa) sakarosa. Media #u$au$a ada$ah air pepon 'an# diambah #u$a erenu. Tu(uann'a ada$ah unuk men#eahui bakeri mem%ermenasi
karbohidra.
5ada
u(i
#u$au$a
er(adi perubahan /arna pada media #u$au$a
han'a 'an#
berubah men(adi /arna kunin#) arin'a bakeri ini membenuk asam dari %ermenasi #$ukosa. 5ada media #u$au$a (u#a erbenuk #e$embun# pada abun# durham 'an# di$eakan erba$ik dida$am abun# media) arin'a hasi$ %ermenasi berbenuk #as.nuk medium ini dipakai air pepon) (enis #u$a erenu 14) dan indikaor %eno$ red *indikaor 'an# di#unakan idak harus %eno$ red) indikaor $ain 'an# bisa di#unakan seperi BTB)/arna 'an# dihasi$kan er#anun# dari indikaor 'an# di#unakan.
abun#
Durham
unuk
men#eahui
ada
idakn'a pembenukan #as seba#ai hasi$ pen#uraian #u$a da$am medium. Tabun# Dur ham di$eakan erba$ik di da$am abun# #u$a sehin##a #as 'an# erbenuk akan erampun# di da$am abun#ersebu. Sebe$um dipakai) media #u$au$a ini harus se$a$u diperiksa apakah masih seri$ aau idak. Bi$a e$ah keruh aau kunin# berari media idak dapa diper#unakan $a#i. Si%a pen#uraian erhadap #u$a dari seiap mikroba ada$ah ber$ainan) den#an demikian hasi$ pen#uraian *reaksi-ini dapa dipakai
unuk deerminasi suau (enis bakeri sehin##a dapa dienukan spesiesn'a. Media ini di#unakan unuk pemeriksaan bakeri E. Co$i. Metil
Red ada$ah indikaor
asam&basa 'an# berubah men(adi
merah
da$ammedium 'an# sediki asam.
Mei$ merah ada$ah suau
indi!aor'an# akan menun(ukan /arna merah bi$a p2 ada di ba/ah 9. 2asi$ es posii%diandai den#an erbenukn'a /arna merah) sedan#kan /arna kunin# menun(ukanhasi$ ne#ai:e. 5ada u(i ini sebe$umn'a diambahkan rea#en MR *7)94 da$am a$!oho$ +>4- keda$amn'a unuk dapa men#eahui reaksi /arna *Sahdan) "717-.nuk me$iha hasi$ posii% maka ke da$am medium 'an# e$ah dianami diambahkan KO2 kemudian dipanaskan sebenar. Da$am ha$ ini akan erbenuk diacethil . Diacetyl ini den#an sisa&sisa #uanidine akan membenuk /arna merah ke!ok$aan 'an# berupa !in!in dipermukaan abun# seba#ai 85 *J-) bi$a idak er(adi apa&apa diu$is 85 *&-. Den#an man##unakan medium citrate menuru Simmon) merupakan medium pada 'an# erdiri dari mono ammonium %os%a) Na!irae) NaC$) air ) a#ar&a#ar) dan indi!aor romtymol blue. Menuru 2arini) pada u(i ini medium 'an# adin'a ber/arna hi(au kebiruan) bi$a bereaksi posii% maka akan berubah men(adi ber/arna biru eran#. Bi$a rekasi ne#ai:e) maka akan eap ber/arna hi(au kebiruaan*Adiia) "719-. TSIA merupakan media 'an# dapa men#ideni%ikasi bakeri sesuai den#an karaker spesi%ik 'an# diun(ukan o$eh bakeri. Media TSIA men#andun# 7)14 #$ukosa) 14 sukrosa) 14 $akosa) %erosu$%a *unuk mendeeksi produksi 2"S-) eksrak (arin#an *subsra perumbuhan proein-) dan indikaor p2 *%eno$ merah-. a ersebu dimasukkan keda$am abun# reaksi sehin##a men#hasi$kan a#ar mirin# den#an ba#ian pan#ka$ 'an# da$am dan diinoku$asi den#an menusukkan perumbuhan bakeri ke da$am ba#ian pan#ka$.
den#an pembenukan amino )ba#ian mirin# berubah men(adi a$ka$in *merah-. Reaksi o$eh K$ebsie$$a sp. pada TSIA 'aiu asam;asam be/arna kunin# pada ba#ian pan#ka$ dan mirin#) dapa erdeeksi #as) idak dihasi$kan 2"S. I,.
