OBTENCION OBTENCION DE LA LECITINA Y COLESTEROL COLESTEROL A PARTIR PARTIR DE LA L A YEMA DEL HUEVO Lípi Lípidos dos son son aque aquellllas as susta sustanc ncias ias orgán orgánic icas as extr extraí aíbl bles es de teji tejido doss anim animal ales es o vegetales, por medio de solventes orgánicos como éter, cloroformo, tetracloruro de carbono, benceno, etc. Los lípidos, como grupo, son muy insolubles en agua, bioquímicamente hablando, son sustancias de suma importancia, en primer lugar porque constituyen formas de almacenamiento de energía, y en el segundo lugar, porque forman partes de estructuras celulares, principalmente de todo tipo de membrana biológica. Los lípidos extraídos de material biológico representan una gran variedad de moléculas, estructuralmente diferentes, pero que comparten la propiedad de ser solubles en solventes orgánicos, llamados por eso, solventes de las grasas. ntre los lípidos existen moléculas no polares, como los triacilglicéroles, o triglicéridos, y moléculas moléculas polares como los !osfoglicéri !osfoglicéridos, dos, o fosfolípid fosfolípidos, os, y los esfingolípidos, esfingolípidos, y moléculas de tipo "erpenoides "erpenoides los esteroides, los terpenos y algunas vitaminas. #o existe clasificaci clasificación ón de lípidos, lípidos, aceptada universalmente, universalmente, pero una de las más comunes es la que los divide en$ ácidos grasos, triacilglicéroles, !osfoglicéridos y lípidos no fosforilados, siendo esta %ltima una categoría heterogénea que incluye$ &angliósidos, &angliósidos, 'erebrósidos, sulfolípid sulfolípidos, os, proteolípi proteolípidos, dos, esteroides, esteroides, terpenos terpenos y eicosanoides o prostaglandinas. s muy difícil, si no imposible, el separar cuantitativamente, por extracción con solventes orgánicos, a todos los lípidos de un tejido, por ejemplo, con etanol ( éter, o con etanol ) éter ( cloroformo. *lgunos lípidos son más solubles en un solvente y otros, en otro. ntre los !osfoglicéridos más comunes, tenemos a los tres derivados del ácido fosfatídico, a saber$ fosfatidil colina se les conoce con el nombre genérico de lecitinas. xisten varias lecitinas dependiendo de los ácidos grasos que contengan esterificados en los carbonos alfa y beta del glicerol. Las lecitinas son moléculas polares que existen en forma de sales internas o +iteriones, ya que contienen la carga negativa del ácido fosfórico, y la carga positiva del grupo trimetilamino de la colina. l p- isoeléctrico de una lecitina pura es generalmente de ./ o un poco mayor, lo cual concuerda con su estructura anfótera. Las lecitinas puras son sustancias blancas de aspecto grasoso, que cuando se exponen a la lu+ y al aire toman una coloración café, debido a la autoxidación y descomposici descomposición. ón. 0on solubles solubles en los solventes ordinarios ordinarios de las grasas, excepto en acetona. sta propiedad se emplea para su aislamiento. 0on higroscópicas y se me+clan bien con el agua formando soluciones coloidales nebulosas.
