LAPORAN PRAKTIKUM
PEMISAHAN DAN IDENTIFIKASI ASAM AMINO
NAMA
: MARETRIN
NIM
: H311 12 005
KELOMPOK
: I (SATU)
HARI / TGL. PERCOBAAN
: KAMIS/03 APRIL 2014
ASISTEN
: SARTIKA
LABORATORIUM BIOKIMIA JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 2014
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Asam amino merupakan asam yang mempunyai sebuah asam karboksilat dan gugus amina dalam sebuah molekul. Akibatnya, suatu asam amino akan mengalami reaksi asam-basa dalam molekulnya, untuk membentuk suatu ion dipolar, yaitu suatu ion yang mempunyai muatan positif dan negatif (Wilbraham dan Matta, 1992). Asam amino pada umumnya diperoleh sebagai hasil hidrolisis protein, dengan cara ini diperoleh campuran bermacam-macam asam amino dan untuk menentukan jenis asam amino maupun kuantitas masing-masing asam amino perlu diadakan pemisahan antara asam-asam amino tersebut (Wilbraham dan Matta, 1992). Analisis asam amino dapat dilakukan dengan menggunakan beberapa cara, salah satunya adalah dengan kromatografi partisi. Metode ini didasari oleh kemampuan suatu jenis asam amino yang terlarut dalam suatu campuran pelarut tertentu pada fase stasioner. Untuk dapat memperoleh pemisahan asam amino yang baik, maka dapat digunakan dua fase pelarut atau tiga fase pelarut. Namun pada percobaan ini digunakan tiga fase, yaitu n-butanol, asam asetat, dan air. Selain itu kita akan menentukan nilai Rf asam amino serta mengidentifikasi asam amino dalam suatu larutan sampel berdasarkan nilai Rf menggunakan kromatografi lapis tipis, sehingga kita akan lebih memahami pemisahan dan identifikasi asam amino. Untuk lebih memperdalam tentang metode ini, maka didilakukanlah percobaan mengenai pemisahan dan identifikasi asam amino ini.
1.2 Maksud dan Tujuan Percobaan 1.2.1 Maksud Percobaan
Maksud dari percobaan ini adalah untuk mempelajari dan memahami cara pemisahan dan identifikasi asam amino dengan metode KLT.
1.2.2 Tujuan Percobaan
Tujuan dari percobaan ini adalah: 1.
Menentukan nilai Rf larutan asam amino dan larutan sampel.
2.
Mengidentifikasi larutan sampel berdasarkan nilai Rf.
1.3 Prinsip Percobaan
Identifikasi
asam
amino
berdasarkan
perbedaan
nilai
Rf
dengan
menggunakan metode kromatrografi lapis tipis yang fase geraknya terdiri dari campuran n-butanol, asam asetat dan air dengan fase diamnya adalah lapis tipis KLT. Karena setiap asam amino memiliki nilai Rf yang berbeda maka sampel asam amino yang tidak diketahui dapat ditentukan jenisnya berdasarkan dengan nilai Rf standar.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
Asam amino yang diperoleh dari larutan hidrolisis protein adalah asam amino α. Artinya, gugus amino berada pada atom karbon α, yaitu disebelah gugus karboksil. Kecuali glisin, dengan R = H, asam amino α memiliki pusat stereogenik pada karbon α. Dengan demikian, semua asam amino α kecuali glisin bersifat aktif optis (Hart dkk. , 2003). H
CH
CO2H
NH2
Gambar 2.1 Struktur Glisin Asam amino dengan satu gugus amino dan satu gugus karboksil lebih baik digambarkan sebagai struktur ion dipolar. O R
CH C
-
O
+
NH2
Gambar 2.2 Struktur Ion dipolar Gugus amino diprotonasi dan hadir sebagai ion amonium, sedangkan gugus karboksil kehilangan protonnya dan hadir sebagai ion karboksilat. Struktur dipolar ini konsisten dengan sifat asam amino yang seperti garam, yang memiliki titik leleh yang agak tinggi (bahkan yang paling sederhana, glisina, meleleh pada suhu 233°C) dan kelarutannya dalam pelarut organik relatif rendah). Asam amino bersifat amfoterik, artinya berperilaku sebagai asam dan mendonasikan proton pada basa kuat, atau dapat juga berperilaku sebagai basa dan menerima proton dari asam kuat.
