Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales
Lic. PEDRO ELÍAS PATIÑO MARTÍNEZ Lic. EDGAR ENRIQUE RAMÍREZ PARRA
Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales Universidad de Santander Teléfono (57) 6516500 Ext 253 • Fax (57) 6516492
BUCARAMANGA 2006
Justificación Durante el proceso de formación del estudiante de la UDES, los conceptos teóricos requieren ser corroborados mediante la experimentación los cuales muchos de ellos se privilegian al interior de las prácticas de laboratorio. Para dichas prácticas el alumno debe utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos químicos los cuales son preparados por laboratoristas o docentes. La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos químicos requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parámetros para cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de prepararlos y cuidados básicos. El presente manual permitirá a los laboratoristas o docentes tener una guía para la preparación de las diferentes soluciones utilizadas en las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales
Pedro Patiño
CUIDADOS BASICOS Y NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL La preparación de las soluciones es un Proceso que requiere todos los cuidados básicos posibles y el cumplimiento de normas de Bioseguridad personal, ya que en dicha preparación se esta expuesto a químicos que son altamente tóxicos y nocivos para la salud humana CUIDADOS BASICOS • • • • • • •
Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente nivelada y calibrada. Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar completamente limpia. La vidriería donde se preparan los soluciones debe estar completamente limpia y en algunos casos estéril. Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos oscuros para evitar procesos de oxidación por acción de la luz. Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre, concentración, fecha de preparación, fecha de vencimiento y código de riesgos. Siempre se deben mezclar lentamente los ácidos fuertes sobre el agua. La preparaciones de ácidos fuertes o reactivos volátiles debe hacerse en las campanas extractoras de gases. NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL
• • •
Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la preparación que se realice Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que se prepare una solución. No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.
•
En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de la zona de preparación de reactivos o fuera de esta y consultar un médico.
SOLUCIONES AGUA DE BROMO Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de bromo en tetracloruro de carbono. Cuidados:
solución altamente tóxica para el organismo
1
Uso: Para determinación de compuestos orgánicos ACETO-ORCEINA Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de Ácido Acético Glacial y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullición por 2 minutos, dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses Cuidados: Tóxicos
1y corrosivos
Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas)
ACETO –CARMIN Pesar 0,5 gr de carmín, adicionarle 45 ml de ácido acético glacial y completar con 55 ml de agua destilada Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas)
Cuidados: Tóxicos
1
y corrosivos
ACIDO CLORHIDRICO 2.5 N Medir 20.75 ml de HCl 37%, aforar a 100 ml con H2O destilada
1
Cuidados: Tóxicos y corrosivo Uso: En pruebas de división celular (mitosis) ALCOHOL- CETONA Medir 70 ml de Alcohol Etílico absoluto y completar a 100 ml de solución con Acetona pura Cuidados: Comburente Uso: Decolorante para la coloración de Gram
ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y completar a 100 ml con agua destilada Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
Uso: Para titulación ácido–base y pruebas cualitativas de pH.
ACIDO SULFURICO 1 M Medir 49 ml de Ácido Sulfúrico destilada
Cuidados: Tóxicos
1
y aforar a 1000 ml con agua
corrosivos
Uso: Para titulación ácido–base ACIDO ACETICO 1 N Medir 60.05 ml de ácido acético 100% y aforar a 1000 ml con agua destilada.
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
Uso: Pruebas cualitativas de pH.
