INTRODUCCIÓN – MICROSCOPÍA
El microscopio es una de las herramientas más útiles, cuando trata de identificar objetos más pequeños que los que se pueden ver a simple vista. Es comúnmente usado por los científicos e investigadores para ver los detalles en los objetos pequeños, tales como bacterias, insectos minúsculos, polen y las células de los tejidos vivos.
OBJETIVOS DEL INFORME
Determinar el estudio de la microscopia en la histología.
Conocer las diferentes clases de microscopio.
Determinar las partes y cuidado del microscopio.
MICROSCOPIO
El microscopio se utiliza para examinar objetos muy pequeños situados a muy corta distancia de la lente objetivo. Explicar muchas enfermedades como causadas por fuerzas superiores malignas y afirmar que muchos seres vivos nacían de la nada, por generación espontanea El descubrimiento del microscopio señala el comienzo de la biología moderna, ya que este instrumento permitió impulsar los estudios biológicos y puso al descubierto el universo de lo diminuto. Las raíces de este logro se remontan a las civilizaciones antiguas. En las ruinas de ciudades como Nínive se hallaron lentes hechos de cristales de rocas talladas, al igual que en Pompeya y Herculano. Por otra parte, se sabe que Nerón observaba los combates de los gladiadores a través de una esmeralda tallada, y que los médicos romanos estudiaban los tejidos enfermos por medio de una bola de vidrio llena de agua para amplificar las imágenes. Antony van Leeuwenhoek (1632 – 1723), a quien algunos consideran como el padre del microscopio compuesto. El holandés Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), perfeccionó el microscopio usando lentes pequeñas, potentes, de calidad, y su artefacto era de menor tamaño. Alrededor del 1676 logró observar la cantidad de microorganismos que contenía el agua estancada. También descubrió los espermatozoides del semen humano; y más adelante, en 1683, las bacterias. Durante las siguientes décadas los microscopios fueron creciendo en precisión y complejidad y fueron la base de numerosos adelantos científicos. Con la llegada del microscopio electrónico, en el siglo XX, se produjo un gran cambio. El microscopio electrónico sustituyó la luz por electrones; y las lentes por campos magnéticos. El primer microscopio electrónico lo construyó el físico canadiense James Hillier en 1937 y podía ampliar las imágenes hasta 7000 veces. Se continuó perfeccionando hasta llegar a aumentar unos dos millones de veces. En 1981 surgió el microscopio de efecto túnel (MET), que surgió aplicando la mecánica cuántica, y logrando atrapar a los electrones que escapan en ese efecto túnel, para lograr una imagen ultra detallada de la estructura atómica de la materia con una espectacular
resolución, en la que cada átomo se puede distinguir de otro, y que ha sido esencial para el avance, a su vez, de la microelectrónica moderna.
NORMAS Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO
Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento para lograr un enfoque correcto.
Subir el condensador utilizando el tornillo correspondiente.
Colocar la laminilla histológica sobre la platina, con el cubre-objetos hacia arriba y sujetándola con las pinzas.
Realice la observación y haga sus anotaciones. Determine cuál es la estructura que va a observar a mayor aumento y colóquela en el centro del campo.
Cambie al objetivo de mayor aumento. Si realizó el enfoque de manera correcta con el objetivo anterior, al colocar el objetivo de mayor aumento la imagen solo se debe enfocar girando única y lentamente el tornillo MICROMÉTRICO.
Al lograr el enfoque con el objetivo de mayor aumento debe realizar la observación moviendo constantemente el tornillo micrométrico para variar los planos de enfoque. De igual manera, abra o cierre el diafragma para regular la intensidad de la luz y mejorar el contraste. Haga sus observaciones.
Una vez finalizada la observación, coloque nuevamente el objetivo de menor aumento para retirar más fácilmente el preparado histológico.
Apague la lámpara, desenchufe y coloque el cable alrededor del microscopio, de manera holgada y sin apretarlo.
Cubra el microscopio con la funda protectora.
TÉCNICA HISTOLÓGICA USANDO LA COLORACIÓN:
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Hematoxilina-Eosina
La Hematoxilina (C.I. 75290) es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa Haematoxylum campechianum , conocida también con el nombre de palo de Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituye una substancia de color morado oscuro denominada hemateína. Se utiliza en histología para teñir los componentes aniónicos (ácidos) de los tejidos, a los que da una coloración violeta. Tiñe intensamente los núcleos de las células, dado que estos contienen ácidos nucleicos ricos en radicales ácidos. Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de oxidación, su capacidad de tinción es muy limitada. Por lo tanto, debe combinarse con iones metálicos, especialmente las sales de hierro (III) o aluminio (II), que actúan como mordientes. Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante básico, ya que el componente cromógeno reside en el complejo catiónico (básico) de la misma. Es de notar que la tinción histológica por hematoxilina no indica tanto la constitución química de los componentes celulares, sino la densidad de cargas eléctricas negativas de los mismos.