Perilaku ini dinyatakan dalam kesetimbangan berikut untuk asam amino dengan satu gugus amino dan satu gugus karboksil (Hart dkk. , 2003). Penggolongan kromatografi dapat didasarkan atas mekanisme pemisahannya serta alat yang digunakan. Berdasarkan mekanisme pemisahannya, kromatografi digolongkan atas kromatografi adsorbsi, kromatografi partisi, kromatografi pasangan ion, kromatografi penukar ion, dan kromatografi elusi ukuran. Sedangkan berdasarkan alat yang digunakan, kromatografi dibedakan atas kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis (KLT), kromatografi cairan kinerja tinggi (HPLC), serta kromatografi gas (Aisyah, 2008). Kromatografi adalah suatu prosedur yang memungkinkan pemisahan campuran zat terlarut bergantung pada derajat pada mana berbagai zat terlarut diadsorpsi dibagi atau ditukar antara larutan asal “fase bergerak” dan suatu fase padat atau fase cair kedua, yang dikenal sebagai “fase diam”. Dalam kromatografi adsorpsi, campuran zat terlarut dibiarkan melalui suatu kolom absorben (contoh, alumina, magnesium oksida, arang), yang bekerja sebagai fase diam. Berbagai spesies zat terlarut yang ada dalam larutan akan keluar dari dasar kolom dalam urutan yang terbalik dari afinitas adsorpsi terhadap adsorben yang digunakan. Jadi zat terlarut yang mempunyai sedikit afinitas atau tidak sama sekali terhadap fase padat akan melewati kolom dan akan ada dalam eluen awal (Martin dkk., 1993). Kromatografi kertas, merupakan salah satu jenis kromatografi partisi, yaitu pemisahan beberapa zat berdasarkan perbedaan kelarutan dalam dua pelarut yang tidak dapat bercampur. Cara melakukan pemisahan dengan kromatografi ini cukup sederhana. Campuran beberapa asam amino sebagai hasil hidrolisis diteteskan sedikit demi sedikit pada kertas kromatografi pada pada titik tertentu (A) dan kemudian ujung kertas dicelupkan ke dalam pelarut tertentu. Pelarut ini akan naik berdasarkan
proses kapilaritas dan akan membawa senyawa-senyawa dalam campuran tersebut. Asam amino yang mudah larut dalam pelarut tertentu itu, misalnya pelarut organik, akan terbawa naik lebih jauh daripada yang sukar larut. Setelah pelarut mencapai bagian atas atau garis akhir, kertas diangkat dari pelarut kemudian dibiarkan kering dengan sendirinya di udara. Dengan proses ini asam-asam amino akan terpisah satu dengan yang lain, dengan penyemprotan pereaksi ninhidrin pada kertas kromatografi tersebut kan tampak noda-noda biru yang membuktikan adanya asam amino yang terpisah itu. Jarak yang telah ditempuh oleh suatu asam amino tertentu (b), dibandingkan dengan jarak yang ditempuh oleh suatu pelarut dari garis awal hingga garis akhir (a) diberi lambang Rf. Harga Rf yaitu b/a merupakan ciri khas suatu asam amino pada pelarut tertentu. Dengan menggunakan standar asam-asam amino yang telah diketahui macamnya pada kromatografi kertas seperti yang telah dilakukan di atas, dapat diketahui macam asam amino yang diperiksa (Poedjiadi dan Supriyanti, 2007). Fase stasioner dapat berupa padatan maupun cairan, sedangkan fase bergerak dapat berupa cairan maupun gas. Dalam semua teknik kromatografi, zat-zat terlarut yang dipisahkan bermigrasi sepanjang kolom, dan tentu saja laju pemisahan terlatak dalam
laju
perpindahan
yang
berbeda
untuk
larutan
yang
berbeda
(Day dan Underwood, 2002). Analisis asam amino ini sangat diperlukan misalnya untuk menganalisi hasil industri seperti makanan, makanan ternak, obat-obatan, juga untuk analisi cairan biologi dan hidrolat protein (Rediatning dan Kartini, 19 87). Cara yang masih lazim yang digunakan sampai saat ini adalah kromatografi dengan berbagai macam teknik seperti kromatografi kertas, lapisan tipis, dan kolom. Kromatografi kolom lebih banyak dikembangkan karena selain dapat digunakan