AZUL DE METILENO 1% Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada hasta obtener una solución uniforme
1
Cuidados: Tóxicos Uso : Para tinción de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos vegetales, pruebas de difusión celular
ALCOHOL ACIDO 3% Medir 97 ml de alcohol etílico absoluto, adicionarle con mucho cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de Ácido Clorhídrico al 37%
Cuidados: Comburente y corrosivos Uso: Para coloración de Microbiológica ACIDO OXALICO 1 N Pesar 6,3 gr de ácido oxálico y aforar a 100 ml con H2O destilada Uso: Para titulación de ácido-base ACIDO NITRICO 3M Medir 50 ml de Agua Destilada, adicionarle 29.1 ml de ácido nítrico al 65% luego completar a 100 ml con H2O destilada
Cuidados: Tóxicos y corrosivos AZUL DE BROMOTIMOL Pesar 0.1 gr. de azul de bromotimol y diluirlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador para titulación ácido-base
BARFOED Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H2O, luego adicionarle 1.8 ml de ácido acético glacial
Cuidados: Tóxicos y corrosivos Uso: Diferenciación los Monosacáridos reductores de los Disacáridos reductores BIAL Pesar 1.5 gr. de orcinol y disolverlo en 500 ml de HCl concentrado y añadir 20 gotas de Fe Cl3 1%
Cuidados: Tóxico y corrosivo Uso: Para identificar pentosas BIURET Pesar 3 gr. de CuSO4 .5H2O, adicionarle 9 gr. de tartrato de sodio y potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Añadir 5 gr. de KI y completar a 1000 ml con NaOH . (NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua) Uso: Para determinación de proteínas(Enlace peptídico)
Cuidados: Tóxico y corrosivo BENEDICT Solución A: Pesar 173 gr. de Citrato de sodio, adicionarle 100 gr. de Na2CO3 completar a 800 ml de H2O destilada. Filtrar y completar hasta 850 ml de H2O. Solución B: Pesar 17.3 gr de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua destilada Disolver suavemente la solución B en la A agitando continuamente. Uso: Para determinación de carbohidratos reductores
Cuidados: Tóxico y corrosivo
BUFFER DE FOSFATOS Solución I: Pesar 13.8 gr. De NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de H2O destilada Solución II: Pesar 35.85 gr. De Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de H2O destilada Mezclar 212.5 ml de solución I + 37.5 de solución II y aforar a 500 ml con H2O destilada
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
Uso: Extracción de DNA BUFFER LISIS II Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M pH 8.0 y adicionarle 0.438 gr NaCl y aforar a 1000 ml con agua destilada
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
Uso: Extracción de DNA
BUFFER LISIS I Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100, adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. pH 7.5 y 5 ml de MgCl2 1M aforar a 1000ml con H2O destilada destilada. (Tris-HCl 10mM. PH 7.5)=0.15756 gr 100 ml s/n Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x 100+ 5 ml tris + 2.5 ml Mgcl2 1M).
Cuidados: Tóxicos
1
Uso: Extracción de DNA
corrosivos
BÚFER DE EXTRACCIÓN Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 100 mM, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mM, BMercaptoetanol 10 mM y SDS 1.3%. Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
Uso: Extracción de DNA BÚFFER DE DILUCIÓN (TE) Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 50 mM, EDTA 10 Mm Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar
1
Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA BÚFFER TBE 5X Mezclar las siguientes sustancias: Pesar 54 gr. de Tris Base, adicionarle 20 ml de EDTA 0.5 M y 27,5 gr de Ácido Bórico Completar con agua destilada en balón aforado a la cantidad necesaria, posteriormente autoclavar
1
Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA
BUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA Solución A : Fosfato ácido de disodio (Na2HPO4 ) 0.2 M Solución B : Ácido cítrico (C6H8O7. H2O) 0.1 M BUFFER pH 5.0 (515 ml S/N A + 485 ml S/N B). BUFFER pH 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B) BUFFER pH 8.0 (972,5 ml S/N A + 27.5 ml S/N B). CLORURO DE SODIO 0.1 M Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membranas
DAMASHECK Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15 gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H2O destilada. Adicionarle 3 gotas de formol 37 % Uso: Para recuento de reticulocitos | DRABKIN Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de bicarbonato de sodio (NaHCO3) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio (K3Fe(CN)6) Completar a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Para Recuento en Hematológico
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
2,4 DINITROFENILHIDRIZINA Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H2SO4 concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol absoluto, decantar y utilizar el filtrado. Uso: Indicador
Cuidados: Tóxicos
1
DISOLUCION DE FERROCIANURO Pesar 1.65 gr. de K3(Fe(CN)6) recristalizado, adicionarle 10.6 gr. carbonato de sodio anhídrido y aforar a 1000 ml de H2O destilada. Guardar en frasco oscuro (duración 2 meses) . Uso: Indicador
Cuidados: Tóxicos
1 ETANOL 0.6 M
Medir 34.9 ml de alcohol etílico absoluto y completar a un 1 litro de solución con H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana. ERLICH (PRUEBA) Ácido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solución de NaNO3 0.5% y Na2CO3 FOUCHER 25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H2O y 10 ml de cloruro férrico al 10 %
FEHLING
A
Pesar 34.6 gr. de CuSO4 .5 H2O (vitriolo azul) de H2O destilada
y disolverlo en 500 ml
1
Cuidados: Tóxicos Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para determinación de azucares reductores FEHLING
B
Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le añaden 62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H2O
Cuidados: Tóxicos
1
y corrosivo
Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinación de azucares reductores FENOLFTALEINA Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 % Uso: Indicador Ácido-Básico Cuidados: Tóxicos
1 GLUCOSA 0.1 M
Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana. GLICEROL 0.6 M Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana.
