Medios de montaje: conservación permanente
Para los análisis microscópicos, los cortes de tejido teñidos, las pr eparaciones ginecológicas, las muestras bacteriológicas y las extensiones de sangre se montan normalmente con medios de montaje acuosos o no acuosos y se cubren c on un cubreobjetos si tienen que conservarse durante un p eriodo prolongado. Esto permite una conservación estable y un almacenamiento prácticamente permanente de la muestra. También asegura el cumplimiento de las pautas internacionales, las cuales exigen que las muestras clínicas preparadas para diagnóstico se conserven durante 10 años. La elección del medio de montaje depende del protocolo, y debe contener disolvente o agua, que se aplica a la muestra antes del montaje. La cartera de reactivos de Merck para microscopio incluye una completa selección de medios de montaje acuosos y no acuosos. Desarrollados y producidos de acuerdo con los mayores niveles de calidad, los medios ofrecen una extraordinaria estabilidad y solubilidad, así como excelentes propiedades refractivas. Todos nuestros medios de montaje son productos para DIV con certificación CE; por ende, son perfectamente adecuados para diagnóstico clínico.
Medios de montaje acuosos
Ciertas aplicaciones en microscopia, como la tinción fluorescente o la citoquímica enzimática, requieren el uso de medios de montaje acuosos. En este método, los portaobjetos se montan o bien directamente desde la etapa acuosa o bien después d e un breve sec ado. Los medios de montaje acuosos deben utilizarse especialmente con muestras preparadas para determinaciones enzimáticas y lipídicas. Esto evita que las muestras tengan que deshidratarse con series ascedentes de alc ohol.
Nuestra gama de Medios de montaje acuosos consiste en:
Aquatex® (agente de montaje montaje acuoso) para microscopia Gelatina para microbiología Glicerol para microscopia de fluorescencia Gelatina de glicerol según Kaiser para microscopia Sorbitol F líquido (jarabe de sorbitol que no cristaliza) E 420
Medios de montaje no acuosos
Las muestras completamente deshidratadas, como los cortes de tejidos para histología, deben montarse con un medio de montaje anhidro y un cubreobjetos. Estos medios de montaje anhidros protegen la muestra y aseguran el brillo óptimo del colorante.
Nuestra gama de medios de montaje acuosos consiste en:
Nuevo medio de montaje anhidro DPX
Medio de montaje rápido Entellan® Nuevo medio de montaje rápido Entellan® Entellan® nuevo para cubreobjetos M-Glas™ cubreobjeto líquido Neo-Mount® medio de montaje anhidro<
TIPOS DE PORTAOBJETOS Y UNA BUENA SELECCIÓN. Home » Sin Categoría » Tipos de portaobjetos y una buena selección. PreviousNext
Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada plana de vidrio de diferentes dimensiones (típicamente 75 por 25 mm y aproximadamente 1 mm de espesor), se utiliza para fijar muestras que posteriormente serán examinadas con un microscopio. El procedimiento a seguir es colocar la muestra (tejido, células, microorganismos, etc.) en la diapositiva o portaobjetos, y luego ambos se insertan juntos en el microscopio para ser observados.
Dimensiones y tipos Existen una gran variedad de portaobjetos tanto en dimensiones como en aplicaciones tales como los de medida estándar (75 X 25 mm) y fabricados en vidrio soda, para aplicaciones diagnósticas y de rutina en laboratorios de histología y patología.
Los portaobjetos son generalmente hechos de vidrio óptico de alta calidad, como el vidrio borosilicato, pero también se utilizan algunos plásticos o cuarzos fundidos, los cuales son utilizados cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en microscopía de fluorescencia. Mientras que los portaobjetos de fricción son los más comunes, hay varios tipos especializados tales como:
Portaobjetos estándar con bordes cortados o bordes esmerilados en un ángulo de 90 o, estos últimos recomendados si se trabaja con material infeccioso ya que presentan los bordes mucho más lisos y libres de rebabas minimizando el riesgo de sufrir accidentes.