7AKTU DAN TE*-AT : - 2ari;Tan##a$ , Senin) 11 Sepember "71 - ?aku , [email protected]&1>.97 ?ITA -
2ari;Tan##a$ , Se$asa) 1" Sepember "71 ?aku , 7.37&11.97 ?ITA
-
2ari;Tan##a$ , Senin) 1 Sepember "71 ?aku , [email protected]&1>.97 ?ITA
-
2ari;Tan##a$ , Senin) 1+ Sepember "71 ?aku , 7.37&11.97
-
Tempa 5rakikum
, 5rakikum bakerio$o#i di$akukan di
6aboraorium Bakerio$o#i
ALAT DAN 6A8AN:
a% Pembuatan Media
A6AT
BA2AN
MEDIA
1. Tabun# Reaksi
1. Akuades
1. MCA
". =e$as beker
". A$koho$
". EMB
@. 5$ae
@. A$uminium %oi$
@. TSIA
9. =e$as kur
9. Kapas
9. =$ukosa L 6akosa
3. Spau$a
3. Tissue
3. Ma$osa) Manio$) dan
>. 2op$ae
>. BTB
. Ma#neik sirrer
. Mei$ Red
. Nera!a ana$iik
. A5?
+. Api Bunsen
+. Korek api
17. 5ipe ees
Sakarosa >. Indoo$;SIM . MR85 . Sira +. rease
11. 5ipe ukur 3 m$) 17 m$ 1". Ba$$ pipe 1@. Rak abun# 19. Inkubaor 13. Tabun# durham
b% Idenfkasi bakteri Enterobacteriaceae
A6AT
BA2AN
MEDIA
1. Ose
1. Akuades
1. MCA
". Bunsen
". A$!oho$
". EMB
@. BSC
@. Tissue
@. NA
9. Rak abun#
9. Feses
3. Inkubaor
3. Korek Api
% Uji biokimia
A6AT
BA2AN;REA=EN
1. Tabun# reaksi
1. A$!oho$
". Ose
". Keras buram
MEDIA 1. Media *=$ukosa)
#u$au$a 6akosa)
Ma$osa) Manio$) dan @. Api Bunsen
@. Kare #e$an#
9. Rak abun#
9. Tissue
". TSIA
3. Inkubaor
3. 5ereaksi ko:a!
@. MR&85
>. Indi!aor mea$ merah
9. SIM;Indoo$
Sakarosa-
3. Sira >. rease ,I.
/ARA KERJA
:
a% /ara Ker&a -emb!atan *edia 1.% *a"tosa) *anito") Sakarosa) "!kosa) dan Laktosa
&
Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan.
&
Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
&
Diimban#
bahan
ma$osa)
manio$)
sakarosa)
#$ukosa)
dan
$akosa
men##unakan nera!a ana$iik seban'ak 7) #ram. Rumus perhiun#ann'a , 7 #ram , 177 m$ 7) #ram &
See$ah diimban#) bahan di$arukan da$am 7 m$ A5?. 6a$u dihomo#enkan men##unakan hop$ae sera ma#nei! sirrer.
&
Kemudian diambahkan BTB seban'ak " ees.
&
6aruan dimasukkan ke da$am abun# reaksi *'an# e$ah berisi abun# durham- seban'ak 17 m$
per masin#&masin# abun# dan diuupi den#an
kapas. 6a$u diberi $abe$ pada abun#. Kemudian dimasukkan keda$am ku$kas. &
Di$akukan kemba$i desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
0.% TSIA
&
Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan.
&
Di$akukan desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74
&
Diimban# TSIA seban'ak @)+ #ram men##unakan nera!a ana$iik) den#an rumus perhiun#an >3 #ram , 1777 $ier 7)7>3 >7 @)+ #ram NB, >7 *berapa ban'ak sampe$ 'an# dibua-
&
Sampe$ 'an# sudah diimban#) di$arukan men##unakan akuades dan dihomo#enkan den#an hop$ae sera ma#nei! sirrer.
&
Kemudian) sampe$ dimasukkan ke da$am abun# reaksi 'an# sudah berisi abun# durham seban'ak 3 m$ dan diberi $abe$ sera diuupi men##unakan kapas pada mu$u abun#.
&
5ada area ker(a di$akukan desin%eksi kemba$i.
2.% Indoo" 9 SI*
&
Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan.
&
Di$akukan desin%eksi area ker(a 'an# akan di#unakan men##unakan a$!oho$ 74.
&
Diimban# bahan SIM seban'ak 1)>3 #ram men##unakan nera!a ana$iik) den#an rumus perhiun#an @7 #ram , 1777 m$ 7)7@ #ram 33 1)>3 #ram
&
Di$arukan bahan men##unakan akuades dan dihomo#enkan men##unakan hop$ae sera ma#nei! sirrer.
&
Dimasukkan keda$am auo!$a:e pada suhu 1"1oC.