HAYEN 2.5 gr. de sulfato de sodio 0.5 gr. de cloruro de sodio 0.25 gr. cloruro de mercurio completar a 1000 ml de H2O HIDROXIDO DE SODIO 1M Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Nota: La disolución del NaOH en el agua se debe realizar en la cámara extractora de gases Uso: Diferentes usos, principalmente Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo JUGO GASTRICO ARTIFICIAL Medir 40 ml de Ácido Acético 0.1 N, adicionarle 15 ml de Ácido Clorhídrico 0.1 N y aforar a 100 ml con agua destilada Uso: Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo
LUCAS Pesar 17 gr. de ZnCl2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en baño frío, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen y guardar en nevera. Uso: Diferenciación de alcoholes primarios, secundarios y terciarios Cuidados: Tóxico
1
y corrosivo
LUGOL Tejidos vegetales 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 100 ml de agua destilada
Parásitos 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 300 ml de agua destilada
Uso: Colorante
Cuidados: Corrosivo LIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H2O destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37% MILLON Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO3 concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja sedimentar y se decanta (preparación en cámara extractora ).
Cuidados: Corrosivo
MOLISCH Pesar 50 gr. de α naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95% (estable 1 semana) Uso: Para determinación general de Azucares Cuidados: Tóxico
1
y corrosivo
MEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA) Medir 500 ml de H2O destilada y adicionar lentamente 250 ml de H2SO4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le mezcla dicromato de potasio y finalmente sé afora a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Limpieza de material con restos carbónicos
Cuidados: Corrosivo
METIL NARANJA Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % o en 100 ml de H2O destilada Uso: Indicador Ácido Básico Cuidados: Tóxico
1 NESSLER
Pesar 15 gr. de HgI2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H2O. Esta disolución se vierte en el vaso con HgI2 , disolver muy bien con agitación. En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H2O Luego se le adiciona la otra solución y se agita, al final decantar y separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo) Cuidados: Tóxico
1
NITRATO DE PLATA
0.1 N
Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua destilada. Uso: Determinación de cloruros (formación de un precipitado blanco) Cuidados: Tóxico
1
y corrosivo
NYLANDER Pesar 2 gr. de nitrato dibásico de bismuto y adicionarle 4 gr. de tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve para disolución completa de la sal , se enfría y se separa por filtración.
NINHIDRINA 0.2% Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona Uso: Determinación del grupo amino de aminoácidos y proteínas
Cuidados: Tóxico
1
y corrosivo
NEGRO DE ERICROMO Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 % (o triturarlo con solución al 1 % de cloruro de sodio) Uso: Indicador
Cuidados: Tóxico
1
O-TOLUIDINA Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego disolverlos hasta completar a 1000 ml con ácido acético al 95 %
Cuidados: Tóxico
1 ROJO CONGO 5%
Pesar 5 gr. de rojo congo y disolverlo en 100 ml de H2O
destilada
Uso: Para reconocimiento de lípidos Cuidados: Tóxicos
1 ROJO DE METILO
Pesar 0.1 gr. de rojo de metilo y completar a 100 ml de alcohol etílico al 96 % Uso: Indicador Ácido Básico Cuidados: Tóxico
1 REACTIVO DE SCHIFF
Pesar 2 gr. de fucsina básica y disolverlo en 400 ml de H2O hirviendo, enfriar a 50 °C luego añadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de metasulfito de potasio, 1 gr. de carbón activado filtrar y adicionarle 10 ml de HCl 2N Almacenar en frasco oscuro y en nevera SELIVANOFF Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de Ácido Clorhídrico al 20% Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa)
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos
SOLUCION DE RINGER(Holfretter) ( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H2O destilada Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H2O destilada (1:9)