Portaobjetos con banda mate, en uno de los extremos presenta una banda mate de vidrio esmerilado para la rotulación y la perfecta identificación de las muestras.
Portaobjetos con cavidades, con 1 ó 2 cavidades para el montaje permanente de especímenes gruesos (insectos, minerales) o para aplicaciones diagnosticas en las que se requiere visualizar células o partículas en suspensión.
Portaobjetos con bandas de rotulación de color , ideales para la identificación de las muestras mediante código de color, técnica de preparación, departamento del que proceden, etc.
Portaobjetos diagnostica, especialmente diseñados para llevar a cabo técnicas de inmunofluorescencia presentan un recubrimiento hidrofóbico y diferentes números de campo de reacción (1, 2, 3, 6) permitiendo el análisis de un mismo tipo celular con distintos anticuerpos o distintas diluciones del mismo anticuerpo sin peligro de contaminación cruzada.
Portaobjetos de tamaño especial, permiten el montaje de muestras de gran tamaño o varios cortes de tejido en una misma preparación. La elección de un correcto tipo de portaobjeto va a depender del tipo de técnica de montaje con la que se esté trabajando, así como la aplicación y el análisis posterior. A continuación se describe brevemente algunos tipos de montajes:
Montaje El montaje de las muestras en el microscopio es a menudo crucial para la visión exitosa. El problema se ha prestado mucha atención en los últimos dos siglos y es una zona muy desarrollada con muchas técnicas especializadas y, a veces muy sofisticadas.
Montaje en seco En un montaje en seco, el tipo más sencillo de montaje, el objetivo no es más que colocar en la diapositiva la muestra a analizar. Un cubreobjetos se puede colocar en la parte superior para proteger la muestra y el objetivo del microscopio. Este montaje se puede utilizar con éxito para ver las muestras como el polen, plumas, pelos, etc., también se utiliza para examinar las partículas atrapadas en los filtros de membrana transparente. Se recomienda el uso de portaobjetos estándar.
En fresco o montaje temporal En un montaje húmedo, la muestra se coloca en una gota de agua u otro líquido contenido entre el portaobjetos y el cubreobjetos por la tensión superficial. Este método se utiliza comúnmente para ver los organismos microscópicos que crecen en el agua del estanque o de otros medios líquidos,
especialmente cuando el estudio de su movimiento y el comportamiento. Se debe tener cuidado para eliminar las burbujas de aire que puedan interferir con la visualización y dificultar los movimientos de los organismos. También se utiliza para investigaciones rápidas que no se requiera un registro permanente, así como para examinar líquidos fisiológicos como la sangre, la orina, la saliva, el semen, y la secreción vaginal. En este tipo de montaje se recomienda el portaobjetos con cavidades.
Montaje preparado o montaje permanente Para la investigación patológica y biológicas, la muestra por lo general se somete a una preparación histológica compleja que puede involucrar el corte en secciones muy finas con un microtomo, que se fijan en la superficie del portaobjetos, la eliminación de cualquier agua contenida en ella, la tinción partes específicas del mismo, la limpieza para que sea transparente, e impregnando o infiltrante con alguna sustancia sólida transparente. Como parte de este proceso de la muestra por lo general termina bien conectado a la diapositiva. Para este tipo de montaje se requieren portaobjetos tratados, ya sea con poli-lisina o con recubrimiento hidrofóbico. En Metrix laboratorios contamos con una amplia gama de portaobjetos, cubreobjetos, para más información
[email protected]
Montaje de cubreobjetos El cubreobjetos es casi lo que más se necesita en una muestra para microscopio para proteger la delicada sección y suministrar un camino óptico claro. Elegir un tamaño que solo cubra la sección. Los tamaños estándar son 22x22 mm, 20x30 mm, 20x40 mm, etc. Los cubreobjetos vienen en una serie de grosores designados como los siguientes: Designación Grosor
#1
0.130.17 m
#1½
0.160.19 m
#2
0.170.25 m
La mayoría de los objetivos de los microscopios están corregidos ópticamente para el cubreobjetos para un grosor único- generalmente 0.17 mm o #1½- de modo que hay que asegurarse esto. El grosor del cubreobjetos están estampados sobre los objetivos bien como "17" o "0.17". Cuando se hace en microscopios extremadamente críticos en tres dimensiones (deconvolucion o microscopio confocal) el grosor del cubreobjetos debería ser medido con un micrómetro y estandarizado excatamente a 0.17 mm. El cubreobjetos está pegado alobjeto con un cemento soluble en agua, alcohol, o xileno, teniendo un índice de refracción próximo al de este cristal (1.515). Hay un gran número de adhesivos de montaje comerciales incluyendo Permount, Bálsamo de Canadá, Merkoglas, y otros. Los cubreobjetos de plástico pueden ser comprados y usados, sin embargo debido a la refringencia del plástico, la técnica óptica de DIC no trabajará.
