LAPORAN PRAKTIKUM
“FRAKSIONASI SEL” dibuat untuk memenuhi tugas praktikum Modul Cellular and Molecular Basis of Inheritance
Oleh: Kelompok 9 M. Ilyas Saputera
Mulia Sari
Azwar Lauzardi
Annisafitria
Ilham Murtala
Eka Rahma
Noor Shabrina
Abqariyatuzzahra M.
Reni Dwi Parihat
Novia Putri R.
Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2012
Kata Pengantar Segala puji dan syukur kami ucapkan kehadirat Allah Yang Maha Esa, yang telah memberikan rahmat dan karunia-Nya serta nikmat yang tiada hentinya kepada manusia. Terutama nikmat iman dan akal yang menjadikan manusia sebagai makhluk yang paling sempurna. Dengan nikmat akal tersebutlah kita dituntut untuk dapat memanfaatkannya dengan sebaik-baiknya tanpa menyimpang dari perintah-Nya. Salawat serta salam bagi makhluk mulia junjungan kita baginda Nabi Muhammad SAW, yang telah mengajarkan ilmu dari Allah kepada umat-umatnya. Ilmu tersebut tidak akan habis sekalipun air laut dijadikan tinta untuk menuliskan ilmunya itu. Dan manusia hanya diberi sedikit sekali. Alhamdulillah, kami dapat menyelesaikan laporan praktikum tentang fraksionasi sel. Semoga dengan tersusunnya makalah ini dapat menambah pengetahuan kita. ”Tiada gading yang tak retak” demikian pepatah mengatakan. Karena itu tiada menutup kemungkinan jika dalam penulisan makalah ini terdapat banyak kesalahan dan kekurangan. Untuk itu, segala kritik dan saran kami harapkan demi kesempurnaan makalah ini. Terima Kasih.
Ciputat, 18 Nopember 2012
Kelompok 9
Daftar Isi Kata Pengantar ....................................................................................................................... ii Daftar Isi ................................................................................................................................ iii A. Topik Praktikum ........................................................................................................1 B. Tujuan Praktikum.......................................................................................................1 C. Landasan Teori...........................................................................................................1 D. Alat dan Bahan ...........................................................................................................1 E. Cara Kerja .................................................................................................................. 2 F. Hasil Praktikum .........................................................................................................3 G. Pembahasan................................................................................................................ 4 H. Kesimpulan ................................................................................................................ 4 Daftar Pustaka ........................................................................................................................ 5
A. Topik Praktikum Fraksionasi sel
B. Tujuan Praktikum Melihat benda-benda sel (organel) dengan sentrifuge bertingkat
C. Landasan Teori Perkembangan teknologi yang semakin pesat memungkinkan orang untuk bisa melihat struktur yang paling kecil dalam kehidupan kita yaitu sel. Pengamatan sel dengan mikroskop terus memperoleh kemajuan seiring dengan penemuan dan penyempurnaan mikroskop itu sendiri. Sel sebagai sebagian dari makhluk hidup juga mengandung banyak komponen/ bagian-bagian dari sel yang kemudian dikenal dengan organel. Untuk bisa mempelajari organel sel dapat dilakukan dengan teknik fraksionasi sel, sehingga kita dapat memisahkan organel utama sehingga fungsinya dapat dipelajari. Sel sebagai unit fungsional dari makhluk hidup terdiri dari organel-orgikuluanel yang berperan dalam kerja sel itu sendiri. Organel yang ditemukan di dalam sel antara lain nucleus, mitokondria, reticulum endoplasma, lisosom, dan aparatus golgi. Sel merupakan suatu tehnik yang berguna untuk mempelajari struktur dan fungsi sel dengan cara menjauhkan sel-sel dan memisahkan organel-organel utama serta struktur sub seluler lain. Sentrifuge merupakan alat untuk memutar tabung reaksi yang berisi campuran sel-sel yang pecah pada berbagai kecepatan. Gaya yang dihasilkan menyebabkan fraksi komponen sel mengendap di dasar tabung, membentuk pellet. Pelet terdiri dari komponen berukuran besar pada kecepatan yang rendah, sedangkan pada kecepatan yang tinggi pellet terdiri dari komponen berukuran kecil. Dengan fraksinasi sel, peneliti dapat menyiapkan komponen-komponen sel spesifik dalam jumlah banyak dan menentukan fungsi komponen tersebut.