&
Kemudian dimasukkan keda$am abun# reaksi seban'ak 3 m$ dan beri $abe$. Dan di$eakkan dida$am ku$kas hin##a so$id.
&
Di$akukan kemba$i desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
3.% *R#,-
&
Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan.
&
Didesin%eksi area ker(a 'an# akan di#unakan men##unakan a$!oho$ 74.
&
Diimban# bahan MR&85 seban'ak 1) #ram men##unakan nera!a ana$iik den#an rumus perhiun#an 1 #ram , 1777 m$ 7)71 117 1) #ram.
&
Kemudian bahan di$arukan men##unakan akuades seban'ak 7 m$. Dan dihomo#enkan den#an hop$ae dan ma#neik sirrer.
&
Dimasukkan $aruan MR&85 keda$am abun# reaksi seban'ak 17 m$ per masin#&masin# abun#. Dan diberi $abe$.
&
6a$u di auo!$a:e den#an suhu 1"1oC.
&
Kemudian area ker(a didesin%eksi men##unakan a$!oho$ 74
4.% SITRAT
&
Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan.
&
Didesin%eksi area ker(a 'an# akan di#unakan men##unakan a$!oho$ 74.
&
Diimban#
bahan
seban'ak
men##unakan
nera!a
ana$iik
den#an
men##unakan rumus perhiun#an &
Bahan di$arukan den#an akuades seban'ak 7 m$ dan dihomo#enkan men##unakan hop$ae dan ma#nei! sirrer.
&
Kemudian $aruan dimasukkan keda$am abun# reaksi seban'ak 17 m$ per masin#&masin# abun# dan diberi $abe$.
&
Sampe$ dimasukkan keda$am auo!$a:e den#an suhu 1"1 oC) kemudian didin#inkan sampai pada $a$u dimasukkan keda$am ku$kas.
&
Di$akukan desin%eksi kemba$i area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
.% UREASE
&
Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan.
&
Didesin%eksi area ker(a 'an# akan di#unakan men##unakan a$!oho$ 74.
&
Diimban# bahan seban'ak.men##unakan nera!a ana$iik den#an rumus perhiun#an ,
&
Bahan di$arukan den#an akuades seban'ak 7 m$ dan dihomo#enkan men##unakan hop$ae sera ma#nei! sirrer.
&
6aruan dimasukkan keda$am masin#&masin# abun# reaksi seban'ak 17 m$ dan diberi $abe$.
&
Sampe$ dimasukkan keda$am auo!$a:e den#an suhu 1"1 oC) kemudian didin#inkan hin##a pada dan dimasukkan keda$am ku$kas.
&
Di$akukan kemba$i desin%eksi area ker(a den#an men##unakan a$!oho$ 74.
b% /ara Ker&a Identi5ikasi bakteri Enterobateriaeae
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
@. 5ada media MCA;EMB;NA diberi $abe$ an##a$ pembuaan. 9. Dihidupkan api Bunsen men##unakan korek api. 3. Sampe$ %eses dihomo#enkan men##unakan akuades. See$ah iu) ose di%iksasi diaas api Bunsen hin##a ber/arna merah men(a$ar. >. Di%iksasi bibir media MCA;EMB;NA diaas api Bunsen. . Diambi$ sampe$ %eses men##unakan ose) $a$u di$akukan srike pada media. nuk kuadran @ ke 9) ose di$akukan %iksasi. Ini beru(uan unuk perema(aan bakeri. . See$ah di$akukan srike) ose di%iksasi kemba$i hin##a ber/arna merah men(a$ar. Dan di%iksasi kemba$i bibir media MCA;EMB;NA diaas api Bunsen. +. Media dibun#kus men##unakan keras buram dan diisi $abe$ diaas keras. 17. Di$akukan %iksasi kemba$i pada area ker(a. 11. Se$an(un'a diinkubasi pada suhu @ oC se$ama "9 (am. Dan diamai hasi$n'a. % /ara Ker&a U&i 6iokimia A. UJI ULA#ULA
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. @. Diinoku$asikan ko$oni dari biakan kuman ke masin#&masin# media #u$au$a. 9. Diinkubasi pada suhu @oC se$ama "9 (am. 3. Diamai reaksi 'an# er(adi >. Didesin%eksi kemba$i area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. 6. UJI TSIA
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. @. Diinoku$asikan ko$oni dari biakan kuman ke TSIA den#an !ara penusukan den#an ose $urus mu$ai dari pan#ka$ kemirin#an sampai ke dasar abun#) saa menarik ose kemba$i) permukaan mirin# media di#ores.
