ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
PRÁCTICA Nº 06 Recuento de Enterobacter ias T otales ASIGNATURA
: Microbiología de los Alimentos I
DOCENTE
: Dra. Graciela Albino Cornejo
ALUMNO
: Rómulo Aycachi Inga
CICLO
: 2007 - II Lambayeque, 2 1 de feb rer o de 2008 .
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PRÁCTICA Nº 06
RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS TOTALES I.
Introducción:
La familia Enterobactereacea comprende un número muy variado de géneros y especies bacterianos cuyo hábitat natural es el tubo digestivo del hombre y los animales. No todos los bacilos Gram negativos que tienen este hábitat forman parte de la familia Enterobacteriaceae . Se los el suelo, agua, frutas, vegetales y otras plantas y en los animales desde losencuentra insectos alenhombre.
La familia está definida por un conjunto de características fenotípicas (bioquímicas, fisiológicas e inmunológicas) a las que se han agregado posteriormente otros elementos establecidos por técnicas de hibridización de ácidos nucleicos que miden distancias evolutivas y han definido mejor la interrelación de todos los microorganismos integrantes de la familia. Son bacilos Gram negativos rectos, con un diámetro de 0.3 a 1.5 micras. Si son móviles, presentan flagelos perítricos. No forman esporas. Desarrollan en presencia o en ausencia de Oxígeno (aerobios-anaerobios facultativos). Desarrollan rápidamente en medios simples, no siendo exigentes desde el punto de vista nutricional. Algunos desarrollan en glucosa como única fuente de carbono, mientras otros requieren el agregado de vitaminas y/o minerales en el medio de cultivo. Son quimioorganótrofos, poseen metabolismo fermentativo y respiratorio. Son catalasa positivos y oxidasa negativos; reducen los nitratos a nitritos. El contenido de Guanina + Citosina del DNA total es de 38 a 60 moles %. En los medios de cultivo forman colonias lisas, convexas y circulares de bordes definidos. Algunas especies desarrollan colonias más mucoides que otras (por ejemploKlebsiella). II. III. IV. -
Objetivos: Realizar el recue nto de Ent erobacterias totales por la técn ica del NMP, usando diferentes alícuotas (10, 1 y 0.1 mL). Identificar los géneros de enterobacterias presentes en los alimentos. Materiales: Caldo de enriquecimiento para Enterobacterias (sales biliares). Medio agar Endo, Eosina Azul de Metileno o MacConkey. Medios para pruebas Bioquímicas. Frascos y tubos de diluciones estériles. Placas Petri Tubos para pruebas bioquímicas. Pipetas Gradillas Procedimiento: Homogenizar la muestra en cas o de ser só lida, de ser mue stra líquida no se homogenizará. 2
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El grupo trabajó con muestra líquida. En este caso se siembra directamente las alícuotas de 10 mL, 1 mL o 0.1 mL en los tubos (y frascos) respectivos conteniendo caldo de enriquecimiento para enterobacterias. Muestra: Agua de mar
0.1 mL
10 mL Caldo de enriquecimiento para enterobacterias
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1 mL
Caldo de enriquecimiento para enterobacterias
Luego se incuban a 35 ó 37 ºC por 24 a 48 h. Pasado el tie mpo se lee rán los tubos, la tur bidez indicará si la muestra es positiva. De los tubos positivos, pasar a placa (1 ó 2), se pueden sembrar uno o dos juegos en el agar selectivo (este puede ser EMB, Endo o MacConkey). Incubar a 37 ºC por 24 h. Luego, de las colonias lactosa positivas, se escogen algunas para realizarles las pruebas bioquímicas correspondientes. Los resultados se darán usando la tabla para NMP de 5 tubos para alícuotas de 10, 1 y 0.1 mL. Se pueden expresar en mL o gr.
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V.
Resultados:
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Se sembró en 5 frascos (10 mL) y 10 tubos de dilución (1 y 0.1 mL). Pasado el tiempo de incubación solo se observó turbidez en 4 de los frascos y en ninguno de los tubos, por lo que diríamos que nuestros números fueron: 4–0–0.
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Luego, pasamos a sembrar en agar MK, se incubó a 37 ºC por 24 h, obteniéndose colonias lactosa positivas y lactosa negativas.
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Se realizó la bio química a una de las colonias lactosa positiva y nos dio por resultado Enterobacter aerogenes.
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PRUEBA Indol
RESULTADO Negativo
Rojo de metilo Catalasa Citrato LIA Lactosa
Negativo Positivo Positivo Positivo Negativo
Entonces, como el microorganismo aislado es una enterobacteria, se pueden usar los números dados en los tubos; estos fueron4-0-0.
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Entonces, el índice del NMP para la muestra de agua de mar traída de la playa de Ciudad Éten es de 13 bacterias/100 mL. NMP de enterobacterias totales = 13 bacterias/100 mL.
VI. -
Preguntas: ¿Cuál es la com posición de los med ios de cultivo (agar) utilizados para el aislamiento de enterobacterias?
AgarEMB
AgarMacConkey
AgarEndo
Peptona
10 g
Peptona de caseína
Lactosa
10 g
Lactosa
10 g
Peptonadecarne
3g
Fosfato dipotásico
2g
Eosina Azul de metileno Agar Agua destilada
VII. -
0.40g
Salesbiliares
0.065g
Clorurodesodio
15g 1 000 mL
Rojoneutro Cristal violeta Agar Agua destilada
17g
1.5g 5g
Peptonadecarne
10g
Di-potasio hidrógenofosfato Lactosa
3.5 g 10g
Sodio sulfito anhidro
2.5 g
Fucsina
0.4g
0.03g Agar 12.5g 0.001 g (Se disuelve 39 g/L del 12.5 g preparado, se esteriliza y se 1 000 mL sirve en placas)
Referencias:
ALGORTA,
G.
(2005).
Bacilos
Gram
Negativos
No
Exigentes:
Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Pseudomonas. Obtenido el 15 de febrero de 2008 en http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2022.pdf -
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo en Microbiología: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3º Edic. Lima.
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L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiologia de Ali mentos: Recuento de enterobacterias. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_m icrolimentos.htm
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