I.
LAPORAN PRAKTIKUM TEKNIK PENANAMAN ATAU ISOLASI BAKTERI Hari/ Tanggal :
II. Materi : Teknik Teknik penanaman atau isolasi bakteri III. T Tu ujuan : Untuk mengetahui dan memahami cara ca ra menginokulasi mikroorganisme. IV. IV. Daar Daar Te!ri Pena Penana nama man n
bakt bakter erii atau atau bias biasaa
dise disebu butt juga juga inok inokul ulas asii adal adalah ah peke pekerj rjaa aan n
memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agarmenghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1!). "da beberapa beberapa tahap yang harus dilakukan dilakukan sebelum sebelum melakukan melakukan teknik teknik penanama penanaman n bakteri (inokulasi) yaitu # 1.
Menyiapkan ruangan $uang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi terjadi kesalahan kesalahan dalam pengamatan pengamatan atau percobaaan percobaaan .dalam labotarium labotarium pembuataanserum %aksin dan sebagainya.
2.
Pemindahan dengan dengan pipet &ara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil1 ml contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak ml murni (Pelc'ar, 1!).
3.
Pemindahan dengan kawat inokulasi kawa kawatt inok inokul ulas asii seba sebali likny knyaa dari dari plat platin inaa atau atau nikel nikel .uju .ujungn ngnya ya boleh boleh luru luruss jugaboleh berupa kolongan yang diametrnya 1*mm. Dalam melakukuan penanaman bakterikawat ini terlebih dahulu dah ulu dipijarkan sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyalaapi saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi dalam nyala (Pelc'ar, 1!).
Teknik Teknik +nokulasi "da "da bebe bebera rapa pa meto metode de yang yang digu diguna naka kan n untu untuk k meng mengis isol olas asii biak biakan an murni urni mikroorganisme yaitu #
-etode gores Penggor Penggoresa esan n yang sempur sempurna na akan mengha menghasil silkan kan koloni koloni yang yang terpis terpisah. ah. +nokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam cawaan petri dengan dengan jarum jarum pindah pindah (lup (lup inokul inokulasi asi). ). Di antara antara garis garisgari gariss goresa goresan n akan terdapat selsel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni. &ara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. ila ila dila dilakuk kukan an denga dengan n baik baik tekn teknik ik inil inilah ah yang yang palin paling g prak prakti tis. s. Dala Dalam m pengerjaannya terkadang berbeda pada masingmasing laboratorium tapi tujuann tujuannya ya sama sama yaiitu yaiitu untuk untuk membuat membuat goresa goresan n sebanya sebanyak k mungki mungkin n pada pada lempeng lempeng medium pembiakan. pembiakan. "da beberapa beberapa teknik dalam metode metode goresan, goresan, yakni #
/oresan T /oresan $adian /oresan sinambung -etode tusuk -etode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media (0inarni, 1).
Teknik Teknik +solasi Dan Pemurnian Teknik Teknik isolasi mikroba mikroba untuk memisahkan dan mengidenti2 mengidenti2ikasi ikasi,, jenis mikroba dari biakan dapat diklasi2ikasikan berdasarkan si2at pertumbuhan yang nampak pada media. -etode penanaman pada agar Pada metode penanaman pada agar, jika sedikit saja sel diletakkan dalam medium agar, maka tiap sel akan tumbuh menjadi koloni yang terpisah. 3ika suspensi sel cukup diencerkan, koloni akan terpisah
dengan dengan baik, baik, sehing sehingga ga masing masingma masin sing g memili memiliki ki kemung kemungkin kinan an tinggi tinggi untuk untuk diturunkan menjadi sel tunggal. 4amun untuk membuat yang demikian, penting untuk mengambil satu tipe koloni yang diinginkan, memasukkan ke dalam air dan menanamnya kembali ke agar. Dengan mengulangi prosedur ini beberapa kali menjamin untuk memperoleh biakan murni. -etode Pengenceran -etode
yang ang
sedikit kit
dap dapat
diperc dipercaya aya adalah adalah pengence pengenceran ran.. 5usp 5uspens ensii dienc diencer erka kan n seri seri dan contoh
masingmasing
pengenceran ditanam pada agar. 3ika 3ika hanya hanya sedi sediki kitt cont contoh oh dari dari peng pengenc encer eran an tert tertent entu u menu menunju njukk kkan an pertu pertumb mbuha uhan, n, diperkirakan bahwa beberapa dari biakan tadi dimulai dari sel tunggal. -etode ini tidak digunakan kecuali jika penanaman pada agar tidak dimungkinkan karena beberapa alasan. /ambaran yang tidak diinginkan dari metode ini adalah bahwa metode ini hanya dapat digunakan untuk isolasi tipe organisme yang dominan dalam populasi campuran.
Terdapat Terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu# 1.
