PRODUCCIÓN DE METAHEMOGLOBINA POR NITRITOS Y EFECTO PROTECTOR DEL AZUL DE METILENO Universidad Nacional Autónoma Autónoma de México, Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán. A., Equip
meta!emo emo"lo "lo#in #inemi emia a es una una en$er en$ermed medad ad provoc provocad ada a por por el exces exceso o de nitra nitratos tos,, ésta ésta RESUMEN: a meta! en$ermedad en$ermedad cl%nica, sur"e de la excesiva conversión de !emo"lo#ina a meta!emo"lo#ina, meta!emo"lo#ina, la cual, es incapa& de enla&ar ' transportar ox%"eno. a meta!emo"lo#ina se $orma cuando la molécula de !emo"lo#ina se oxida del Fe () a Fe*).El o#+etivo en ésta sesión experimental $ue conocer la técnica de la determinación más empleada en el estudio de la producción de meta!emo"lo#ina por nitritos en ratas istar, as% como determinar la presencia de meta!emo"lo#ina $ormada por nitritos, esto al administrar nitrito de sodio, para as% determinar los e$ectos, todo esto para comparar con el e$ecto protector del a&ul de metileno so#re la !emo"lo#ina -ala#ras clave Meta!emo"lo#ina, a&ul de metileno, nitratos ' nitritos, em#utidos
ABSTRACT:
INTRODUCCIÓN a carne puede prote"erse de la putre$acción #acteriana mediante la adición de soluciones concentradas de sal com/n. -ero la carne que está conservada /nicamente con cloruro sódico toma un color pardo0verdoso atri#ui#le a la conversión de la !emo"lo#ina en meta!emo"lo#ina. -ara que se manten"a el color ro+o se a1ade al cloruro sódico para sala&ones una peque1a cantidad de nitrito o nitrato, parte del cual se trans$orma lentamente en nitrito. El nitrito $orma nitroso!emo"lo#ina o nitroso !emocromó"eno, de color ro+o oscuro. as concentraciones de nitrito sódico en sala&ones var%an del 2.23 al 425, dependiendo del tratamiento que se dé ' del tipo de carne. os nitratos se emplean como aditivos en la $a#ricación de productos cárnicos curados ', en menor medida, en la conservación del pescado ' en la producción de queso. Además de de proporcionar proporcionar color color adecuado adecuado a la carne, los nitritos tienen otros e$ectos so#re los alimentos retrasa el proceso de oxidación de los l%pidos, con la consecuente disminución del caracter%stico olor de enranciamiento, produce una ma'or $irme&a en la textura, ' provee a los alimentos de un importante e$ecto antimicro#iano 6especialmente $rente a Clostridium #otilinum ' sus toxinas7. Además de de como aditivos, aditivos, los los nitratos como como sustancias de ori"en natural pueden encontrarse en productos cárnicos $rescos, lec!e ' productos lácteos, cereales, $rutas, #e#idas alco!ólicas ' verduras. En la ma'or%a de estos alimentos se encuentran en #a+as concentraciones, "eneralmente in$eriores a 42 m"89" ' rara ve&
exceden los 422 m"89". Sin em#ar"o, las verduras, principal aporte de estos compuestos en la dieta +unto con los em#utidos, presentan unos contenidos que oscilan entre (22 ' (.:22 m"89", variando en $unción del procesado del alimento, uso de $ertili&antes ' condiciones de crecimiento. a toxicidad del nitrato en !umanos se de#e principalmente a que una ve& rea#sor#ido e+erce en el or"anismo la misma acción que so#re la carne conservada, es decir, trans$orma la !emo"lo#ina en meta!emo"lo#ina, pudiendo producir cianosis. Se !an producido repetidamente intoxicaciones de#ido a una cantidad excesiva de nitrito sódico en las carnes en conserva, principalmente de#ido a una mala !omo"enei&ación entre in"redientes ' aditivos. Cantidades de 2.:04 " de nitrito producen en el !om#re intoxicaciones li"eras, de 40( " intoxicación "rave ' 3 " intoxicación mortal. -or ello, la sal para sala&ones no de#e nunca contener más de 2.:02.;5 de nitrito sódico, ' la cantidad de sal empleada no de#e so#repasar los 4: m" por cada 422 " de carne tratada.
MATERIALES Y MÉTODOS.
