Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán Licenciatura en Bioquímica Diagnóstica Previo: Fraccionamiento celular
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HOMOGENI ZACI ÓNLahomogenei zaci ónconsi st eenr omp mperl as cél ul asyl i ber arsusor ganel osusandounavar i edaddemecani smo mos ( mol er ,pi car ,t r i t ur ar ,cambi osdepr esi ón,choqueosmó mót i co,congel aci ón
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ydescongel aci ón,homogenei zaci ónconul t r asoni dos…) .Lascél ul asse homogeneí zanenunasol uci óni sot óni ca,l ocualpr evi enequeser ompa sumembr anaporósmosi s,conelpH r egul adoyat emper at ur asbaj as par apr eveni rdañosenzi mát i cos. 2.Lahomogenei zaci ónesunpasomuycomúnenl apr epar aci ónde muest r asbi ol ógi casant esdelanál i si sdeáci dosnucl ei cosypr ot eí nas,o delest udi odecél ul as,met abol i smo,agent espat ógenosyot r osmuchos obj et i vos.Comor esul t ado,quedaunapast afinaqueconsi st edel as cél ul asysusor ganel osporsepar ado.Ser efier ealr ompi mi ent odel as cél ul asoelt ej i dodelcualsepr et endeext r aerl aor ganel aol amol écul a dei nt er ésbi ol ógi co.
CENTRIFUGACION DIFERENCIAL
En la centrifugación diferencial, el homogenado es centrifugado repetidas veces a altas velocidades ,sedimentándolo progresivamente en pequeñas partículas. El método está ilustrado en la fig. 2. La primera centrifugación es a 6g por ! minutos, el cual sedimenta la fracción nuclear. Este "pellet# contiene el n$cleo, células intactas % te&ido..L pró'ima separación es el so(renadante postnuclear ó partículas suspendidas en líquido so(re el "pellet# nuclear, el cual es tranferido a otro tu(o de centrífuga % se centrífuga a !, g por ) minutos en una centrífuga refrigerada. El material sedimentado se conoce como fracción mitocondrial * éste contiene mitocondria % micro cuerpos.
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+alcula el +- utiliando la siguiente fórmula/ +- 0 r 1 2 3 g, donde/ +- 0 relativo al campo centrífugo, o la relación de la aceleración centrífuga causada por el giro a la aceleración gravitacional de la 4ierra r 0 el radio de giro del rotor 1 0 la velocidad angular en radianes por segundo g 0 la gravedad de la 4ierra 578 mm3s29 2.
La +- es una función de velocidad de centrifugación en revoluciones por minutos 5rpm9 % la distancia de partículas desde el e&e de rotación. +onociendo esta distancia 5'9 % el 5rpm9, se puede determinar el +- de la ecuación / +- 0 !.! ' !:; 5rpm92',
Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán Licenciatura en Bioquímica Diagnóstica Previo: Fraccionamiento celular donde ' se toma como la distancia 5en cm9 desde el e&e de rotación hasta el margen de afuera del tu(o de centrífuga.
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PREGUNTA 6 (LA CONTESTE CON MIS PALABRAS PORQUE NO ENCUENTRO COMO PONERLA) Si se puede realizar frai!"a#ie"$! elular de es$e !r%&"ul! $e"ie"d! l!s uidad!s "eesari!s #edia"$e u"a '!#!%e"eizai" #a"ia ! u"a e"$rifu%ai"* l! +ue se puede !,$e"er es el A-N de la lula* es$e #$!d! es #u. se"ill! . r&pid!* l!s #a$eriales s!" de us! !#/" . es de l!s #$!d!s pri"ipal#e"$e e"se0ad!s e" el &rea de la ,i!+u1#ia
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L!s !l!ra"$es 2i$ales per#i$e" !,ser2ar #!2ilidad* as1 !#! al%u"!s de sus !r%a"el!s ! i"lusi!"es $e0idas* si" da0! apare"$e3 es$!s se prepara" e" s!lui!"es au!sas ! al!'lias #u. diluidas4 E" $a"$! +ue l!s !l!ra"$es supra2i$ales* au" ua"d! $ie"e" la 2e"$a5a de 'aer #&s e2ide"$es al%u"!s !r%a"el!s* prese"$a" el i"!"2e"ie"$e de afe$ar la 2ia,ilidad de l!s !r%a"is#!s4 Es$!s !l!ra"$es 2ar1a" e" su !#p!sii" . !"sis$e" e" #ezlas de rea$i2!s +ue i"lu.e" el !l!ra"$e* &id!s* alde'1d!s* al!'!les . a%ua4 L!s pri#er!s se aplia" dire$a#e"$e e" la #ues$ra* e" $a"$! +ue para l!s supra2i$ales se re!#ie"da apliar u"a pe+ue0a a"$idad del !l!ra"$e al p!r$a!,5e$!s . de5ar sear . p!s$eri!r#e"$e !l!ar la #ues$ra4 Para +ue la apliai" del !l!ra"$e sea u"if!r#e* se re!#ie"da e$e"derl! !" la a.uda de !$r! p!r$a!,5e$!s4
Enl apr esent epr áct i caseut i l i zaeláci docar mí ni cocomoagent edet i nci óndelmat er i al genét i codecél ul asveget al esyembr i onessomát i cosensuspr i mer aset apas.Est epi gment o
Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán Licenciatura en Bioquímica Diagnóstica Previo: Fraccionamiento celular esnecesar i out i l i zar l oenf or mapr eci pi t adaconunmet al ,quedacomoor i genuncar mí n, mi smoquealuni r l oaláci doacét i copr oduceacet ocar mí n.Lanuevapol ar i daddeest e compuest oper mi t equeseunaconl osáci dosdelnúcl eopr esent esencr omosomasycabezas embr i ogéni cas.Par adet er mi narl apr esenci adecal l oembr i ogéni coendi ver sosexper i ment os dei nducci óndeembr i ogénesi ssomát i ca,amenudoesnecesar i ol l evaracabounpr ocesode t i nci óndobl eodi f er enci alqueper mi t ahacervi si bl ealmi cr oscopi ol asest r uct ur asdei nt er és. Losembr i onessomát i cospuedenserdet ect adosconf aci l i dadalmi cr oscopi osisont eñi dos di f er enci al ment e,est oesposi bl egr aci asaquel ascél ul asembr i ogéni cast i enenal t as concent r aci onesdepr ot eí nasyáci dor i bonucl ei co,per ot ambi énal apr esenci adecél ul as basal esqueposeenmat er i alpr i nci pal ment ebási co.