La Eosina es un colorante basofilo (afinidad con lo básico, porque es acida), en forma de polvo rojo cristalino, de uso ampliamente extendido en el ámbito industrial, desde la industria textil hasta el estudio biológico e histológico. Como curiosidad, también se utiliza en la coloración de la gasolina. La eosina ya era de uso común a finales del s.XIX, siendo el resultado de la acción del bromo sobre la fluoresceína. Actualmente existen dos compuestos conocidos como eosina y
que están íntimamente relacionados:
La eosina Y (C20H8Br 4O5, tetrabromofluoresceína, CI 45380, CI 45386), comúnmente conocida como eosina amarilla. La eosina B (C20H8Br 2 N2O9, dibromodinitrofluoresceína, CI 45400), también conocida como eritrosina B azulada.
Procedimiento de tinción La tinción hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La tinción hematoxilina y eosina es el método más popular de tinción utilizado en histología y medicina diagnostica. El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos Azul y Púrpura, como por ejemplo los
núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.
Técnica
Sumergir los preparados histológicos en xilol para eliminar los excesos de parafina. Luego pasan por una serie de alcoholes (100°. 95° y 70°). Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar excesos y se pasa rápidamente por alcohol ácido. Se lava nuevamente Se sumerge 30 segundos en eosina. Se pasa por otra serie de alcoholes, en orden creciente (70°, 95° y 100°). Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final
Resultados
Núcleo celular: Azul Citoplasma: Rosa Musculatura: Rojo , rosa o fucsia Glóbulos rojos: Rojo, anaranjado Fibrina: Rosa
CARACTERÍSTICAS GENERALES: TEJIDOS BÁSICOS
Tejido epitelial Reviste la superficie del cuerpo, tapiza cavidades y forma glándulas. Se caracteriza por: La estrecha relación entre sus células, existiendo una escasa sustancia intercelular. Se nutren a través del tejido que se encuentra por debajo, es decir el conectivo, se encuentra ricamente inervado Clasificación Según su función pueden ser de: revestimiento. Ejemplo: Piel. (Epidermis) -glandular. Función: secreción. Ejemplo: glándula mamaria, tiroides.
Tejido conectivo o conjuntivo . La principal característica es su sustancia intercelular o matriz extracelular, la cual es abundante y le da las características particulares al tejido conectivo. Ésta es producida por las células que, en este tejido, se encuentran muy separadas entre sí Los podemos clasificar en Tejido conectivo no especializado: o simplemente Tejido Conectivo podemos clasificarlo en dos tipos según la cantidad de fibras q posea su matriz: Tejido conectivo denso no modelado: se encuentra por debajo del conectivo laxo y posee predominancia de fibras colágenos desordenados y pocas células. Tejido conectivo denso modelado regular: sus fibras se encuentran ordenadas para proveer la resistencia máxima. Ejemplos de éstos son los tendones ligamentos.
Tejido muscular Se define por la capacidad funcional que posee, es decir por la función contráctil. Para esto sus células poseen en la mayor parte de su citoplasma proteínas contráctiles: miosina y actina. Podemos clasificarlo en tres tipos de acuerdo al aspecto de sus células contráctiles: Tejido muscular estriado, Tejido muscular estriado esquelético, Tejido muscular liso.
Tejido nervioso Compuesto por las neuronas, células altamente especializadas en la transmisión de impulsos eléctricos y varios tipos de células de sostén. Neuronas: Reciben y procesan la información del medio externo e interno y pueden asociarse con receptores y órganos sensoriales específicos para realizar éstas funciones La unión nerviosa se llama sinapsis en la cual la información que llega a través del axón pasa a la neurona siguiente a través de la secreción de Neurotransmisores
TERMINOLOGÍA
A. ENDOCITOSIS: es el movimiento de materiales hacia adentro de la célula, por la vía de vesículas de membrana
B. EXOCITOSIS: es el movimiento de materiales para afuera de la célula, por la vía de vesículas membranosas.
C. PINOCITOSIS: es un proceso biológico que permite a determinadas células y organismos unicelulares obtener líquidos orgánicos del exterior para ingresar nutrientes o para otra función.
D. FAGOCITOSIS: Es un tipo de endocitosis por el cual algunas células rodean con su membrana citoplasmática a una sustancia extracelular (un sólido) y la introducen al interior celular. Esto se produce gracias a la emisión de pseudópodos alrededor de la partícula o microorganismo hasta englobarla completamente y formar alrededor de él una vacuola, la cual fusionan posteriormente con lisosomas para degradar la sustancia fagocitada, la cual recibirá el nombre de fagosoma.
CUESTIONARIO 1) DEFINIR CÉLULA:
La célula es la unidad esencial que forma a todo ser vivo. Es además la estructura anatómica y funcional fundamental de la materia viva, capaz de vivir independientemente como entidad unicelular, o bien, formar parte de una organización mayor, como un organismo pluricelular. La célula presenta dos modelos básicos: procarionte y eucarionte. Su organización general comprende: membrana plasmática, citoplasma y genoma. La rama que se ocupa de la celula es la citologia.
