PRÁCTICA N° 6 ANÁLISIS FARMACOGNÓSTICO Y TAMIZAJE FITOQUÍMICO PRELIMINAR EN EXTRACTOS ESTANDARIZADOS (EXTRACTO ETANÓLICO) MÉTODO DE SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE DROGAS VEGETALES (CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA)
MARCO TEÓRICO: EXTRACTO ESTANDARIZADO Y TAMIZAJE FITOQUÍMICO
Tamizaje Tamizaje Fitoquímico: El tamizaje fitoquímico o screening fitoquímico es una de las etapas iniciales de la investigación fitoquímica, que permite determinar cualitativamente los principales grupos químicos químicos presentes en una planta y a partir de allí, orientar la extracción y/o fraccionamiento de los ex tractos para el aislamiento de los grupos de ma yor inters!
El tamizaje fitoquímico consiste en la extracción de la planta con solventes apropiados y la aplicación de reacción de color y precipitación! "e#e de permitir la evaluación r$pida, con reacciones sensi#les, reproduci#les y de #ajo costo! %os resultados del tamizaje fitoquímico constituyen &nicamente en una orientación y de#e de interpretarse en conjunto con los resultados del screening farmacológico!
'sí cuando una planta revela acción so#re el sistema nervioso central durante el tamizaje farmacológico y presencia de alcaloides en el tamizaje fitoquímico, es #astante pro#a#le que la acción farmacológica se de#a a la fracción alcaloidal! "e la misma manera, el (ec(o (e c(o de evidenciarse acción anti)inflamatoria an ti)inflamatoria en el tamizaje farmacológico y la presencia de flavonoides en el tamizaje fitoquímico, puede dar lugar a procesos de aislamiento y sometimiento a prue#as m$s especificas de estos compuestos! Efectos cat$rticos pueden ser asociados a las antraquinonas! antraquinonas! %a presencia de glicósidos cianognicos durante la marc(a fitoquímica puede dar lugar a la descartación de la planta por su alta toxicidad! *uc(os principios activos presentan una estructura química perfectamente definida, mientras que otros, al formar parte de mezclas complejas resulta difícil determinar cu$l es el compuesto activo! %a extracción o#tiene porciones medicinalmente activas a partir de los tejidos de las plantas y animales, de los componentes inertes de los mismos, mediante el uso d e solventes selectivos, utilizando procedimientos esta#lecidos y correctamente estandarizados! +ara poder realizar el aislamiento e !n "#in$i"io natural en condiciones óptimas, se de#e tener en cuenta una serie de dificultades, in(erentes a la propia planta o materia prima como al tipo de compuesto a extraer! +or esta razón la planta se somete a una serie de o"e#a$iones "#e%ias que facilitan y mejoran el rendimiento rend imiento de la extracción! Existen una serie de mtodos que (an sido desarrollados y aplicados para una u na detección de los diferentes constituyentes químicos en las plantas, #asadas en la extracción de stos con solventes apropiados y en la aplicación aplicación de prue#as de coloración o precipitación llamado Tamizaje Fitoquímico!
CROMATO&RAFÍA EN CA'A FINA (CCF o T)C* %a cromatografía en capa fina en ingls t(inlayer c(romatograp(y o T%-. es una tcnica an alítica r$pida y sencilla que permite:
•
"eterminar el grado de pureza de un compuesto! e puede determinar así, por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación! • -omparar muestras! i dos muestras corren igual en placa podrían ser idnticas! i, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia! • 0ealizar el seguimiento de una reacción! Es posi#le estudiar cómo desaparecen los reac tivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, sa#er cu$ndo la reacción (a aca#ado! • %a muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una l$mina de pl$stico o aluminio que previamente (a sido recu#ierta de una fina capa de adsor#ente fase estacionaria.! Entonces, la l$mina se coloca en una cu#eta cerrada que contiene uno o varios disolventes mezclado eluyente o fase móvil.! ' medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a travs del adsor#ente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsor#ente!
MATERIA)ES: • • •
Extracto etanólico de la especie vegetal a investigar! 0eactivos para el an$lisis cualitativo tamizaje fitoquímico. 0eactivos para el an$lisis cualitativo cromatografía en capa fina.
'#o$eimiento: '#!e+a e sol!+ilia Filtrar el extracto etanólico del mtodo de maceración de 1 a 2 días
colocar 3 m% del extracto fluido o filtrado en cada tu#o de vidrio, luego llevarlo a 4a5o *aría (asta sequedad!
Res!ltao:
META,O)ITO
COM'UESTOS FENÓ)ICOS
REACCIÓN
FeCl-
CAMBIOS OBSERVADOS
Cam+io e $olo# a %e#e X .otas e M' / III .otas e FeCl- 01 2
RESULTADOS
TANINOS
F)A4ONOIDES
&elatina
S5inoa
)a m!est#a $on !nas .otas e #ea$$ti%o .elatina se to#no e !ma $olo# "#e$i"itao enso +lan$o3 )a m!est#a mas 06 7%i#!tas e M. met8li$o / III .otas e 9Cl $$ se en$ont#o la "#esen$ia e Chalconas, auronas, isoflavanonas: no 5a
$olo#a$i;n3
AMINO
Nin5i#ina
Molis5
Ant#ona CAR,O9IDRAT OS
Fe5lin.
)a m!est#a m8s III .otas e nin5i#ina / $alenta# en ,3M 01 min3 Se o+t!%o !n $olo# %ioleta
)a m!ets#a "#o+lema / III .otas e Molis5 a.ita# / III .otas e 97SO= CC no 5!+o #ea$$i;n )a m!est#a "#o+lema / III .otas e Ant#ona no 5!no #ea$$i;n Si 5!+o $am+io e !ma $olo# t#ans"a#ente se to#no $olo# %e#e (A: C!SO=> ,: ta#t#ato mi?to e "otasio soio (@NaC=9=OB=97O**
NAFTAQUINON AS ANTRAQUINON AS Y ANTRANONAS
)a m!est#a "#o+lema / III .otas e ,o#nt#a.e# si 5!+o #ea$$i;n e !n $olo# #oo ,o#nt#a.e#
SA'ONINAS
6eneración de espuma
%a muestra 3 m% 7 1 m% de agua destilada 7 agitar fuertemente por 3 min! 'l agitar se producio espuma
-uestonario: Est!io ito!Gmi$o En la ta#la se pueden apreciar los meta#olitos secundarios presentes en la decocción de (ojas frescas y en el extracto fluido de (ojas secas8 se encontraron diferencia en la composición entre am#os!
*eta#olitos secundarios
"ecocción
Extracto fluido
Flavonoides
)
7
-ompuestos fenólicos
7
7
Triterpenos y esteroides
)
)
'lcaloides
)
7
9uinonas
)
7
-umarinas y compuestos lactónicos
7
7
'mino$cidos
7
7
'ntocianidinas
)
7
'z&cares reductores
7
7
7 significa una respuesta positiva para ese meta#olito, ) significa una respuesta negativa para ese meta#olito! 'm#os extractos mostraron tener compuestos fenólicos, cumarinas y compuestos lactónicos, amino$cidos y az&cares reductores! El extracto fluido presentó flavonoides, quinonas y antocianidinas en su composición!
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3! 4runeton =! +lantas *edicinales! Fitoquímica y Farmacognosia! Editorial 'cri#ia! >aragoza! ?@@3! ?! AuBlinsBi -! Farmacognosia! Estudio de las "rogas y ustancias *edicamentosas! Ediciones