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RESULTADOS Tabla 2. Resultados de las absorbancias en cada uno de los lotes en muestra sanguínea de rata wistar EQ 1
L T I
2 3 5 ! "
III II III II III II
A1
A2
0.01 0.02 5 0.1#! 0."5 0."" 0.325 0.3 0.3 0.50 $ 0
0.21 0.0" ! 2 0.20 0.1#! 0.122 0.121 0.203 0.23 0.20 5 $
% &t'b 150 100
A3 0.2!! 0.233 0.1$5 0.5" 0.130 0.31" 0.13"
0.0#0
% &eta'emoglobina
0
Lote
0.12
ote4B
47.27 + 35.54 2
*Cálculos: Para los siui!"#!s r!sul#a$os s! usaro" las %&r'ulas: g ¿= A 3∗37 . 4 ()# 100 mL
> ?.?3@ (.??( 3 ( >>> @.43( * >> .(?* 3 >>> (4.*4@ : >> 3.@;( ; >>> 44.@::@ >> >> :.4(* :.*42
DISCUSIÓN
g ¿=( A 1− A 2 ) 23 . 4 M()# 100 mL de meta!emo"lo#ina ote =esultado > > 03.2* 04.4(*( >>> 04.(;*; >> ;.;(; >>> 4:.4;*( >> 3.*; >>> (.(;?@ >> >> 3. ;.@2?3
M!#a()# !" sa"r!+,
MHbt ¿∗100 Hbt
de meta!emo"lo#ina en san"re ote =esultado 5 > > 3.( *.:3 >>> 43.:22 >> ?(.( >>> 4.4(
ote*B
=40.905
98.18 + 93.16 + 128.2 + 92.72
ote(B
50
4 19.14 + 71.72+ 14.5 3
=103.65
=35.12
a meta!emo"lo#inemia es un trastorno que se da $recuentemente pues se caracteri&a por la oxidación del !ierro 6>>7 a !ierro 6>>>7 presente en el "rupo !emo de los "lo#ulos ro+os estos tienen más a$inidad por el ox%"eno que impide que otros ór"anos o te+idos usen al ox%"eno lo cual puede provocar una intoxicación severa que puede ser mortal. En la práctica se llevó a ca#o la cuanti$icación de meta!emo"lo#ina presente en ratas istar ' como el a&ul de metileno puede $un"ir como protector. -ara la experimentación se requirió tener * lotes en el cual 4 $un"ió como el #lanco en donde las ratas tendr%an su dieta normal #asada en a"ua con nutri cu#os, el ( ' el * se le dar%a una dieta rica en em#utidos, con la $inalidad de o#servar como el consumo de alimentos ricos en nitritos pueden $avorecer la $ormación de meta!emo"lo#ina, sin em#ar"o al lote * posteriormente se le administrar%a a&ul de metileno para apreciar si e$ectivamente este reduce la cantidad de meta!emo"lo#ina presente. El primer parámetro que pudimos o#servar es el incremento de peso de las ratas que consumieron el em#utido el cual $ue salc!ic!a FUD pues este es sumamente rico en nitritos, además de que tiene "rasas ' conservadores lo cual induce el aumento de peso. Una ve& 'a o#tenido el peso $inal de las ratas tras !a#er sido alimentadas con una dieta espec%$ica, se !i&o la posolo"%a para sa#er la cantidad de nitritos que se le administrar%a, ' de a&ul de metileno para el lote *.
-rimero se le administro nitrito de sodio por v%a intraperitoneal pues por su irri"ación san"u%nea lle"ar%a una cantidad aprecia#le de nitritos a circulación "eneral, para el lote * se esperó 42 min más para administrar el a&ul de metileno por la misma v%a para llevar a ca#o el e$ecto protector. Dado a que el a&ul de metileno es una estructura la cual se caracteri&a por tener diversos do#les enlaces, es un #uen protector 'a que por sus caracter%sticas qu%micas como moleculares este tiene la capacidad de in$luir indirectamente so#re el meta#olismo pues acelera a la NAD- meta!emo"lo#ina reductasa, !aciendo que el a&ul se redu&ca a leucometileno ' este a su ve& reduce el Fe 6>>>7 presente en Fe 6>>7. -or los resultados o#tenidos en la "rá$ica 4 se aprecia que el lote que presenta ma'or porcenta+e de meta!emo"lo#ina es el ( pues este a pesar de que se les dio nitritos en su dieta, se le administró nitrito de sodio directamente por lo tanto esto in$lu'o a que los niveles de meta!emo"lo#ina en san"re aumentaran.
Mientras que el lote 4 es el que si"ue en cuanto concentración de meta!emo"lo#ina esto se de#e a que $actores in!erentes a la rata.
CONCLUSIONES Se o#servó la in$luencia de consumir em#utidos en altas concentraciones de nitritos ' cómo in$lu'en en los sistemas #ioló"icos.
Se conoció el e$ecto que produce el consumo de em#utidos a altas cantidades ' la toxicidad que estos producen. Se e$ectuó una metodolo"%a instrumental para cuanti$icar las cantidades de meta!emo"lo#ina en san"re ' se aprendió el $undamento qu%mico del mismo.
RE-ERENCIAS.
-ues $isioló"icamente !a#lando siempre !a' nitritos presentes en el or"anismo sin em#ar"o la cantidad es prácticamente desprecia#le. -ara el caso del lote * es el que presenta menores cantidades de meta!emo"lo#ina, se podr%a decir que el A&ul de metileno actuó de una manera e$ica& reduciendo as% la ma'or cantidad de meta!emo"lo#ina en el or"anismo. -ara poder llevar a ca#o la cuanti$icación de los meta#olitos Estudiados se llevó a ca#o un procedimiento en el consistió En o#tener muestra san"u%nea de la rata con la $inalidad de Adquirir el plasma ' posteriormente tenerlo en una solución Amorti"uadora de $os$atos el cual se le'ó a ;*2 nm la cual Es la lon"itud de onda óptima para el !emi"lo#ina 'a que esta se $orma al oxidarse con el $erricanuro de potasio, es por ello que se mide la a#sor#ancia antes ' después a1adir dic!os reactivos. Sin em#ar"o tam#ién se a1adió CN el cual cede CN0 al medio -or lo que la !emi"lo#ina se convierte a !emi"lo#incianuro el Cual a#sor#e a :32 nm, el cianuro tiene la capacidad de eliminar A la meta!emo"lo#ina pues la convierte en cianometa!emo"lo#ina aciendo que se elimine el pico de ;*2 nm, además de que se A1adió el #u$$er de $os$atos para $acilitar la conversión de los =espectivos analitos. En s% se #asa en a1adir el cianuro con la $inalidad de convertir a meta!emo"lo#ina a !emo"lo#ina la cual lee a una cierta A#sor#ancia 6;*2 nm7 ' posteriormente trans$ormar a la emo"lo#ina en meta!emo"lo#ina la cual lee a otro 6:32 nm7 G por di$erencia determinar la cantidad de !emo"lo#ina total Es por ello que se elimina la lectura al convertir la !emo"lo#ina En cianometa!emo"lo#ina.
