METODE DAN INTERPRETASI PEMERIKSAAN GOLONGAN DARAH
Darah adalah suatu substansi cair yang mengandung basa, tersusun atas air, sel darah, enzim, protein, dan substansi inorganik lainnya yang bersirkulasi di dalam pembuluh darah, membawa nutrisi, oksigen, dan hasil metabolisme.Darah merupakan bukti yang paling umum dan mungkin paling penting dalam dunia kriminologi modern. Substansi ini tidak bisa digantikan, melihat fakta banyak yang bisa ditemukan dari darah (identitas, cara kematian, DNA, dll). Keberadaannya selalu menghubungkan tersangka dan korban berikut TKP.Darah menjadi bukti yang paling sering mematahkan kesaksian palsu, alibi, atau argumen dari pelaku.Oleh karenanya pelaku sangat sering berusaha menghapus jejak darah baik di TKP, tubuh pelaku, maupun senjata.Namun, hal ini tidak banyak membantu mengingat majunya teknologi membuat para ahli mampu mengidentifikasi darah, meskipun sudah dihapus. Bagian darah yang cair tersusun atas plasma darah dan serum (berwarna kekuningan dan mengandung sel darah putih dan platelet).Bagian darah yang padat tersusun atas sel darah merah.Serum dan sel darah merah menjadi poin penting yang didalami oleh ahli forensik.Khususnya serum, dimana dari substansi ini dapat ditentukan kesegaran sampel darah (durasi serum terpapar udara luar dan membentuk clot ).Selain ).Selain itu, serum juga mengandung antibodi. Di lain pihak, pada sel darah merah, para ahli akan mencari substansi yang lebih kecil, yakni antigen untuk memeriksa golongan darah maupun DNA. Di dalam hukum forensik, darah selalu dianggap sebagai suatu barang bukti. Hal ini dapat ditinjau dari bagaimana 2 orang yang kembar identik dengan pola DNA yang mirip namun memiliki profil antibodi serum yang berbeda (sederhananya memiliki golongan darah berbeda), membuat mereka dapat dibedakan satu sama lain secara serologi. Penggolongan darah pertama (sistem A-B-O) ditemukan pada tahun 1901 oleh Leindsteiner. Pada tahun-tahun berikutnya ditemukan penggolongan darah yang lain, utamanya di bidang reaksi antigen-antibodi, yaitu ABH, MN, dan Rh. Saat ini, masyarakat mengenal sistem ABO dan sistem Rh (antigen D). Prinsip utama serologi adalah dalam setiap antigen selalu ada antibodi yang spesifik untuk antigen tersebut. Dalam penggolongan darah rutin, cukup diperlukan 2 antiserum saja: anti-A dan anti-B. Dengan meneteskan antiserum ini ke sampel darah, kita dapat melihat apakah sampel darah tersebut mengalami aglutinasi atau tidak dalam tampilan mikroskop.Golongan darah A akan teraglutinasi oleh anti-A; golongan darah B oleh anti-B; golongan darah AB oleh
keduanya; dan golongan darah O tidak teraglutinasi. Golongan darah O banyak dimiliki oleh masyarakat pribumi dan amerika latin. Golongan darah A dimiliki oleh ras kaukasoid dan keturunan eropa. Golongan darah B banyak ditemukan pada masyrakat afrika-amerika dan beberapa suku di Asia (e.g. Thai).Golongan darah AB paling banyak ditemui pada orang Jepang dan China.Selain sistem ABO, ditemukan juga individu dengan golongan darah langka.Sistem baru, dikenal dengan sistem Rhesus.Dalam sistem ini dibagi menjadi Rhesus positif dan negatif.Jika seseorang memiliki faktor positif, maka darahnya mengandung protein yang dapat ditemukan pada rhesus monyet.Sebagian besar masyarakat (85%) memiliki faktor positif dan karenanya, individu dengan rhesus negatif sangat diperhatikan karena langkanya individu dengan rhesus ini. Sistem ini jauh lebiih rumit daripada sistem ABO karena ada sekitar 30 kombinasi yang mungkin, membuat transfusi darah menjadi sangat krusial, meskipun untuk sederhananya lebih sering digunakan yang sistem positif dan negatif. Faktor Rh ditemukan menyelubungi sel darah merah.
1. Pemeriksaan Golongan Darah
Golongan darah adalah istilah yang diaplikasikan kepada antigen-antigen yang diturunkan dari kedua orang tua (inherited antigens) yang ditemukan pada permukaan sel darah merah.Pendeteksian golongan darah adalah salah satu metode identifikasi dalam penyelidikan forensik dan telah digunakan secara luas pada berbagai laboratorium forensik.Di antara bermacam-macam sistem golongan darah yang dikenal, sistem A, B, O adalah sistem yang terpenting dan digunakan secara luas.
Pembagian sistem A, B, O
didasarkan kepada ada tidaknya substansi antigen/aglutinogen yaitu antigen A dan antigen B yang terdapat pada permukaan sel darah merah manusia, sehingga golongan darah manusia terbagi ke dalam 4 golongan yang terdiri atas A, B, AB dan O.