untuk keperluan kualitatif juga dapat untuk keperluan kuantitatif dan preparatif. Akan tetapi kromatografi kolom biasa (open coloumn), diperlukan waktu yang lama untuk memisahkan asam amino secara sempurna. Karena itu perlu ada metode analisis yang dapat memisahkan asam amino tersebut secara sempurna dalam waktu singkat dengan hasil yang tepat dan teliti (Rediatning dan Kartini, 1987). Kromatografi lapis tipis adalah metode kromatografi cair yang paling sederhana. Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa
menjadi
senyawa
murninya
dan
mengetahui
kuantitasnya
yang
menggunakan. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya (Watson, 2009). Kromatografi dapat dipakai dengan dua tujuan yaitu dipakai selayaknya sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif atau preparatif dan dipakai untuk menjajaki sistem pelarut dan sistem penyangga yang akan dipakai dalam kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi (Watson, 2009). Kromatografi lapis tipis dikembangkan tahun 1938 oleh Ismailoff dan Schraiber. Adsorbent dilapiskan pada lempeng kaca yang bertindak sebagai penunjang fase diam. Fase bergerak akan merayap sepanjang fase diam dan terbentuklah kromatogram, ini dikenal juga sebagai kromatografi kolom terbuka. Metode ini sederhana, cepat dalam pemisahan dan sensitive. Kecepatan pemisahan tinggi dan mudah untuk memperoleh kembali senyawa-senyawa yang terpisahkan. Biasanya yang sering digunakan sebagai materi pelapisnya adalah silika gel, tetapi kadang kala bubuk selulosa dan tanah diatom, kieselgurh juga dapat digunakan. Untuk fase diam hidrofilik dapat digunakan pengikat seperti semen Paris, kanji, disperse koloid plastik, silika terhidrasi. Untuk meratakan pengikat dan zat pada pengadsorpsi digunakan suatu aplikator. Sekarang ini telah banyak tersedia
kromatografi lapis tipis siap pakai yang dapat berupa gelas kaca yang telah terlapisi, kromatotube dan sebagainya. Kadar air dalam lapisan ini harus terkendali agar didapat hasil analisis yang reprodusibel (Wall, 2005). Kromatografi lapis tipis merupakan penerapan dari kromatografi adsorpsi. Fase diamnya adalah pelarut/pengembang yang teradsorpsi pada permukaan adsorben sedangkan fase geraknya adalah bagian dari pelarut/pengembang yang berfungsi menggerakan komponen. Adsorben dilapiskan sebagai lapisan tipis pada pelat datar berupa gelas, plastik, atau logam. Sejumlah kecil campuran yang akan dianalisis ditotolkan pada bagian bawah pelat KLT. Pelat KLT kemudian ditempatkan pada bejana pengembang (chamber) yang telah jenuh dengan eluen pengembang. Eluen bergerak ke atas karena aktifitas kapiler (Watson, 2009 ). KLT merupakan metode pemisahan yang sederhana, cepat, dan murah. KLT dapat memberikan informasi mengenai berapa banyak komponen yang terdapat dalam suatu campuran dan juga dapat digunakan untuk tujuan identifikasi dengan cara membandingkan nilai Rf komponen yang terpisah dengan Rf komponen yang diketahui (Rf standar) dalam sistem KLT yang sama (Watson, 2009). Prinsip
pemisahan
noda
adalah
berdasarkan
kepolarannya
sehingga
menghasilkan kecepatan yang berbeda-beda saat terpartisi dan terjadilah pemisahan. Untuk memisahkan noda dengan sebaik-baiknya maka digunakan kombinasi eluen non polar dengan polar. Apabila noda yang diperoleh terlalu tinggi, maka kecepatannya dapat dikurangi dengan mengurangi kepolaran. Namun apabila nodanya lambat bergerak atau hanya ditempat, maka kepolaran dapat ditambah (Wall, 2005).
BAB III METODE PERCOBAAN
3.1 Bahan Percobaan
Bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah larutan sampel (campuran asam amino glisin dan tirosin), larutan asam amino 0,01 M (glisin dan tirosin), eluen (n-butanol, asam aspartat, dan air), plat KLT, larutan ninhidrin 2 %, akuades, kertas label, isolasi, dan tissue roll .