Procedimiento
Mantener los portaobjetos en xileno mientras le toca el turno de ser procesado. Debes guardar los portaobjetos en contenedores con muecas para un manejo fácil. No permitir que los discos se sequen antes de añadir el medio de montaje o los cortes se dañarán inrreversiblemente. 1.-Quitar el portaobjetos y con un Kimwipe limpiar suavemente alrededor de los bordes para quitar el exceso de xileno. 2.- Añadir 1-3 gotas de medio de montaje. El cemento debe estar bastante líquido pero no acuoso. si el medio de montaje está demasiado espeso, diluir en el solvente apropiado (xileno, alcohol, agua). 3.- Cuidadosamente poner el borde del cubreobjetos (margen corto) sobre el portaobjetos y con un puntero o un forceps bajar lentamente hasta que toque la parte superior del adhesivo. Parar un momento para permitir que se quiten las burbujas de aire. 4.- Continuar bajando el cubreobjetos hasta que todas las gotas de adhesivo toquen el cubreobjetos, entonces detenerse otra vez para permitir que las gotas se
mezclen en una. El objetivo es permitir al adhesivo que fluya sobre los cortes sin formar burbujas. las burbujas son extremadamente difíciles de eliminar. 5.- Una vez el adhesivo a formado una capa contínua, dejar que el cubreobjetos se acomode en su lugar en la parte superiror del portaobjetos. 6.- Poner el portaobjetos en una placa calefactora a 42ºC o en un horno y dejar que se seque como mucho overnight. usar una toalla de papel para quitar el exceso de pegamento sobre el portaobjetos en la bandeja calefactora.
Medios de montaje para cubreobjetos
La siguiente tabla es una lista corta de medios de montaje habituales, sus sinónimos, y (si es posible) sus usos apropiados. Tener enecuenta que, hasta cierto punto, la elección del medio de montaje es una preferencia personal basada en historia y corte. Medio de montaje Compañía* Solubilidad** Bálsamo de Canadá
Fisher, Sigma
Permout
Fisher, EMS, y otros
Comentario
X, T
Históricamente importante pero raramente usadodebido a su coste y mejor reemplazo. Endurece y amarillea con los años.
X, T
Buen medio para propósitos generales. Puede volverse amarillo después de décadas de almacenamiento.
DPX
NA
X, T
Usado para aplicaciones en fluorescencia. Consiste en dibutilfeniltalato (10 ml) + poliestireno (25 g) + xileno (70 ml).
DEPEX
EMS
X, T
Reemplazo para el Bálsamo de Canadá.
Merkoglass (EM Glass)
Merck, EMS
X, T
Buen medio para propósitos generales. Preferido para portaobjetos teñidos in situ co NBT. Endurece en una hora a temperatura ambiente. Muestra alguna retracción.
Eukitt
EMS
X, T
Buen medio de montaje para propósitos generales.
BioMount
EMS
X, T
Bueno para portaobjetos teñidos con inmunogold/silver.
X, T
Buen medio de montaje para propósitos generales. Se presenta en dos viscosidades, "60" baja y "280" alta.
S/P
X, T
Buen medio de montaje para propósitos generales. Se presenta en dos viscosidades, "60" baja y "280" alta. Puede sustituir al cubreobjetos.