Terdapat dua bentuk antigen yaitu :
Antigen larut air (water-soluble form) Antigen ini tidak ditemukan pada sel darah merah dan serum, tapi pada sebagian besar cairan tubuh dan organ dari golongan sekretor.
Antigen larut alkohol (alcohol-soluble form) Antigen ini terdapat pada seluruh jaringan tubuh, kecuali otak, dan juga terdapat di sel darah merah.Tetapi antigen ini tidak terdapat pad a hasil sekresi. Antigen sistem ABO ini diturunkan secara genetik dibawah pengaruh empat lokus (lokus adalah lokasi gen pada kromosom), yaitu lokus ABO, lokus gen H, lokus gen Se dan lokus gen Le.Sistem ABO dikendalikan oleh 3 jenis gen yaitu, A,B dan O, yang masingmasing dapat menempati lokus ABO. Gen A dan B bersifat kodominan sedangkan gen O bersifat resesif atau amorf yang tidak menghasilkan antigen. Tiap orang tua akan menurunkan satu gen ABO pada anaknya, sehingga seorang anak memiliki sepasang gen (genotip) yang dapat dinyatakan dalam genotip AA,BB,AB,AO,BO dan OO. Pada penentuan golongan darah kita hanya memperhatikan antigen yang dihasilkan gen tersebut, bukan gennya. Sistem ABO juga dikendalikan oleh gen H dan h, yang akan menempati lokus gen H.
Lokus gen H akan mengkode sintesis core pentasakarida (suatu bahan baku yang diperlukan untuk sintesis antigen A dan antigen B) sehingga gen H akan membentuk antigen H dan sedangkan gen H bersifat resesif. Hampir semua orang mewarisi dua gen H. Gen H terdapat pada semua golongan darah. Lokus gen Se menentukan apakah seseorang mensekresi antigen A, B atau H ke dalam serum dan cairan tubuh lainnya (cairan tubuh, semen dan urin). Hanya sel yang memiliki gen Se yang dapat mensekresi antigen ABH. Sedangkan lokus gen Le berfungsi sebagai prekursor gen H. Substansi antigen A, B dan H berhubungan satu dengan lainnya melalui mekanisme berikut:
Jika individu diwarisi gen H, maka individu tersebut akan memiliki antigen H. Substansi antigen H adalah substansi yang mula-mula disintesis selama proses sintesis molekulmolekul golongan darah.
Jika individu diwarisi gen O, gen tersebut tidak mengkode antigen apapun, sehingga antigen satu-satunya pada golongan darah ini adalah antigen H.
Jika individu diwarisi gen A, gen tersebut akan mengkode enzim yang akan mengubah sebagian substansi H menjadi glikoprotein lain yang merupakan determinan antigenik dari golongan darah A. Sehingga kelompok ini akan memiliki antigen A dan antigen H.
Jika individu diwarisi gen B, gen tersebut akan mengkode enzim yang akan mengubah sebagian substansi H menjadi glikoprotein lain yang merupakan determinan antigenik dari golongan darah B. Sehingga kelompok ini akan memiliki antigen B dan antigen H.
Jika individu diwarisi kedua gen A dan B, kedua gen tersebut akan beraksi sehingga kelompok golongan darah ini memiliki antigen A, B dan H.
2. Pendeteksian Golongan Darah ABO Melalui Cairan Tubuh Lain a. Golongan Sekretor dan Non-sekretor
Individu yang termasuk golongan sekretor adalah individu yang memiliki gen SeSe atau Sese, dimana mereka dapat mensekresikan antigen golongan darahnya pada sekresi dan cairan tubuhnya selain pada sel darah merah. Individu sekretor mensekresikan substansi
antigen
yang
identik
secara
imunologik
dengan
substansi
pada
eritrositnya.Sedangkan golongan non sekretor yang memiliki genotip sese, hanya mensekresikan sedikit sekali atau tidak sama sekali antigen golongan darahnya ke cairan tubuhnya sehingga cairan tubuhnya tidak mengandung antigen tersebut. Hal ini diketahui dari penelitian Yamakami pada tahun 1926 yang menemukan adanya antigen A dan B pada cairan tubuh, lalu pada tahun 1930, Lehrs dan Putkonen menyatakan bahwa karakter tersebut bersifat dimorphic dengan ditemukannya golongan non-sekretor yang tak memiliki antigen pada cairan tubuhnya, selain golongan sekretor. Beberapa ahli kemudian menemukan bahwa substansi antigen golongan darah tersebut tidak hanya terdapat pada sel darah merah, tapi tersebar secara meluas pada seluruh tubuh manusia, baik pada jaringan lunak maupun keras. Selain itu substansi A, B, dan H juga terdapat sebagai mukopolisakarida dalam sekresi kelenjar seperti cairan tubuh, keringat, dan cairan lambung. Pada akhirnya diketahui bahwa sekresi mukopolisakarida ini dikontrol oleh gen Se dan se, dimana Se dominan terhadap se. Pada individu sekretor, penentuan golongan darah selain dapat dilakukan menggunakan sampel darahnya, juga dapat dilakukan menggunakan sampel cairan tubuh seperti cairan tubuh, dimana antigen pada cairan tu buhnya biasanya terdapat dalam bentuk larut (soluble form glycoprotein).