3.2 Alat Percobaan
Alat yang digunakan pada percobaan ini adalah plat KLT, chamber, inkubator, pipa kapiler 0,5 µL, gelas ukur 10 mL, botol semprot, pipet tetes, gegep, pinset, cawan petri, pensil, penggaris, dan gunting.
3.3 Prosedur Percobaan 3.3.1 Pembuatan Eluen
Chamber disiapkan dan dibersihkan. Eluen yang digunakan yaitu n-butanol, asam asetat, dan air dengan perbandingan 2,5 : 0,6 : 2,6 mL dimasukkan ke dalam gelas ukur kemudian dipindahkan ke dalam chamber. Setelah itu chamber ditutup rapat dengan menggunakan isolasi, hingga eluen jenuh.
3.3.2 Penotolan Sampel
Plat KLT dikeringkan terlebih dahulu kemudian plat KLT digunting dengan ukuran yang telah ditentukan dengan 1 cm dari tepi atas dan tepi bawah. Kemudian larutan asam amino dan larutan sampel ditotolkan pada plat KLT pada titik yang
ditentukan dengan menggunakan pipa kapiler 0,5 µL. Plat KLT yang telah ditotol kemudian dikeringkan pada suhu ruangan.
3.3.3 Proses Elusi
Setelah chamber dijenuhkan dari eluen, plat KLT yang telah ditotol oleh larutan asam amino dan larutan sampel dimasukkan ke dalam chamber untuk dielusi. Proses elusi dihentikan ketika eluen telah mencapai batas yang telah ditentukan. Plat KLT dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan dalam suhu kamar. Setelah itu plat disemprot dengan larutan ninhidrin 2 %, kemudian dikeringkan dalam inkubator. Setelah plat KLT kering, terbentuklah noda. Noda yang dihasilkan diberi lingkaran dengan menggunakan pensil serta diukur jarak totolan ke noda dan jarak tempuh eluen dengan menggunakan penggaris untuk menentukan nilai Rf larutan dan dilakukan identifikasi larutan asam amino.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Pengamatan
Berdasarkan hasil pengamatan terhadap larutan asam amino (glisin dan tirosin) dan larutan sampel dengan menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan proses elusi, diperoleh data sebagai berikut. Tabel 1. Data Hasil Pengamatan
No.
Larutan
Jarak eluen (cm)
Jarak noda (cm)
Rf (cm)
1
Glisin
4,7
1,1
0,23
2
Tirosin
4,7
1,7
0,36
3
Larutan sampel
4,7
1,3
0,27
4.2 Reaksi 4.2.1 Glisin + Ninhidrin O OH
C H
CH
COOH
+
C OH
C
NH2
O
glisin
ninhidrin
O O C
HO
+
C
H
CH
+
NH3
+
CO2
C
H
O
hidrindantin
O
OH
O
ninhidrin
O
O
C
C
C
C
+ NH3 +
C C
HO
OH
C
O
H
C C O
hidrindantin
N
C
+ 3 H2O
C
C
OH
O
diketohidrindilen dikethidrindamin
4.2.2 Tirosin + Ninhidrin O OH
C
OH
+ C OH
C H2C
CH
COOH O
tirosin
NH2
ninhidrin
O C
HO
+
C
OH
+
NH3
+
CO2
C
H
O
H2C
hidrindantin
O HO
OH
C C C O
ninhidrin
O
O
O
C
C
C
C
+ NH3 +
OH
COOH
H
C C O
hidrindantin
N
C
+ 3 H2O
C
C
OH
O
diketohidrindilen dikethidrindamin
4.3 Pembahasan
Percobaan ini dilakukan untuk mengidentifikasi larutan asam amino (glisin dan tirosin) dan larutan sampel menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan proses elusi dan menghitung nilai Rf yang diperoleh dari perbandingan jarak noda dan eluen. Pembuatan larutan eluen dilakukan dengan cara pencampuran antara larutan n-butanol, asam asetat, dan air dengan perbandingan 2,5 : 0,6 : 2,6 v/v. Pemilihan ketiga pelarut ini didasarkan pada perbedaan kepolaran dari ketiga pelarut tersebut, dengan urutan kepolaran air > n-butanol > asam asetat. Hal ini dilakukan agar pada saat pengidentifikasian asam aminonya, akan terlihat lebih jelas perbedaan dari noda yang ditimbulkan. Setiap asam amino memiliki koefisien partisi tertentu untuk