Isolasi Pada Agar Cawan Prinsip pada metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh indi%idu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. setiap koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah diinkubasi berasaldaris atu sel tunggal. Terdapat Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada agar cawan,yaitu# metode gores kuadran dan metode agar cawan tuang. ila metode gore goress
kuad kuadra ran n
dila dilaku kuka kan n
deng dengan an
baik baik
akan akan
meng mengha hasi silk lkan an
teri teriso sola lasi siny nyaa
mikroorganisme, dimana setiap koloni berasaldari berasaldari satu sel. 2.
Isolasi Pada Medium Cair -etode -etode isolas isolasii pada medium medium cair cair dilaku dilakukan kan bila bila mikroo mikroorg rgani anisme sme tidak tidak dapat dapat tumbuh pada agar cawan (medium padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. cair. -eto -etode de ini ini juga juga perl perlu u dila dilaku kuka kan n penge pengence ncera ran n denga dengan n bebe bebera rapa pa seri serial al
pengenceran. 5emakin tinggi pengenceran peluang untuk mendapatkan satu sel semakin besar. 3.
Isolasi Sel Tunggal -etode -etode isolas isolasii sel tunggal tunggal dilakuk dilakukan an untuk untuk mengis mengisola olasi si sel mikroo mikroorga rganis nisme me berukuran besar yang tidak dapat diisolasi dengan metode agar cawan6medium cair. c air. 5el mikro mikroorg organi anisme sme diliha dilihatt dengan dengan menggun menggunakan akan perbes perbesara aran n sekita sekitarr 177 kali. kali. 8emudian 8emudian sel tersebut dipisahkan dipisahkan dengan menggunakan menggunakan pipet kapiler kapiler yang sangat halus ataupun micromanipulator, yang dilakukan secara aseptis.
V. Alat "an Ba#an
1.
;. *.
"lat # 9se tumpul 9se tusuk :ampu bunsen $ak tabung 8orek api +ncubator ahan # -edia padat -& T.5.+." 5.+. 5.& -edia cair ./.:. akteri
VI. VI. $ara $ara Ke Kerj rja a a) -edia Padat -"&. &948<= "/"$ P:"T< Ujung Ujung plot plot diberi diberi kode kode menggu menggunaka nakan n spidol spidol Panaskan Panaskan ose tumpul tumpul hingga hingga berpija berpijar,t r,tunggu unggu sampai sampai dingin dingin "mbil "mbil bakter bakterii dengan dengan ose ose tumpul tumpul lalu lalu /oreskan /oreskan ose ini pada pada permukaan permukaan 4utrien 4utrien "gar, "gar, dimulai dimulai dari dari bagian pinggir cawan petri, secara tidak terputus digerakkan kekiri dan kekanan sampai seluas seperempat luas permukaan media tutup tutup ulasa ulasan n dan tungg tunggu u hingga hingga keri kering ng Dibuka kembali kembali lalu lalu lakukan lakukan penggoresan penggoresan ke arah arah kanan kanan Panask Panaskan an kembali kembali ose ose tumpul tumpul agar agar steri sterill
T.5.+."
Panaskan os ose tu tusuk aga agarr st steril Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api "mbi "mbill bak bakte teri ri dari dari agar agar meng menggu guna naka kan n ose ose tus tusuk uk leta letakka kkan n pada pada tabu tabung ng lalu lalu di gese geserr dal dalam am bent bentuk uk 'ig 'ig 'ag Tusukkan ;* ;* > sampai pai dasar Tutup utup kem kembali bali tabu tabung ng reak reaksi side deng ngan an kapa kapass Pana Panask skan an kem kembali bali ose ose tusu tusuk k aga agarr ster steril il 5.+. Panaskan os ose tu tusuk aga agarr st steril Panaskan Panaskan mulut mulut tabung tabung reaksi reaksi dengan melewat melewatkan kan sekilas sekilas melalui melalui api "mbi "mbill bak bakte teri ri dari dari agar agar meng menggu guna naka kan n ose ose tus tusuk uk Tusukk sukkaa os ose ter terssebut ebut sam sampai pai das dasar ar Tutup utup kem kembali bali tabu tabung ng reak reaksi side deng ngan an kapa kapass Pana Panask skan an os ose tus tusuk uk set setelah elah di diguna gunaka kan n 5.& Panaskan Panaskan ose ose tumpul tumpul agar agar teril teril Panaskan Panaskan mulut mulut tabung tabung reaksi reaksi dengan melewat melewatkan kan sekilas sekilas melalui melalui api "mbil bakteri bakteri dari agar agar menggunakan menggunakan ose tumpul tumpul /oreskan /oreskan di media dalam bentuk 'ig'ag Tutup Tutup kembali kembali tabung tabung reaksiden reaksidengan gan kapas Panaskan Panaskan kembali kembali ose tumpul tumpul setelah setelah digunakan digunakan b) -edia &air /: VII.Pe%&a#aan VIII. III. Kei%'ula ulan I(. I(. Da)ta Da)tarr 'uta* 'uta*a a http#66ya'ura7!.blogspot.com6;71;67*6laporaninokulasibakteri.html