D. Alat dan Bahan a. Alat: -
Mesin sentrifugasi
-
Kaca objek dan gelas penutup
-
Pipet transfer
-
Tabung mikrofuge
-
Mikroskop cahaya
b. Bahan: -
Homogenat hepar ayam
-
PBS (Phospat Bufer Saline)
-
Metylen Blue
-
Janus Green
E. Cara kerja Homogenat hepar ayam yang dibuat dengan menghancurkan hepar ayam menggunakan homogenizer dan sebelumnya telah diberi larutan sukrosa dengan konsentrasi 2%.
Tahap I 1. Ambillah 1,5 ml homogenat pada tabung mikrofuge dan putarlah dengan sentrifugasi pada 5000 rpm selama 15 menit. 2. Pisahkan supernatan dan pindahkan ke tabung mikrofuge yang baru. 3. Encerkanlah endapan/pellet dengan menambahkan 200 ul PBS, kemudian tambahkan metylen blue dengan perbandingan 1:1. Teteskan pada kaca objek dan periksalah di bawah mikroskop dengan perbesaran 40x10, perhatikan dan amati komponen sel yang didapat. Buatlah catatan dan gambar yang diamati.
Tahap II 1. Putar kembali supernatan yang didapat sebelumnya dengan kecepatan 12.000 rpm selama 10 menit. Setelah selesai diamkan sejenak kemudian ulangi lagi dengan kecepatan yang sama selama 5 menit. 2. Pisahkan endapan dan supernatan dibuang. 3. Encerkan kembali endapan/pellet dengan menambahkan 100 ul PBS dan berilah Janus Green dengan perbandingan 1:1. Teteskan pada kaca objek dan periksa di bawah mikroskop dengan perbesaran 10x100, perhatikan dan amati organel sel yang didapat. Buatlah gambardan catatan terhadap apa yang di dapat..
F. Hasil Praktikum
Tahap 1
Inti sel hasil fraksionasi tahap 1
Tahap 2
Mitokondria hasil fraksionasi tahap 2
G. Pembahasan Dari sentrifuge pertama, pellet ditambahkan pewarna Methylen blue, kemudian dengan menggunakan pipet diambil pellet yang telah dicampur dan diamati di bawah mikroskop. Tampak sebuah lingkaran yang berwarna biru kehijauan yang merupakan inti sel. Namun dalam pengamatan, harus diamati dengan cermat perbedaan kenampakan antara inti sel dengan gelembung air. Pada gelembung air, jika dilakukan pemfokusan, maka gelembung air tersebut akan hilang. Sedangkan pada sentrifuge II, pellet ditambahkan pewarna Janus green, kemudian diamati di bawah mikroskop. Tampak sebuah garis yang sangat kecil berwarna hijau kegelapan yang hampir berwarna hitam. Garis kehitaman tersebut merupakan salah satu organel sel yang disebut mitokondria. Namun, untuk melihat mitokondri tersebut agak sedikit lebih sulit dikarenakan ukuran mitokondria yang relatif kecil sementara kami menggunakan mikroskop cahaya.
H. Kesimpulan Berdasarkan percobaan yang dilakukan dan hasil pengamatan yang diperoleh, dapat disimpulkan melalui teknik sentrifuge organel-organel sel dapat dipisahkan untuk dipelajari komposisi dan fungsi masing-masing. Dalam pengamatan pertama, terlihat inti sel yang berbentuk bulat, tampak biru kehijauan, dan pinggirnya tampak lebih tebal. Sedangkan dalam pengamatan kedua, mitokondria terlihat berwarna hijau kegelapan hampir berwarna hitam.
DAFTAR PUSTAKA
yatim wildan. kamus biologi. -ed2-. Jakarta.Yayasan Obor Indonesia. 2003
Campbell, Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorski, et al Biologi
Erlich, H.A. 1989. PCR teknologi: prinsip-prinsip dan aplikasi untuk amplifikasi DNA. StocktonPress, NY.
NCBI.
PCR.
[internet].
[dikutip
13/11/12].
Available
From:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/genome/probe/doc/TechPCR.shtml
http://www.scribd.com/doc/95728598/Laporan-Praktikum-Isolasi-Dna
http://www.iqbalali.com/2012/08/isolasi-dna-sederhana.html
https://www.bioversityinternational.org/fileadmin/bioversityDocs/Training/molecular _markers_volume_1/english/MolMarkers%2520Vol1%2520III%2520PCR%2520basi cs.pdf
http://ebookbrowse.com/modul-praktikum-isolasi-dna-dan-elektroforesis-pdfd333543351