pasangan pelarut tertentu. Asam amino yang amemiliki afinitas terhadap fasa gerak (pelarut) yang lebih besar akan tertahan lebih lama pada fasa gerak, sedangkan zat terlarut yang afinitasnya terhadap fasa gerak lebih kecil akan tertahan lebih lama pada fasa diam. Dengan demikian asam amino dapat dipisahkan akibat perbedaan migrasi di dalam fasa gerak dan fasa diamnya. Prinsip percobaan KLT ini didasarkan pada sifat fisik dan kimia asam amino. Sifat fisik ditunjukkan oleh kecepatan bergerak pada fase diam dari kertas kromatografi dan sifat kimianya berdasarkan pada warna yang timbul ketika disemprot dengan larutan ninhidrin. Pemotongan kertas KLT yang disesuaikan dengan ukuran chamber yang digunakan. Sebelum dilakukan penotolan larutan asam amino, plat KLT terlebih dahulu diaktifasi melalui pemanasan. Tujuan pengaktifan ini yaitu menghilangkan uap air pada plat KLT, sehingga dalam proses elusi nantinya plat KLT dapat menyerap eluen dengan baik. Setelah dilakukan aktifasi plat KLT, selanjutnya larutan asam amino ditotolkan pada plat KLT di bagian base line tepi bawah menggunakan pipa kapiler. Setiap penotolan asam amino dilakukan tegak lurus dengan bidang tempat menotol, serta hanya dilakukan satu kali. Tujuannya adalah untuk menghindari terjadinya komet (noda berekor) pada plat. Sebelum plat KLT dimasukkan ke dalam chamber, chamber terlebih dahulu dijenuhkan dengan eluen dengan cara menutup rapat chamber yang berisi eluen dengan menggunakan isolasi. Tujuan penjenuhan ini adalah agar proses elusi dapat berjalan dengan cepat serta untuk mencegah penguapan eluen. Setelah eluen dijenuhkan dan plat KLT telah ditotolkan larutan asam amino dan sampel, plat KLT dimasukkan dalam chamber dan dilakukan proses elusi sampai bayang-bayang eluen mencapai end line (batas akhir elusi). Setelah plat KLT diangkat dari eluen, kemudian dikeringkan dan disemprotkan dengan larutan ninhidrin, yang bertujuan
untuk memberikan warna pada noda asam amino dan ninhidrin berfungsi sebagai pereaksi spesifik terhadap asam amino dengan membentuk warna ungu (lembayung) bagi asam amino glisin dan larutan sampel. Untuk memperjelas noda asam amino, plat KLT dimasukkan dalam inkubator. Proses elusi dibiarkan beberapa saat agar eluen mencapai jarak tertentu yang telah diberi tanda dan setelah sampai pada garis tanda, plat KLT dikeringkan dengan inkubator agar pelarut menguap sempurna sehingga noda yang terbentuk tidak melebar. Selanjutnya dilakukan pengukuran jarak eluen dan jarak noda dari tempat penotolan. Berdasarkan hasil perhitungan nilai Rf, maka diperoleh nilai Rf yang bervariasi antara satu asam amino dengan asam amino yang lainnya. Nilai Rf glisin 0,23 cm, tirosin 0,36, dan nilai Rf sampel 0,27 cm.
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil pengamatan, dapat disimpulkan bahwa: 1. Nilai Rf untuk asam amino glisin adalah 0,23 cm, tirosin 0,36 cm, dan larutan sampel 0,27 cm. 2. Larutan sampel diidentifkasi berdasarkan nilai Rf, dimana nilai Rf sampel berdasarkan percobaan sama dengan nilai Rf asam amino glisin berdasarkan teori sehingga sampel mengandung asam amino glisin.
5.2 Saran 5.2.1 Saran untuk Laboratorium
Alat yang digunakan pada percobaan ini terutama pipet tetes diperbanyak, agar praktikum berjalan dengan lancar.
5.2.2 Saran untuk Percobaan
Bahan yang digunakan tidak hanya asam amino glisin dan tirosin. Sebaiknya menggunakan asam amino yang lain agar lebih banyak yang dapat dibandingkan dan diketahui nilai Rf berdasarkan praktikum.
