PERCOBAAN X UJI ANGKA LEMPENG TOTAL I. TUJUAN Setelah Setelah melakukan melakukan praktk praktkum um maha!!"a maha!!"a #harapk #harapkan an #apat #apat menetapk menetapkan an an$ka an$ka %emaran &akter 'an$ ter#apat #alam !e#aan makanan( mnuman( k)!metka( k)!metka( )&at atau )&at tra#!)nal. II. PEN*A PEN*A+UL +ULUAN UAN *alam *alam &er&a$a &er&a$a makanan( makanan( mnuman( k)!metka( k)!metka( !e#aan )&at( )&at( atau )&at tra#!)nal 'an$ telah mele"at pr)!e! pr)#uk! #an #n'atakan !terl &elum tentu &e&a! &e&a! #ar #ar k)nta k)ntamn mnan an teruta terutama ma &akter &akter 'an$ 'an$ &eruk &erukura uran n ke%l e%l ,mkr ,mkr)! )!k) k)p! p!-. -. Pr)#u Pr)#uk k 'an$ 'an$ ter%em ter%emar ar mkr) mkr))r )r$an $an!m !me e #apat #apat mempr mempr)#u )#uk! k! ra%un ra%un 'an$ 'an$ #apat #apat men'e&a&kan tm&uln'a !uatu pen'akt. akt)r 'an$ mempen$aruh keru!akan ak&at mkr))r$an!me a#alah ukuran mkr))r mkr))r$an $an!me( !me( tpe mkr))r mkr))r$an $an!me( !me( p+( kan#un$ kan#un$an an kelem&a kelem&apan( pan( ka#ar ka#ar ar( p)ten!al re#)k!( !truktur /!k( ke&era#aan $a! O 0 #an CO0( ke&era#aan !u&!tan! antmkr)&a alam( 1akt)r nutr!( #an #e!an pen$epakan. O&at &er&entuk pa#at !epert ta&let( kap!ul( atau !er&uk memlk #a'a tahan le&h lama #&an#n$kan )&at &er&entuk %aran. Peru&ahan 'an$ ter2a# pa#a )&at 'an$ &er&entuk %ar ka#an$ mu#ah #amat( m!aln'a )&at %aran #ar ant&)tk tetra!kln #ketahu telah ru!ak #ar peru&ahan "arna men2a# %)klat kehtaman. Selan #ar peru&ahan "arna( #apat #amat #ar kelarutan )&at. Apa&la !etelah #k) #k)%) %)k k )&at )&at t#a t#ak k #apa #apatt ter% ter%am ampu purr #en$ #en$an an &ak &ak maka maka )&at )&at ter! ter!e& e&ut ut #apa #apatt #katakan ru!ak. O&at &er&entuk !alep mu#ah #amat #ar peru&ahan "arna 'an$ ter2a#( ter2a#( umumn'a !alep 'an$ ru!ak akan &eru&ah &eru&ah "arna "arna men2a# men2a# !emakn !emakn tua. ,Pel%3ar( 4567-. Se#an$kan %ara menla #an men#etek! apakah !uatu )&at tra#!)nal !u#ah ru!ak #apat #lhat #ar peru&ahan "arna( "arna( &entuk ,pe%ah( ter#apat kr!tal( lem&ap-( ra!a a!a( &au( &au( #an pen$ pen$ur ura aan an 'an$ 'an$ ter2a er2a# #. Kelem& lem&ap apan an umu umumn'a mn'a !an$a n$at memper%epat peru&ahan #an keru!akan )&at. Sehn$$a haru! #perhatkan %ara pen'mpanan )&at 'an$ tertera pa#a etket. *amp *ampak ak #ar #ar )&at )&at 'an$ 'an$ ru!a ru!ak k a#al a#alah ah penu penuru runa nan n #a'a #a'a tera terap p(( &ahk &ahkan an men'e&a&kan e1ek 'an$ mem&aha'akan ke!ehatan. Kan#un$an !en'a"a akt1n'a #apat ter)k!