9. Diinkubasi ku$ur pada suhu @oC se$ama "9&9 (am. 3. Diamai perubahan /arna 'an# er(adi. >. Diinerpreasi hasi$ , -
2an'a mera#i #$ukosa *basa;asam6eren# bersi%a basa *merah- sedan#kan usukan;dasar bersi%a asam *kunin#-.
-
Mera#i #$ukosa dan $akosa *asam;asamKonsenrasi $akosa da$am medium TSIA 17 ka$i $ebih besar dibandin#kan #$ukosa. Den#an demikian see$ah inkubasi "9 (am) $akosa akan eap erdapa da$am konsenrasi 'an# !ukup sehin##a suasana asam dapa diperahankan.
-
Tidak mera#i #$ukosa aau $akosa *basa;basa-) *basa;idak ada perubahanTidak
er(adi
%ermenasi
karbohidra)
bakeri
men##unakan
pepon
men'ebabkan kondisi basa karena pembenukan ammonia. . Di$akukan kemba$i area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. /. UJI I*,I/ -
U&i ;rod!ksi Indoo"9SI*
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Di$akukan desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. @. Ko$oni dari biakan kuman diinoku$asikan ke media SIM) inkubasi pada suhu @oC se$ama "9&9 (am. 9. Rea#en ko:a! diambahkan di aas permukaan media SIM) diamai reaksi 'an# er(adi. 3. Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. -
U&i *eti" *erah 9*R
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Di$akukan desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
@. Diinoku$asikan ko$oni dari biakan kuman ke media MR&85) inkubasi pada suhu @oC se$ama "9&9 (am. 9. Diambahkan indikaor mei$ merah pada biakan. 3. Diamai reaksi 'an# er(adi. >. Di$akukan kemba$i desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. D. UJI SITRAT
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. @. Diinoku$asikan ko$oni dari biakan kuman ke simon sira 9. Diinkubasi pada suhu @oC se$ama "9&9 (am. 3. Diamai perubahan /arna media. >. Di$akukan kemba$i desin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74. E. UJI UREASE
1. Dipersiapkan a$a dan bahan 'an# akan di#unakan. ". Di$akukan desin%eksi area ker(a 'an# akan di#unakan men##unakan a$!oho$ 74. @. Diinoku$asikan ko$oni dari biakan kuman ke a#ar urea. 9. Diinkubasi pada suhu @oC se$ama "9&9 (am. 3. Diamai reaksi 'an# er(adi. >. Didesin%eksi area ker(a men##unakan a$!oho$ 74.
,II.
8ASIL -ENA*ATAN
:
1. 2asi$ dari penanaman ko$oni un##a$ di media TSIA) idak er(adi %ermenasi karbohida.
1.
Media SIM 'an# akan dieeskan rea#en ko:a! unuk u(i adan'a indo$) moi$i') dan su$%ur
". 5ada media urease dipero$eh hasi$ ne#ai% *&- 'an# menandakan en0im hidro$iik 'an# meme!ah sen'a/a amida seperi urea idak men#hasi$kan ammonia 'an# bersi%a basa
@. 5ada media !irae dipero$eh hasi$ ne#ai% *&- 'an# menandakan kondisi basa idak men'ebabkan indi!aor bromimo$ biru beker(a
9. 5ada
media
MR&85
dipero$eh
hasi$
ne#ai% *&-. Media MR&85 ini akan diba#i keda$am " abun# reaksi unuk me$akukan pemeriksaan MR dan 85
3. Media MR&85 di ba#i ke da$am " abun# reaksi seban'ak
'an# 9
masin#&masin# m6
dan
>
m6
berisi unuk
pemeriksaan MR *> m6Dan 85 *9 m6-. - 5ada abun# MR *> m6- dieeskan -
ees mei$ red *beri! A5ada abun# 85 *9 m6- dieeskan > ees Rea#en beri! B
>. 5ada media MR *> m6- dipero$eh hasi$ posii%
*J- dimana adan'a perubahan
/arna men(adi merah 'an# menandakan bakeri memperahankan produk akhir asam.
. 5ada media 85 *9 m6- dipero$eh hasi$ ne#ai% *&- dimana idak er(adi perubahan /arna 'an# menandakan bakeri idak memperahankan produk akhir asam.