5.2.3 Saran untuk Asisten
Cara
penjelasan
prosedur
serta
pengarahan
pengerjaaan sudah baik dan mudah dimengerti.
dalam
langkah-langkah
DAFTAR PUSTAKA
Aisyah, 2008, Kromatografi (Online), (http://rgmaisyah.wordpress.com/kromatogra fi, diakses pada tanggal 05 April 2014). Day, R. A., dan Underwood, A.L., 2001, Analisis Kimia Kuantitatif edisi keenam, diterjemahkan oleh : Iis Sopyan, Erlangga, Jakarta. Hart, H., Craine, L.E., dan Hart, D.J., 2003, Kimia Organik : Edisi Sebelas, diterjemahkan oleh : Suminar Setiati Achmadi, Erlangga, Jakarta. Martin, A., Swarbrick, J., dan Cammarata, A., 1993, Farmasi Fisik, UI-Press, Jakarta. Poedjiadi, A., dan Supriyanti, T., 2007, Dasar-Dasar Biokimia, UI-Press, Jakarta. Rediatning, W., dan Kartini, N., 1987, Analisis Asam Amino dengan Kromatografi Cairan Kinerja Tinggi Secara Derivatisasi Prakolom dan Pascakolom, Jurnal Proceedings ITB, 20 (1/2): 41-59. Wall, P.E., 2005, Thin-Layer Chromatography, The Royal Society Chemistry, Ukraina. Watson, D.G., 2009, Analisis Farmasi, EGC, Jakarta. Wilbraham, A.C., dan Matta, M.S., 1992, Pengantar Kimia Organik dan Hayati, Penerbit ITB, Bandung.
LEMBAR PENGESAHAN
Makassar, 08 April 2014 ASISTEN
PRAKTIKAN
SARTIKA
MARETRIN
\
LAMPIRAN
Lampiran 1. Bagan Prosedur Kerja 1.1 Pembuatan Eluen
n-butanol, asam asetat, dan air 2,5 : 0,6 : 2,6 mL -
Disiapkan dan dikeringkan chamber.
-
Dimasukkan ke dalam gelas ukur menggunakan pipet tetes.
-
Dimasukkan ke dalam chamber.
-
Chamber ditutup dan didiamkan hingga chamber jenuh terhadap eluen.
Hasil
1.2 Penotolan Sampel
Glisin, tirosin, dan larutan sampel -
Plat KLT dikeringkan sebelum digunakan.
-
Plat KLT dibuat dengan ukuran yang telah ditentukan dan 1 cm dari tepi atas dan tepi bawah.
-
Ditotolkan pada plat dengan menggunakan pipa kapiler.
-
Dikeringkan pada suhu kamar.
Hasil
1.3 Proses Elusi
Plat KLT -
Dimasukkan ke dalam chamber untuk dilakukan proses elusi.
-
Dihentikan proses elusi setelah eluen telah mencapai tanda batas yang ditentukan.
-
Dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan dalam suhu kamar.
-
Disemprot dengan larutan ninhidrin 2 %.
-
Dikeringkan di dalam incubator.
-
Noda yang terbentuk pada plat KLT diberi garis lingkaran dengan menggunakan pensil.
-
Diukur jarak eluen dan jarak totolan ke noda.
-
Dihitung nilai Rf.
Hasil
Lampiran 2. Perhitungan nilai R f
Rf glisin
Rf tirosin
Rf sampel
jarak noda noda
jarak tempuh eluen
1,1 cm
jarak noda
jarak tempuh eluen
jarak tempuh eluen
0,23
1,7 cm
jarak noda
4c m
4 cm
1,3 cm
4 cm
0,36
0,27
Lampiran 3. Nilai Rf secara teori Tabel nilai Rf 20 asam amino No
Asam Amino
Nilai Rf
1
Histidin
0,11
2
Glutamin
0,13
3
Lisin
0,14
4
Arginin
0,20
5
Asam aspartat
0,24
6
Glisin
0,26
7
Serin
0,27
8
Asam glutamate
0,30
9
Treonin
0,35
10
Alanin
0,38
11
Sistein
0,40
12
Prolin
0,43
13
Tirosin
0,45
14
Asparagin
0,50
15
Metionin
0,55
16
Valin
0,61
17
Triptofan
0,66
18
Fenilalanin
0,68
19
Isoleusin
0,72
20
Leusin
0,73
Lampiran 4. Gambar Hasil Pengamatan
Gambar 4.1. Plat KLT dalam chamber pada proses elusi
Gambar 4.2 Plat KLT setelah proses elusi