#a! atau terura mem&entuk !en'a"a lan 'an$ mun$kn &er!1at le&h t)k!k t)k!k atau le&h &era%un &era%un #&an#n #&an#n$ka $kan n 3at a!ln'a. a!ln'a. Keru!aka Keru!akan n n #apat &erupa &erupa a#an'a a#an'a &)#e &)#e$ra $ra#a! #a! ataup ataupun un &)!n &)!nte! te!! ! ,&)# ,&)#e$r e$ra#a a#a! ! pr)te pr)ten( n( &)#e$ &)#e$ra# ra#a! a! kar&)h#rat( kar&)h#rat( !erta &)#e$ra#a! &)#e$ra#a! lemak #an mn'ak-. ,Prat"( 0886-. Pen$u2an %emaran mkr))r$an!me #alam !e#aan )&at tra#!)nal melput U2 An$ka Lempen$ T)tal ,ALT- &akter( U2 An$ka Kapan$9Khamr ,AKK-( !erta U2 M)!t Pr)&a& Pr)&a< lt' ' Num&er Num&er ,MPN- untuk untuk men$u2 men$u2 a#an'a a#an'a %emaran %emaran mkr))r mkr))r$an $an!me !me
k)l1)rm #an u2 %emaran mkr))r$an!me pat)$en !epert Eschericia coli( Salmonella sp( Pseudomonas aeruginasa( Staphylococcus aureus( #an mkr))r$an!me pat)$en 'an$ lan. U2 an$ka lempen$ t)tal merupakan met)#e 'an$ umum #$unakan untuk men$htun$ a#an'a &akter 'an$ ter#apat #alam !e#aan 'an$ #perk!a. Pa#a u2 an$ka lempen$ t)tal #apat #lakukan #en$an #ua teknk( 'atu : 4. Teknk %a"an tuan$ ,P)ur PlatePa#a teknk n( me#a %ar #tuan$ ke %a"an petr 'an$ telah #&er !u!pen! !ampel 'an$ akan #u2. Teknk n !e#erhana karena %ukup menuan$ !u!pen! !ampel 'an$ #u2( menuan$kan me#a( lalu men$$)'an$kan petr a$ar rata atau h)m)$en #en$an !en#rn'a. Keuntun$an met)#e n a#alah #apat men#apatkan !u!pen! k)l)n 'an$ h)m)$en( t#ak memerlukan keahlan khu!u! #alam pelak!anaann'a( #an t#ak memerlukan !prea#er $la!! untuk meratakan me#an'a. Keru$ann'a( teknk n han'a %)%)k untuk &akter 'an$ tahan pemana!an karena a#a pr)!e! penuan$an me#a %ar 'an$ ter2a# pa#a !uhu ;8 8C( #an !ampel 'an$ #$unakan 2umlahn'a le&h &an'ak #arpa#a teknk %a"an !e&ar. 0. Teknk !e&aran ,Sprea# PlatePa#a teknk n( me#a %ar #tuan$ ke %a"an petr #an #tun$$u hn$$a mema#at. Su!pen! kemu#an #letakkan pa#a permukaan me#a men$$unakan !prea#er $la!!. Pen$$unaan !prea#er $la!! perlu #perhatkan a$ar !u!pen! !ampel merata namun t#ak meru!ak me#a. Keuntun$an #ar met)#e n a#alah %)%)k untuk !e$ala ma%am &akter terma!uk &akter 'an$ t#ak tahan terha#ap pemana!an( !ampel 'an$ #$unakan le&h !e#kt( !eta memu#ahkan #alam perhtun$an karena !ampel a#a # permukaan me#a. Se#an$kan keru$an #ar teknk n a#alah men$$unakan &an'ak alat !epert !prea#er $la!!( #an mem&utuhkan keahlan khu!u! terutama !aat meratakan !ampel. Jka kuran$ !empurna k)l)n t#ak akan tum&uh merata !ehn$$a !ult #amat #an !ult #htun$ 2umlah k)l)nn'a. Prn!p perhtun$an &akter #en$an )lume tertentu #ata! me#a 'an$ !e!ua. Ke#ua teknk ter!e&ut pa#a prn!pn'a #lakukan pen$en%eran terha#ap !e#aan 'an$ #perk!a( kemu#an #lakukan penanam pa#a me#a lempen$ a$ar. Jumlah k)l)n &akter 'an$ tum&uh pa#a lempen$ akan #htun$ !etelah #lakukan nku&a! pa#a !uhu #an "aktu 'an$ !e!ua. Perhtun$an #lakukan terha#ap petr #en$an 2umlah k)l)n &akter antara ?8@
?88. An$ka lempen$ t)tal #n'atakan !e&a$a 2umlah k)l)n &akter ha!l perhtun$an #kalkan #en$an 1akt)r pen$en%eran.