1reparación de lecitina purificada son suficientemente efectivas en bajar la tensión superficial de soluciones acuosas, propiedad que se aumenta cuando la lecitina esta combinada o absorbida a proteínas y carbohidratos, en cuyo caso las lecitinas son muy activas y constituyen agentes emulsificantes excelentes. La identificación de la lecitina puede hacerse por saponificación, para separar los ácidos grasos, hidrolisis para separar la colina y después probar para presencia de colina. n el reino animal, el esteroide más abundante es el colesterol. l colesterol no se precipita del éter por la acetona, y como es insaponificable, puede extraerse con éter, después del tratamiento con hidróxido de potasio. l colesterol generalmente, cristali+a como placas rómbicas blancas. #o tiene ni olor ni sabor. 0i se expone a la lu+ y al aire, se oxida lentamente, formando una me+cla de productos que bajan su punto de fusión y cambian sus reacciones de solubilidad. s insoluble en agua, ácidos y álcalis. s un poco soluble en soluciones jabonosas y todavía más solubles en soluciones de ácidos biliares. s muy soluble en éter, benceno, cloroformo, éter de petróleo, disulfuro de carbono y acetona. 0us principales propiedades químicas se relacionan con su grupo hidroxilo secundario y su doble ligadura. 2espués de la saponificación de un triacilglicerol, los productos son solubles en agua e insolubles en éter. 3na sustancia insaponificable, como el colesterol, es aquella que mantiene su insolubilidad en agua y su solubilidad en éter después del tratamiento alcalino. l conjunto de sustancias que se comportan así, se llaman genéricamente$ fracción insaponificable de las grasas. * su ve+ se llamará fracción saponificable, al conjunto de sustancias que después del tratamiento de saponificación se vuelven solubles en agua e insolubles en éter. sta %ltima fracción contiene principalmente jabones y esteres de ácidos grasos, mientras que la fracción insaponificable la componen principalmente alcoholes de alto peso molecular, esteroides y terpenos.
PRACTICA # 1:EXTRACCIÓN DE LECITINA Y COLESTEROL OBJETIVOS •
xtraer la lecitina 4!osfaditilcolina5 de la yema de huevo. 6 *plicar las diferentes
•
técnicas de extracción 4compresión5. xtraer y caracteri+ar los fosfolípidos, colesterol y triglicéridos presentes en la yema de huevo.
Marco ter!co n la yema del huevo se encuentran las lecitinas en gran abundancia y además, el colesterol, en suficiente cantidad sirve para hacer su aislamiento y detección fácil. 0eparada la yema, se extraen los lípidos con solventes orgánicos. "al ve+, la mejor me+cla de solventes es etanol ( éter al 7$8. Las lecitinas, una ve+ extraídas por los solventes orgánicos, se precipitan fácilmente agregando acetona. 3na ve+ precipitadas las lecitinas en solución queda el colesterol junto con otras sustancias de menor concentración. 0i entonces se hace una saponificación se separa la fracción saponificable y queda la fracción insaponificable, donde viene el colesterol. l colesterol entonces se precipita en forma cristalina, agregando agua. 9eacción de Liebermann):urchard La demostración de la presencia de colesterol se hace por medio de la reacción de Lierbermann):urchard, que es específica para esteroles con instauración en los anillos *, : o '.
Mater!a"e • • • • • • • • •
;atra+ rlen ;eyer con tapa de 7<=mL. 1robetas de <= y 8==mL. mbudo. >aso de precipitado :eac?er de 7<=mL 1ipetas de 7mL,
Mater!a" $!o"%!co •
-uevo de gallina
React!&o • • •
*cetona tanol @ter
E'(!)o: • •
:aAo maría 'ocina eléctrica
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1aso 8.) "ener el área de trabajo despejado y limpio para evitar contaminación de los reactivos. 1aso 7.) Limpiamos el huevo y separamos la yema de la clara, y la llevamos a un ;atra+ rlenmeyer de 7<=mL 1aso B.) n una probeta colocamos <= mL de alcohol etílico y 7< mL de éter, lo vaciamos en el matra+ rlenmeyer con tapa y lo llevamos a agitación hasta romper la yema. Luego lo dejamos reposar por 8= min. 1aso C.) Luego de esperar que repose y se forme una masa media cuajada empe+amos a filtrar. -umedecemos el papel filtro con un poco de etanol y para acelerar el filtrado procedemos a reali+ar comprensiones para obtener con menos tiempo el productoD ya que las partículas formadas son grandes para que permita el paso fluido de la solución formada por éter y alcohol etílico. 1aso <.) l material obtenido en el papel filtro, lo pasamos a otro matra+ rlenmeyer para aAadir una me+cla de 8=mL de etanol y
1aso G.) !iltramos y separamos la lecitina para ser envasados en un recipiente que se someterá a refrigeración.