SOLUCION PATRON DE LIPIDOS Pesar 1 gr. de ácido esteárico y disolver en 100 ml de cloroformo Uso: Determinación de lípidos
Cuidados: Tóxico
1
corrosivos
SOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l ) Pesar 3.6 gr. de KIO3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H2O destilada, añadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de solución. Conservar a 4 °C. Uso: Determinación de lípidos
Cuidados: Tóxicos
SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS MICROSCOPICAS Proporción 1: 3 1 ml de ácido acético en 3 ml de alcohol etílico
SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO4 Pesar 0.05745 gr. de KmnO4 y disolverlo en 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría y calibración del espectrofotómetro
Cuidados: Tóxicos SOLUCION 30 ppm DE K2Cr2O7 EN KOH 0.05 N Pesar 2.8 gr. de KOH y 0.030 gr de dicromato de potasio (K2Cr2O7) y llevarlo a 500 ml de solución con agua destilada. Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría
Cuidados: Tóxico
1
corrosivos
SOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO4 Pesar 71.8 mg de KMnO4 y llevar a 500 ml de solución con H2O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría
Cuidados: Tóxico
1 SACAROSA 0.1 M
3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solución con H2O destilada Conservar en Nevera a 8 grados
SUDAN III 0.2% Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etílico al 70%, se mezclan(calentando en baño de María a 90 grados centígrados) y se dejan en reposo durante 24 horas. Uso: Para coloración de cutícula y gotas de grasa en células vegetales
Cuidados: Tóxico
1 SUDAN III
1 gr. de sudan en polvo +30 ml de ácido acético y completar con 70 ml de H2O. (calentar para lograr una mejor disolución) Uso: Para determinación de lípidos por solubilidad en muestras biológicas
Cuidados: Tóxico
1
SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER pH 7 Pesar 13.3 gr. de Na2HPO4 y 4.3 gr. de ácido benzoito, llevar a 250 ml de H2O destilada, calentar y añadir 0.2 gr. de almidón y 5 ml de H2O destilada y completar a 500 ml con H2O destilada y conservar a 4 °C. SULFATO DE COBRE (CuSO4) 2000ppm Pesar 2 gr. de CuSO4 y llevar 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría
Cuidados: Tóxico
1
SULFATO 100 ppm Pesar 0.1825 gr. de K2SO4 en un litro de H2O destilada TIONINA Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y completar a 100 ml con H2O destilada. Uso: Para coloración de tejidos vegetales
1
Cuidados: Tóxico
TOLLENS Solución A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada Solución B: Preparar 20 ml de NaOH al 10% Mezclar Solución A y Solución B, luego adicionarle amoniaco concentrado hasta disolver el precipitado. Guardar preferiblemente en frasco oscuro Uso: Para formación del espejo de plata
Cuidados: Tóxico
1
corrosivos
TURK 100 ml de Ácido acético al 3% + 3 gotas de azul de metileno TIMOL AL 1 % Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico absoluto Uso: Indicador de pH
Cuidados: Tóxico
1
TIMOLFTALEINA
Pesar 0.1 gr. de tiomolftaleina en 100 ml de alcohol etílico al 50 %
TANRED Solución A: 18 gr. KI + 200 ml de H2O destilada. Solución B: 6.75 gr. de HgCl2 +200 ml de H2O destilada La solución B se disuelve sobre la A, agitar hasta que desaparezca el naranja , completar con ácido acético glacial hasta 500 ml.
Cuidados: Tóxico
1 VIOLETA DE METILO
Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador de pH
WRIGHT Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a poco 60 ml de Metanol Analítico y homogenizarlo, dejarlo en maduración por lo menos ocho (8) días. Filtrarlo cada dos meses Uso: Colorante para identificación de Células Sanguíneas
Cuidados: Tóxico
1
Bibliografía Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos químicos 20052007. Frankfurter Strabe 250 64293 Darmstadt.GERMANY. J.T.Baker.Catalog 2004-2005.Tyco Specialty Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA.
Products.2003
Promega, Life Science Catalog-2004 Merck, Productos de Laboratorio para la práctica-IndicadoresSustancias patrón primario. Patiño, Pedro; Edgar Ramírez, Manuel de Preparación de Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002 Plumer, David; Introducción a la Bioquímica Práctica. McGraw Hill