III. ALAT *AN BA+AN Alat 4. 0. ?. ;. .
48 petr 7 ta&un$ reak! La&u Erlenme'er 4 &lue tp Gela! ukur 48 mL
Bahan 4. Sampel 'an$ #perk!a ,!er&uk 2amu ha&&atu! !au#a0. Me#um plate %)unt a$ar ,PCA- #an larutan /!)l)$! terl I. CARA KERJA *tm&an$ 4 ram !ampel 'an$ akan #perk!a( #larutkan #alam 48 mL larutan pen$en%er
*lakukan penen%eran hn$$a 48@
*tuan$ 4 mL !u!pen! ha!l pen$en%eran pa#a %a"an petr
*tuan$ me#um PCA 'n$ telah #!terlka ,;8DC- ke #alam !eetap %a"an petr
*replka! 4 kal
*nku&a! pa#a !uhu ?DC !elama 0; 2am #alam p)!! ter&alk
*htun$ k)l)n &akte 'an$ tum&uh pa#a %a"an petr( #htun$ an$ka lempen$ t)taln'a
V. Data Pengamatan Gambar
Pengenceran 10-1
Jumlah koloni 57
36
10-2
12
5
-
10-3
-
10-4
-
10-4
-
10-5
10-5
Perhitungan on!entra!i 10-1" #$% & 360" 570 on!entra!i 10-2" #$% & on!entra!i 10-3" #$% & on!entra!i 10-4" #$% & on!entra!i 10-5" #$% & -
1. 2. 3. 4. 5.
#$% rata-rata 'ari kon!entra!i 10-1 "10-2" 10-3" 10-4" 10-5 a'alah(.
V). *a!il Pengamatan Perhitungan Rumu! perhtun$an an$ka lempen$ t)tal :
jumlahkoloni × ALT
=
1
faktor pengenceran gram sampel
+an'a pa#a pen$en%eran 48 @0 'an$ ma!uk #alam rentan$ ?8 F ?88 k)l)n( 'atu !e2umlah ?7 #an k)l)n. Sehn$$a ALTn'a #apat #htun$ !e&a$a &erkut : 36 ×
ALT
=
1 10
1
−
1
36,0 × 10
=
1 gram
2 +a!l perhtun$an 'an$ ##apat a#alah 36,0 × 10 kurang #ar !ehn$$a #ata memenuh aturan *epartemen Ke!ehatan RI. Pa#a replka!( ##apat ALT !e&a$a &erkut
57 ×
ALT
=
6
(
6
(
10
1 1
−
10
1 gram
57 , 0 × 1
=
2 +a!l perhtun$an 'an$ ##apat a#alah 57 , 0 × 10 kurang #ar !ehn$$a #ata memenuh aturan *epartemen Ke!ehatan RI.