PolyGlass
P
X, T
Cubreobjetos líquido. Puede reemplazar al cubreobjetos.
Poly-Mount
P
X, T
Buen medio de montaje para propósitos generales.
Pro-Tex
S/P
X, T
Medio de montaje para propósitos generales.
X, T
Medio de montaje para propósitos generales. Puede ser eliminado mediante calentamiento del portaobjetos. disponible en varios indices de refracción desde 1.593 hasta 1.704.
X, T
Medio de montaje para fines generales. "Piccolyte" es el nombre genérico usado para una variedad de polímeros de -pinene.
Agua
Bueno cuando el tejido, la tinción o la matriz no toleran el xileno, por ejemplo material fresco o cortes en plástico. Usado para inmunolocalización. Es propietaria de la fórmula original de Gilson.
Cytoseal 60
VWR, T Cytoseal 280 S/P Accu-Mount 60 Accu-Mount 280
Meltmount (Gargille)
Coverbond (Piccolyte")
Euparal
Plastic UV Mount
Medio de montaje UV
EMS
S/P
CBS
P
EMS
Bueno cuando el tejido, la tinción o la matriz no toleran el xileno, por ejemplo material fresco o cortes en plástico. Usado para inmunolocalización. Poner una gota o Alcohol, agua dos de medio sobre los cortes, añadir el cubreobjetos, y endurecer bajo luz UV. Una lámpara portátil de UV de longitud de onda larga (UVL21) funciona bien. Agua
Bueno cuando el tejido, la tinción o la matriz no toleran el xileno, por ejemplo material fresco o cortes en
plástico. Usado para inmunolocalización. Endurece bajo luz UV. Tiene el mismo índice de refracción que el metacrilato JB-4 Agua
Usado en inmunolocalización fluorescente o en criosección en fresco.
Agua
Usado en inmunolocalización fluorescente o en criosección en fresco. Diseñado para inmunolocalización HRP y AP. No es para ser usado con cubreobjetos, aunque se le puede añadir un cubreobjetos usando Permount espués de haber solidificado el Cristal/Mount.
Gel/Mount
(Biomeda) EMS; Fisher
Agua
Utilizado para inmunolocalización fluorescente o criosección en fresco, especialmente bueno para detección de ficobiliproteínas ya que no contiene glicerina. Usar con un cubreobjetos y rodear con laca de uñas.
Aqua-poly/Mount
P
Agua
Usado para inmunolocalización fluorescente o criosección en fresco.
Fluoromount-G
Cristal/Mount
EMS
(Biomeda) EMS; Fisher
Agua destilada---------100 ml Glicerina----------------100 g Gelatina------------------17 g Fenol----------------------1 g Gelatina de glicerina
NA
Agua
Mantener a 4ºC y ablandar sólo pequeñas porciones. Calentar a 37ºC, aplicar a material fresco sobre portaobjetos. Bueno para hacer preparaciones semipermanentes de material fresco. El cubreobjetos puede ser eliminado sumergiendo el portaobjetos en agua caliente. Agua destilada----40%
Medio de Goma Arábiga
NA
Agua
Glicerol-----------20%
Goma Arábiga----40% Azida-----------0.02% Mantener a 4ºC. Usado para montar secciones acuosas. Los tejidos deben ser transferidos directamente a Goma Arábiga. Excepto por la azida, esta es la fórmula original de Farrants Glicerol----90% TBS-------10% Glicerol/TBS
NA
Agua
Azida----0.02% Mantener a 4ºC. Usada para montar cortes tratados para inmunocitoquímica.
Parafina/Permount NA
Vaspar
Fingernail polish
NA
NA
NA
Mezclar 1:1. Usada para sellar bordes de cubreobjetos para "spodograms" y otros especímenes relativamente secos.
NA
Mezclar vaselina y parafina fundida 1:1. Usada para sellar los bordes de cubreobjetos para preparaciones en fresco.
NA
Usado para sellar los márgenes de cubreobjetos para preparaciones en fresco. Usado especialmente para preparaciones en inmunolocalización.