. 5ada media sakarosa dipero$eh hasi$ ne#ai% *&- dimana idak er(adi perubahan /arna 'an# pada a/a$n'a ber/arna biru dan
idak
menandakan
erbenukn'a bakeri
mem%ermenasi sakarosa
#as) idak
'an# dapa
+. 5ada media $akosa dipero$eh hasi$ posii% *J- dimana er(adi perubahan /arna dari biru men(adi kunin# dan erbenukn'a #as) 'an# menandakan bakeri dapa mem%ermenasi $akosa
17. 5ada media #$ukosa dipero$eh hasi$ posii% *J- dimana er(adi perubahan /arna dari biru men(adi kunin# dan erbenukn'a #as) 'an# menandakan bakeri dapa mem%ermenasi #$ukosa
11. 5ada media manio$ dipero$eh hasi$ posii% *J- dimana er(adi perubahan /arna dari biru men(adi kunin# dan erbenukn'a #as) 'an# menandakan bakeri dapa mem%ermenasi mannio$
1". 5enambahan me$akukan
rea#en
ko:a!
pemeriksaan
media
unuk SIM
men#enai adan'a Indo$) moi$i') dan su$%ur pada media SIM
1@. 5ada media SIM dia$akukan u(i indo$ 'an# e$ah di ambahkan rea#en ko:a! dipero$eh hasi$ , - dimana erbenukn'a !in!in merah) 'an# menandakan er(adin'a reaksi -
indo$ pada media. *Jerdapan'a a/an pada permukaan media menandakan adan'a moi$i'
-
aau per#erakan pada media SIM. *JTidak erdapa endapan hiam pada media 'an# menandakan bakeri idak men#hasi$kan su$%ur. *&-
,III. -E*6A8ASAN
:
Bakeri Es!heri!hia !o$i *E. !o$i- merupakan suau bakeri =ram *&- berbenuk baan#)
bersi%a
anaerobik
%aku$ai%)
dan
mempun'ai
%$a#e$$a
peririka.
*Fardia0)1++"-. E. !o$i dapa hidup se!ara norma$ di sa$uran pen!ernaan. E. !o$i men(adi pao#en (ika (um$ahn'a menin#ka da$am sa$uran pen!ernaan aau berada di $uar usus. O$eh karena iu) pada praikum di#unakan %eses seba#ai sampe$ unuk indeni%ikasi bakeri E.!o$i 'an# hidup pada ubuh kemudian di anam da$am sebuah media khusus 'an# berbeda dimana men#hasi$kan perubahan sesuai den#an kekhasan median'a masin#&masin#. Medium ada$ah suau bahan nurisi empa menubuhkan bakeri di $aboraorium *Torora) "77-. Media ada$ah suau subsra unuk menumbuhkan bakeri 'an# men(adi pada dan eap embus pandan# pada suhu
inkubasi *5e$!0ar e a$) 1+>-. Den#an men##unakan berma!am ma!am media dapa di$akukan iso$asi) perban'akan) pen#au(an si%a %isio$o#is dan perhiun#an se(um$ah mikroba. Berdasarkan prakikum 'an# e$ah di$akukan) media unuk menumbuhkan bakeri 'aiu MCA dan EMB. Kemudian di$akukan iso$asi sampe$ %eses ke media EMB * Eosin Meh'$en B$ue A#ar - dan MCA * Ma! Conke' A#ar - den#an eknik sreak p$ae. !ara me$akukan Teknik 5irin#an =oresan * Strea! plate method - 'aiu men#inoku$asi biakan den#an (arum ose pada permukaan aas a#ar 'an# penuh den#an biakan !ampuran *spe!imen %eses-. Ada beberapa meode pen##oresan 'an# berbeda) namun kesemua meode beru(uan unuk me$eakkan seba#ian besar or#anisme pada beberapa #oresan perama. Apabi$a sebaran di$akukan den#an men##erakkan (arum ose ber#anian dari sau ba#ian ke ba#ian $ain !a/an peri) bakeri 'an# erin##a$ pada (arum ose semakin berkuran#.