10
V)). Pembaha!an Praktkum n &ertu2uan untuk menetapkan %emaran &akter 'an$ ter#apat #alam makanan( mnuman( k)!metka( )&at atau )&at tra#!)nal. U2 an$ka lempen$ t)tal merupakan met)#e umum 'an$ #$unakan untuk men$htun$ a#an'a &akter 'an$ ter#apat pa#a !e#aan 'an$ #perk!a. *alam &er&a$a !e#aan ter!e&ut( "alaupun #n'atakan !terl( tetap &elum tentu &e&a! #ar k)ntamnan terutama &akter 'an$ &erukuran mkr)!k)p!. Maka tu( perlulah #ketahu 2umlah &akter #an apakah 2umlah k)l)n &akter #alam !e#aan ter!e&ut memenuh aturan *epartemen Ke!ehatan RI 'atu kuran$ #ar 106 2umlah an$ka lempen$ t)taln'a. Jka 2umlah k)l)n kuran$ #ar an$ka ter!e&ut( !e#aan #apat #n'atakan aman untuk #k)n!um!( tetap 2ka le&h #ar 106 !an$at mun$kn akan menm&ulkan ma!alah ke!ehatan &la #k)n!um! karena !e#aan ter!e&ut men$an#un$ &an'ak &akter. U2 n #lakukan #en$an melakukan pen$en%eran terha#ap !e#aan 'an$ #perk!a kemu#an #lakukan penanaman pa#a me#a lempen$ a$ar. Jumlah k)l)n &akter 'an$ nantn'a tum&uh pa#a lempen$ a$ar #htun$ !etelah nku&a! pa#a !uhu #an "aktu 'an$ !e!ua( 'atu pa#a !uhu ? ) C #an !elama 46 @ 0; 2am( #an #lakukan pa#a p)!! ter&alk a$ar ar atau uap arn'a menempel # &a$an tutup petr #an t#ak mem&a!ah permukaan me#a. Permukaan me#a 'an$ &a!ah maka akan #apat men$$an$$u pertum&uhan k)l)n &akter. Selan2utn'a #lakukan perhtun$an terha#ap 2umlah k)l)n 'an$ tum&uh #alam petr. An$ka lempen$ t)tal #n'atakan !e&a$a 2umlah k)l)n &akter ha!l perhtun$an #kal 1akt)r pen$en%eran. Pa#a praktkum n #$unakan !e#an !er&uk #ar kap!ul 2amu R)'al t Natural Supplement 'an$ mema#ukan &2 ha&&atu! !au#a , 2ntan htam #en$an tanaman )&at tran#!)nal &erkha!at lann'a. *plh !e#aan 2amu
karena pr)#uk 2amu merupakan pr)#uk 'an$ !an$at rentan terha#ap tum&uhn'a %emaran &akter( karena 2amu &era!al #ar alam. Pa#a per%)&aan n #plh met)#e %a"an tuan$ (pour plate)( 'atu #en$an melakukan pen$en%eran terha#ap !e#aan 'an$ akan #perk!a. Pen$en%eran n &ertu2uan untuk memperke%l p)pula! mkr)&a atau memper!empt #aerah9 area u2 !ehn$$a k)l)n &akter 'an$ #ha!lkan t#ak menumpuk9 terlalu &an'ak. Lan$kah pertama 'an$ #lakukan a#alah menm&an$ !ampel 2amu 'an$ #perk!a !e&an'ak 4 $ram lalu #larutkan #alam 48 ml larutan !alne. Laruten !alne a#alah larutan 'an$ men$an#un$ 8(5 NaCl ,larutan /!)l)$!-. Pen$$unaan !alne !e&a$a pelarut karena !alne memlk p+ #an tekanan 'an$ !e!ua #en$an k)n#! pertum&uhan &akter( !ehn$$a &akter t#ak mat. Campuran #h)m)$enkan #alam ta&un$ reak! #en$an pen$$)2)kan( kemu#an 4 ml #ar larutan %ampuran ter!e&ut #am&l #an #ma!ukkan ke #alam ta&un$ reak! 'an$ &er! 5 ml larutan !alne !ehn$$a ##apatkan pen$en%eran
1
−
10
.