Sedangkan pada individu non-sekretor, penentuan golongan darahnya hanya dapat dilakukan dengan prosedur konvensional menggunakan sel darah merahnya.
b. Penentuan Status Sekretor
Untuk mengetahui apakah seseorang itu bersifat sekretor atau nonsekretor dapat ditentukan dengan tes penentuan status sekretor ( secretory test ). Pada tes ini prinsip yang digunakan adalah Aglutinasi-inhibisi, yang prosesnya terdiri dari 2 tahap, yaitu: 1) Penetralan antibodi Pada tahap ini cairan tubuh dicampur dengan antiserum komersial (Anti-A atau AntiB) yang telah dilarutkan dengan aquades sehingga titer antibodinya akan mendekati level antigen di dalam cairan tubuh, kemudian biarkan untuk beberapa waktu agar keduanya bereaksi. Jika subyeknya sekretor maka antigen golongan darah yang larut dalam cairan tubuh akan bereaksi dengan dan menetralkan antibodi dalam antiserum. 2) Aglutinasi-inhibisi Pada tahap selanjutnya ditambahkan sel darah merah sesuai dengan golongan darah yang akan dites ke dalam campuran tersebut. Jika subyeknya sekretor, maka tidak terjadi aglutinasi sebab tidak ada lagi antibodi yang tersisa untuk menggumpalkan sel darah merah, karena sebelumnya telah bereaksi dengan antigen golongan darah di dalam cairan tubuh. Reaksi yang menunjukkan aglutinasi negatif ini diinterpretasikan status sekretornya positif. Namun jika subyeknya non-sekretor, maka tidak ada antigen golongan darah di dalam cairan tubuh sehingga antibodi di dalam antiserum tidak akan dinetralkan dan akan bebas bereaksi dengan sel darah merah yang ditambahkan. Reaksi aglutinasi positif menunjukkan hasil tes status sekretor yang negatif.
c. Metode Pendeteksian Golongan Darah Menggunakan Cairan tubuh
Pendeteksian golongan darah melalui material selain darah dapat dilakukan dengan cara tidak langsung, yaitu dengan metode absorpsi-inhibisi (untuk cairan tubuh, misal : cairan tubuh, semen, dan sebagainya), absorpsi-elusi (untuk bahan padat, misal : tulang, rambut, gigi, dan sebagainya), dan absorpsi campuran (untuk bahan padat).
Pendeteksian golongan darah dengan cara aglutinasi langsung tidak mungkin dilakukan untuk deteksi antigen dalam cairan tubuh seperti pada cairan tubuh. Hal ini dikarenakan antigen/substansi golongan darah dalam cairan tubuh terdapat dalam bentuk yang larut ( soluble form). Metode yang digunakan untuk pemeriksaan golongan darah melalui cairan tubuh adalah metode absorpsi-inhibisi, yaitu bila terdapat suatu bahan yang mengandung antigen yang sesuai dengan antiserum yang ditambahkan maka akan terjadi proses absorpsi yang spesifik. Proses absorpsi ini akan mengakibatkan titer antiserum berkurang (inhibisi). Sehingga jika kemudian ditambahkan sel darah merah yang sesuai kepada antiserum yang telah terikat dengan antigen dalam bahan, maka tidak akan ditemukan aglutinasi karena antiserum telah berikatan dengan antigen dalam bahan sehingga tidak dapat lagi berikatan dengan antigen pada dinding sel darah merah. Inhibisi aktifitas antiserum ini ditentukan dengan membandingkannya dengan titer antiserum mula-mula.
d. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Hasil Deteksi Golongan Darah Menggunakan Cairan Tubuh Lain
Apabila hasil analisa cairan tubuh dalam identifikasi golongan darah diperoleh hasil yang tidak diharapkan maka terdapat beberapa kemungkinan yaitu:
Cairan tubuh dari pelaku bukan golongan sekretor.
Apabila cairan tubuh telah mengering, mungkin sediaan ulas kurang mengandung cairan tubuh.
Cairan tubuh yang akan diperiksa tercemar oleh cairan lain sebelum dibuat sediaan ulas.
Sediaan ulas terkontaminasi sebelum dilakukan analisa laboratoris.
Kegagalan dari proses serologis di laboratorium, kemungkinan reagennya sudah rusak atau kadaluarsa atau konsentrasinya berubah.
DAFTAR PUSTAKA
Senn, David R; Stimson, Paul G. Forensic Dentistry, 2nd edition. 2011. Boca Raton: Taylor & Francis Group Mozayani A, Noziglia C. The Forensic Laboratory Handbook Procedures and Practice. 2011. Springer Science & Business Media Djohansyah Lukman. Ilmu Kedokteran Gigi Forensik Jilid 2. 2006. Sagung Seto. www.forensic-medecine.info/forensic-serology.html . Diunduh pada tanggal 10 Mei 2013. www.ncids.com/forensic/serology/serology.shtml . Diunduh pada tanggal 10 Mei 2013.