$akosa seperi saph'$o!o!!us aureus) 5. aeru#enosa dan sa$mone$$a. 2asi$ posii% adan'a E. !o$i dapa di$iha pada media Eosin Meh'$ine b$ue *EMB- karena media ini merupakan media se$eki% di%erensia$ unuk men#iso$asi bakeri E. !o$i. 5ada p2 'an# !ukup rendah %ermenor $akosa seperi E.!o$i men#hasi$kan ko$oni un#u den#an kemi$au hi(au mea$ik) sedan#kan kuran# keasaman dapa men#hasi$kan /arna !ok$a& merah muda ko$oni. Sedan#kan pada %ermenor non$akosa mun!u$ seperi ransparan aau pink. Adan'a eosin dan meh'$en b$ue membanu mempera(am perbedaan ersebu. Namun demikian) (ika media ini di#unakan pada ahap a/a$ karena kuman $ainn'a (u#a umbuh eruama 5. aeru#enosa dan sa$mone$$a sp. Dan dapa menimbu$kan kera#uan. Emba 'an# men##unakan eosin dan meh'$en b$ue seba#ai indi!aor memberikan perbedaan 'an# n'aa anara ko$oni 'an# mera#ikan $akosa dan idak mera#ikan $akosa. * 2aso/o) 1++"-. Media EMB men#andun# en0imaik dari #e$ain 'an# merupakan sumber niro#en. 6akosa pada EMB membua bakeri #ram ne#ai% umbuh erdi%erensiasi berdasarkan si%an'a sehin##a memproses $akosa. Eosin dan meh'$ene b$ue dari media EMB merupakan pe/arna 'an# ber#abun# unuk membenuk komp$eks pada p2 asam dan men#hamba bakeri #ram posii% *eosin pada in#ka $ebih rendah-) semenara eosin berubah /arna ke un#u #e$ap) keika media sekiar ko$oni men(adi asam *2imedia "711-. 2asi$ praikum perumbuhan bakeri pada !a/an peri men#hasikan ko$oni un#u den#an kemi$auan hi(au mea$ik sehin##a menun(ukkan hasi$ posii% pada media 'an# didu#a ko$oni dari bakeri E.!o$i den#an baan# =ram ne#ai% dan ko$oni ber/arna merah muda dan ransparan didu#a ada$ah bakeri Eneroba!eria aero#enes 'an# memi$iki si%a #ram ne#ai% benuk baan#. See$ah iu bakeri di rema(akan ke media TSIA. 5roses men#iso$asi harus di$akukan den#an !ara 'an# asepis karena unuk men#hindari adan'a konaminasi anara mikroor#anisme $ainn'a. Mikroor#anisme dapa diiso$asi dan diinoku$asi da$am biakan murni den#an !ara memindahkann'a $a$u menanamn'a kemba$i pada medium baru. TSI A#ar merupakan media unuk me$iha kemampuan suau mikroor#anisme da$am mem%ermenasikan #u$a. TSIA di#unakan unuk pen#u(ian biokimia unuk membedakan beberapa (enis bakeri 'an# ermasuk ke$ompok Eneroba!eria!eae 'an# bersi%a #ram ne#ai% dan mem%ermenasikan #$ukosa kemudian membenuk asam) sehin##a dapa dibedakan den#an bakeri #ram ne#ai% $ain. 5erbedaan ini didasarkan pada po$a %ermenasi karbohidra dan produksi 2 "S pada abun# reaksi. Media ini memi$iki @ #u$a da$am kandun#ann'a) 'aiu #$ukosa)
$akosa) dan sukrosa) den#an konsenrasi 14 sukrosa) 14 $akosa) dan 7)14 #$ukosa. 5ada u(i TSIA) diba#ian bu *ba/ah- be/arna kunin# demikian pu$a pada ba#ian s$an *mirin#- (u#a be/arna kunin#) ha$ ini menun(ukkan suasana 'an# asam pada bu dan s$an. 2asi$ dari u(i TSIA pada E. !o$i men#hasi$kan /arna kunin#. 2a$ ini dikarenakan E. !o$i pada media TSIA dapa mem%ermenasi #$ukosa) $akosa dan sukrosa. Daerah medium pada sampe$ posii% idak memper$ihakan adan'a endapan hiam *ne#ai% 2"S-. 2a$ ersebu er(adi karena E. !o$i idak mampu mendesu$%urasi asam amino dan mehion 'an# men#hasi$kan 2 "S *6ebo%ee ."711-. 2asi$ posii% 'an# diun(ukkan pada media EMB kemudian diu(i ke da$am u(i biokimia. (i biokimia erdiri dari u(i indo$) u(i merah mei$) u(i 8o#es 5raskauer) dan u(i sira *Ari%in "71@-. 5enin#n'a u(i biokimia ini dapa di#unakan unuk men#ideni%ikasi mikroor#anisme se!ara %isio$o#is berdasarkan reaksi biokimia.
5enambahan indikaor p2 merah mei$ ke da$am ku$ur bakeri see$ah inkubasi menun(ukkan adan'a perubahan p2 men(adi asam. Merah mei$ ber/arna merah pada $in#kun#an den#an p2 9)9 dan ber/arna kunin# da$am $in#kun#an den#an p2 >)" *?id'a/ai "71"-. (i 8o#es&5roskauer 'an# di$akukan da$am pen#amaan menun(ukkan hasi$ ne#ai% karena idak adan'a perubahan /arna erhadap $aruan 85. (i 85 di#unakan unuk men#ideni%ikasi bakeri me$e/ai %ermenasi karbohidra o$eh bakeri men(adi ")@ buanadio$ 'an# di(adikan seba#ai produk uama sehin##a er(adi penumpukan da$am media. Bi$a KO2 diambahkan pada media akan membenuk sen'a/a *aseoina!e'$meh'$!arbino$ namun proses ersebu er#anun# pada pen!ernaan #$ukosa er(adi) bi$a #$ukosa pe!ah maka akan bereaksi den#an a$pha&na%o$. 5erubahan /arna memper(e$as proses dari pembenukan aseoin men(adi /arna merah !herr') sedan#kan hasi$ 'an# idak er(adi pembenukan aseoin menun(ukan /arna kunin# !ok$a *Sridhar "77>-. Aseoin merupakan peranara da$am produksi bui$en #$iko$. A$pha&na%o$ ber%un#si unuk kaa$is dan pen#ua /arna *Kaaria e a$. "71@-. (i sira di#unakan unuk me$iha kemampuan bakeri men##unakan sira seba#ai sau&saun'a sumber karbon.