5 Pen$en%eran teru! #lakukan !ampa ##apatkan tn$kat pen$en%eran 10 ,lma kal-. Semua peker2aan n #lakukan #en$an teknk a!ept! # #alam LA. Setelah tu( #am&l !e&an'ak 4 ml #ar ma!n$@ma!n$ pen$en%eran lalu #tuan$kan ke %a"an petr #an #tam&ahkan me#a PCA , Plate Count Agar - 'an$ !e&elumn'a telah #!terlkan( #pana!kan hn$$a men%ar. Se&elum #tuan$kan ke %a"an petr( tun$$u terle&h #ahulu !ampa !uhun'a turun men2a# ;8H C( a$ar &akter t#ak mat karena !uhu 'an$ terlalu pana! #an me#a t#ak terlalu #n$n !upa'a t#ak men2en#al ketka #tuan$kan pa#a !ampel. Jka me#a men2en#al ketka #tuan$kan( maka !ampel t#ak #apat ter%ampur #en$an h)m)$en. Ketka penuan$an me#a( tutup petr t#ak perlu !ampa #&uka !emua karena akan memper&e!ar kemun$knan ma!ukn'a &akter lan #ar u#ara( "alaupun ker2a !u#ah #lakukan a!ept! # #alam a!ept! #e!k. Pa#a per%)&aan n( #$unakan 4 %a"an petr untuk k)ntr)l me#a( 'atu %a"an petr 'an$ han'a &er! me#a !a2a tanpa a#a !ampel. +al n #lakukan untuk mema!tkan &ah"a 2ka a#a &akter 'an$ tum&uh pa#a petr 'an$ #&er !ampel( a#alah t#ak &era!al #ar me#a 'an$ #$unakan. Me#a #tuan$( lalu %a"an petr #$)'an$@$)'an$kan !upa'a rata #an ter%ampur h)m)$en #en$an !ampel. Kemu#an petr #tutup( antara "a#ah #an tutup petr #!)la! untuk men$hn#ar ma!ukn'a k)ntamnan kemu#an #nku&a! pa#a !uhu ?H C !elama 46 @ 0; 2am. Suhu n merupakan !uhu )ptmum &a$ &an'ak pertum&uhan &akter( 'atu !ama !epert !uhu tu&uh karena &akter@&akter n &a!an'a h#up #alam tu&uh manu!a. Saat #nku&a!( %a"an pert #&alk !upa'a t#ak lem&a&.Setelah 46@0; 2am( #lakukan pen$amatan #an k)l)n 'an$ ter&entuk #htun$. Tetap pa#a per%)&aan n( k)l)n &elum #apat ter&entuk #alam 0; 2am( melankan !etelah &e&erapa har , ? har -( &arulah k)l)n ter&entuk. Me#um 'an$ #$unakan a#alah PCA ,Plate Count Agar - 'an$ memlk k)mp)!! tap ltern'a 'ea!t ek!trak 0( $ram pept)n #ar k)!en (8 $ram * ,- $luk)!a 4(8 $ram #an a$ar 4;(8 $ram. p+ #ar me#a n a#alah (8. ea!t merupakan !um&er >tamn B( ntr)$en( #an !en'a"a kar&)n. Se#an$kan pept)n −
a#alah !um&er ntr)$en )r$ank 2u$a men$an#un$ >tamn #an kar&)h#rat. Gluk)!a merupakan !um&er $ula #an kar&)h#rat. A$ar han'a !e&a$a pem&eku( #per)leh #ar Al$ae Marne tertentu ,Re# Al$a-. Me#um 'an$ &ak haru! memenuh !'arat@!'arat !e&a$a &erkut : a. Su!unan makanan haru! memenuh untuk pertum&uhan &akter !epert &. %. #. e.