masin# abun# seba#ai indikaor adan'a produksi #as kemudian inkubasi @PC se$ama "9 (am. 2asi$ posii% diandai den#an perubahan media men(adi kunin#) sedan#kan (ika #as posii% akan ampak #e$embun# udara pada abun# durham. 5en#u(ian u(i #u$au$a 'an# erdiri dari media #$ukosa) $akosa) sakarosa) ma$osa) dan manio$. (i #u$au$a menun(ukkan reaksi posii% den#an er(adin'a perubahan /arna men(adi kunin# dan men#hasi$kan #as. Ini menun(ukkan bah/a bakeri ini mampu mem%ermenasi karbohidra *Cappu!ino dkk."77"-. 5en#u(ian den#an media sakarosa idak men#a$ami perubahan /arna men(adi kunin# berari bakeri idak dapa mem%ermenasi sakarosa. 2a(i$ u(i pada media mannio$ menun(ukkan hasi$ posii% 'aiu den#an perubahan /arna men(adi kunin#. 5erubahan /arna menandakan bah/a bakeri mem%ermenasi mannio$. 2asi$ u(i erhadap media ma$osa (u#a men#a$ami perubahan /arna men(adi kunin# 'an# menandakan bakeri dapa mem%ermenasi ma$osa. 2asi$ u(i $akosa (u#a didapakan hasi$ posii%. 2a$ ini er(adi karena media $akosa men#andun# #u$a) air pepon dan %eno$ red) sehin##a E. !o$i dapa men#urai media $akosa karena memii$ki en0im beaa$akosidase. Media #$ukosa didapakan posii% 'an# diandai den#an adan'a perubahan /arna pada media ersebu. 2a$ ini menun(ukkan bah/a E. !o$i dapa men#urai #$ukosa dan memi$iki en0im bea #a$akisidase. 5ada media #$ukosa (u#a erbenuk #e$embun# pada abun# durham 'an# di$eakan erba$ik dida$am abun# media dan menun(ukkan hasi$ %ermenasi berbenuk #as *Okarina) "717-. I<.
KESI*-ULAN
:
Berdasarkan prakikum Ideni%ikasi Bakeri Eneroba!eria!eae 'an# men##unakan sampe$ %eses manusia unuk pemeriksaan
'an# dipero$eh dari sius
mi!rorao dapa diideni%ikasikan bah/a (enis bakeri ini ada$ah bakeri E.!o$i, +.7 4). 5ada u(i #u$au$a bakeri idak mem%ermenasi sakarosa. 5ada media urea dipero$eh hasi$ ne#ai:e) 'an# idak men#hasi$kan ammonia 'an# bersi%a basa. 5ada u(i MR den#an hasi$ posii:e) adan'a perubahan /arna men(adi merah 'an# menandakan bakeri memperahankan produk akhir asa m. 5ada (i 85 ne#ai:e) idak er(adi perubahan /arna ) karena idak erbenuk /arna merah pada medium see$ah diambahkan &napho$ dan KO2.
<.
DAFTAR -USTAKA
:
1. Annon'mous) "71>) 5anduan 5rakikum Mikrobio$o#i) ersedia, ". hps,;;///.usd.a!.id;%aku$as;%armasi;%1$@;5anduMikroBio.pd% @. Annonimous) Seki$as Media =u$a&=u$a) ersedia, 9. hp,;;///.a!ademia.edu;++"@>13;SEKI6ASQMEDIAQ=6A&=6A 3. Adiia 6asinran#) "719) 6aporan 6en#kap 5rakikum Mikrobio$o#i*(i Biokimia IM8IC-) ersedia, >. hp,;;///.a!ademia.edu;1>77"99;6aporanQ5rakikumQMikrobio$o#iQ( iQBiokimiaQIM8ICQ .
De/i A'u)Bab II in(auan pusaka) ersedia,
hps,;;///.#oo#$e.!o.id;hp;eprins.undip.a!.id;DE?IAQ="A77+1+3QB AB"KTI.pd% . Arnia) and E%rida ?ar#ane#ara. "71@. GIdeni%ikasi Konaminasi Bakeri Co$i%orm 5ada Da#in# Sapi Se#ar an# Di(ua$ Di 5asar Sekiar Koa Bandar 6ampun#.H Medical "ournal of #ampung $ni%ersity) 1. +. Di) Keumamah) 5asar Tradisiona$) and A!eh Besar. "71. GEs!heri!hia Co$i) Saph'$o!o!!us Aureus) KeumamahH 1 *@-, 39@. 17. 2uda) Chairu$. "71". G5enapisan Aki:ias Anibakeri Dari Bakeri an# Berasosiasi Den#an Karan# 6unak Sar!oph'on S 5H 9, >+>. 11. 6in#kun#an) Kesehaan) Dan 5en#enda$ian) and 5en'aki . GANA6ISIS BAKTERI Es!heri!hia Co$i 5ADA MAKANAN SIA5 SA-Besar) A. *"71>-. Issn. "3"&>@+3) &) """"". 19. Conro$) . *"711-. EMB A#ar. 'iMedia #aboratories) 1". Rerie:ed %rom hp,;;himedia$abs.!om;TD;M@1.pd% 13. 5ean#) K.) L Badun#&ba$i) K. *"71>-. Iso$asi dan Ideni%ikasi Es!heri!hia
!o$i O13, 2 pada Feses Sapi di) (*1-) @7@3. 1>. 5e$!0ar. 1+> . Dasar)DasarMi!robiologi. ;1+;u(i&biokimia&meabo$isme& bakeri; *Diakses pada, "@ Apri$ "719) puku$, "1.77 ?ITA"3. 6ehnin#er. 1++3. Microbiology a #aboratory Manual.,dison)esley. 5ub$ishin# !ompan', Ca$i%ornia.
6AM5IRAN FOTO
1. 5enimban#an rea A#ar seban'ak 1)73 #ram
". Media rea A#ar
@. 5enimban#an !irae a#ar seban'ak 1)13 #ram
9. Media !irae a#ar
3. 5embuaan media urea a#ar
>. Media urea a#ar 'an# sudah di$arukan
. 5embuaan media !irae a#ar
. Media !irae a#ar 'an# sudah di$arukan
+. 5roses men#homo#enkan media urea a#ar den#an men##unakan ma#nei! sirrer
17. 5roses men#homo#enkan media !irae a#ar den#an men##unakan ma#nei! sirrer
11. 5roses penuan#an urea a#ar seban'ak 3 m6 ke da$am abun# reaksi men##unakan pipe ukur.
1". 5roses penuan#an !irae a#ar seban'ak 3 m6 ke da$am abun# reaksi men##unakan pipe ukur.
1@. Didiamkan media urea a#ar di da$am suhu ruan# hin##a memada den#an posisi dimirin#kan.
14. Didiamkan media urea a#ar
di da$am suhu ruan# hin##a memada den#an posisi dimirin#kan.
13. Media urea a#ar dan !irae a#ar 'an# sudah dibun#kus dan kemudian media disimpan di da$am pendin#in.
". 2asi$ dari penanaman ko$oni un##a$ di media TSIA
1. 2asi$ penanaman spesimen %eses pada media EMB
". 2asi$ penanaman spesimen %eses pada media MCA
1. 5roses %iksasi ose di aas api bunsen
". 5en#ambi$an ko$oni un##a$ di media NA
@. 5roses penanaman bakeri di media #u$au$a
9. 5roses penanaman bakeri di media urease
3. 5roses penanaman bakeri di media !irae
>. 5roses penanaman bakeri di media indo$
. 5roses penanaman bakeri di media MR&85
6EMBAR 5EN=ESA2AN Denpasar) "> Sepember "71 Mahasis/a * Ke$ompok Men#eahui Dosen 5embimbin# 1
Dosen 5embimbin# "
N'oman Masra) SKM.) S.5d.) M.Si
I N'oman
Dosen 5embimbin# @
Dosen 5embimbin# 9
Burhannuddin) S.Si.) M.Biomed
Mardi'ah 2a'ai) Amd.AK
Dosen 5embimbin# 3
6uh 5uu Rina/ai) S.si
LA-ORAN 6AKTERI =IDENTIFIKASI 6AKTERI ENTERO6A/TERIA/EAE>
O6E2, KE6OM5OK NAMA AN==OTA , 1.
Ni Koman# D/i 5ar'ani
717
".
D/i Karika Sari
7@"
@.
Kadek 5uri D/i Cah'ani
7@
9.
Ni Made D/i Adn'ani
791
3.
Ni Made Tik D/i Manda Sari79