ntr)$en( !um&er kar&)n. Tekanan )!m)!e haru! !)t)n!. *era2at kea!aman ,p+- relat1 netral. Temperatur nku&a! !ektar ?H C. Sterlta! haru! ter2a$a #en$an men$er2akann'a !e%ara a!ept!. *ar ha!l pen$amatan( #ata 'an$ #ma!ukkan han'a !atu #ata !a2a
1 'atu( ##apat #ata &ah"a pa#a me#a !ampel #en$an pen$en%eran 10 #en$an 2umlah k)l)n 'an$ a#a # me#a a#alah ?7 #an k)l)n. Se#an$kan 2umlah k)l)n pa#a pen$en%eran 'an$ lan t#ak kut #ma!ukkan karena 2umlahn'a t#ak ma!uk #alam ran$e ?8 F ?88 k)l)n( me#a@me#a ter!e&ut #tum&uh ?8 k)l)n. Pa#a %a"an petr pa#a !er pen$en%eran 'an$ lan 2u$a ##apat k)ntamnan pa#a !e#aan 'an$ #amat !ehn$$a men'ultkan pen$amatan #an pen$htun$an 2umlah k)l)n. Tu2uan #ar #lakukann'a pen$en%eran !upa'a 2umlah k)l)n t#ak terlalu &an'ak !ehn$$a #apat ma!uk rentan$ antara ?8@?88 k)l)n. Menurut te)r( pen$en%eran ter&e!ar memlk k)l)n ter&e!ar( &e$tu 2u$a !e&alkn'a. *ata 'an$ #am&l untuk pehtun$an ALT ,An$ka Lempen$ T)tal- a#alah −
#ata #ar pen$en%eran 10 1 karena 2umlah k)l)n 'an$ a#a ##alamn'a 'atu ?7 k)l)n ,a#a #antara rentan$ ?8@?88 k)l)n-( #an replka!n'a 'atu k)l)n. −
*ar ha!l perhtun$an ##apat ALT pa#a pen$en%eran
1
−
10
!e&e!ar ?
1
#an replka!n'a !e&e!ar , 0 × 101 ( ha!l n kuran$ #ar 106 !ehn$$a memenuh aturan 2umlah ALT #ar *epartemen Ke!ehatan RI. Namun( pr)#uk antmkr)&a 'an$ #$unakan( 'atu kap!ul 2amu +a&atu! Sau#a( !u#ah ka#aluar!a !ehn$$a !eharu!n'a #ata 'an$ ##apat le&h #ar aturan 2umlah ALT #ar *epartemen Ke!ehatan RI. Suatu pr)#uk makanan( )&at( )&at tra#!)nal ,2amu- #katakan ru!ak !e%ara mkr)&)l)$ apa&la ter#apat meta&)lt 'an$ &er!1at t)k!k( k)n!entra! tn$$ mkr))r$an!me 'an$ &erp)ten!al pat)$en( #an !e%ara /!k maupun kma #tan#a )leh peru&ahan &entuk( "arna( ra!a( #an &au. at pen$a"et #apat #$unakan #en$an ketentuan t#ak t)k!k atau t#ak rtat1( mampu mem&unuh k)ntamnan( !ta&l #an akt1( !erta !elekt1 #an t#ak &ereak! #en$an &ahan. 6,0 × 10
II.
KESIMPULAN 1. U2 an$ka lempen$ t)tal merupakan met)#e umum 'an$ #$unakan untuk men$htun$ a#an'a &akter 'an$ ter#apat pa#a !e#aan 'an$ #perk!a. 2. Pa#a per%)&aan n #$unakan !e#aan !er&uk #ar kap!ul 2amu karena pr)#uk 2amu merupakan pr)#uk 'an$ !an$at rentan terha#ap tum&uhn'a
%emaran &akter( karena 2amu &era!al #ar alam( namun 2amu 'an$ #$unakan !u#ah ka#aluar!a. ?. Met)#e 'an$ #$unakan a#alah met)#e %a"an tuan$ atau pour plate. 4. *ar ha!l perhtun$an ##apat ALT pa#a pen$en%eran 10 1 !e&e!ar ? −
1
6,0 × 10 6
10
#an replka!n'a !e&e!ar
( ha!l n kuran$ #ar
!ehn$$a memenuh aturan 2umlah ALT #ar *epartemen Ke!ehatan
RI 'atu t#ak &)leh le&h #ar III.
1
, 0 × 10
6
10
.
*ATAR PUSTAKA B)nan$(G.( 456( Mikrobiologi Kedokteran untuk Laboratorium dan Klinik ( Grame#a( Jakarta Ja"et3 #kk( 0884( Mikrobiologi Kedokteran E#! I( *epke! RI( Jakarta T. Prat"( S'l>a( 0886( Mikrobiologi Farmasi( Erlan$$a( Jakarta