1) FORMAS DE LA CÉLULA:
Las células varían notablemente en cuanto a su forma, la que de una manera general, puede producirse a dos tipos: Célula de Forma Variable o Regular.- son células que constantemente cambian de forma, según se cumplan sus diversos estados fisiológicos. Por ejemplo, los leucocitos en la sangre son esféricos y en los tejidos toman diversas formas. Células de Forma Estable, Regular o Típica.- la forma estable que forman las células en los organismos multicelulares se debe a la forma en que se han adaptado para cumplir ciertas funciones en determinados tejidos u órganos. Son de las siguientes clases: a) Isopiametrica.- son las que tienen sus tres dimensiones iguales casi iguales. Pueden ser: - Esféricas, como óvulos y los cocos (bacterias)
- Ovoides, como las levaduras - Cúbicas, como en el folículo tiroideo. b) Aplanadas.- sus dimensiones son mayores que su grosor. Generalmente forman tejidos de revestimiento, como las células epitelialesc) Alargadas.-en las cuales un eje es mayor que los otros dos. Estas células forman parte de ciertas mucosas que tapizan el tubo digestivo; otro ejemplo tenemos en las fibras musculares. d) Estrelladas.- como las neuronas, dotados de varios apéndices o prolongaciones que le dan un aspecto estrellado.
2) ¿EN QUE PARTE DE LA CÉLULA SE ENCUENTRA EL ADN?
Se encuentra en el núcleo; esta dentro de los cromosomas que intervienen en la herencia.
4) DIFERENCIA ENTRE ORGANELOS E INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS, EJEMPLOS Y EN DONDE SE ENCUENTRAN
Los organelos son estructuras suspendidas en el citoplasma de la célula eucariota, que tienen forma y funciones especializadas bien definidas, diferenciadas y que presentan su propia envoltura de membrana lipídica: mitocondrias, retículo endoplásmico, aparato de Golgi, cloroplastos, vacuolas, lisosomas, peroxisomas y núcleo. Las inlusiones citoplamáticas son moléculas, macromoléculas y complejos
macromoleculares. Entre las inclusiones más importantes están: almidón, lípidos, proteínas, pigmentos, microtúbulos, microfilamentos, etc
5) ¿COMO ESTA FORMADO EL CITO ESQUELETO DE LA CÉLULA?
El citoesqueleto es un entramado tridimensional de proteínas que provee el soporte interno para las células, ancla las estructuras internas de la misma e interviene en los fenómenos de movimiento celular y en su división. En las células eucariotas, consta de microfilamentos, filamentos intermedios y microtúbulos, mientras que en las procariotas está constituido principalmente por las proteínas estructurales FtsZ y MreB. El citoesqueleto es una estructura dinámica que mantiene la forma de la célula, facilita la movilidad celular (usando estructuras como los cilios y los flagelos), y desempeña un importante papel tanto en el transporte intracelular (por ejemplo, los movimientos de vesículas y orgánulos) y en la división celular.
6) DIFERENCIA ENTRE MEIOSIS Y MITOSIS
En el caso de la mitosis.- es la division de una celula somatica (corporal o no sexual) en la que se obtiene como resultado 2 celulas hijas que posean las mismas funciones y el mismo material genetico que la celula original, por eso se dice que son identicas a la celula progenitora en la meiosis.- es la division celular en la que se forman los gametos o celulas sexuales, al concluir esta division (de hecho son 2 divisiones, la primera es una meiosis verdadera y la segunda es una pseudomitosis), son producidas 4 celulas hijas que tienen la mitad del material genetico de la celula progenitora, es decir 1 cromosoma de cada par. la mitosis es comun en todos los organismos vivientes (en bacterias la llamamos fision binaria, por la ausencia de los husos acromaticoas, pero
no importa mucho), todo organismo viviente sea unicelular o multicelular posee celulas que realizan mitosis.
La meiosis es unica de los organismos multicelulares. (las bacterias no hacen meiosis y esta se realiza solo a partir de los protistas pluricelulares)
7) EXPLIQUE LA MOTIVILIDAD CELULAR:
Habilidad de moverse espontánea e independientemente. Está referida tanto a organismos unicelulares como multicelulares.
8) ¿QUE PROCESOS PRESENTA LA MUERTE CELULAR?
La apoptosis, es una forma de muerte celular, que está regulada genéticamente. Glándulas intestinales (que es un epitelio de crecimiento rápido) y durante la lactancia en su período preparatorio, en que el tejido mamario aumenta su masa celular. Está en equilibrio respecto de la mitosis en los tejidos adultos sanos.
9) ¿CUAL ES EL PROMEDIO DE VIDA NORMAL DE LAS CELULAS?
Las células que menos viven son las que están sometidas a un mayor desgaste. Las células que recubren el interior del sistema digestivo, que están sometidas al ataque constante de ácidos y enzimas digestivas, viven una media de 5 días (aunque el resto de células del sistema digestivo viven más de 15 años en promedio). Las células de la capa externa de la piel, que resisten las agresiones del medio exterior, duran unas dos semanas (el polvo que respiramos está en buena medida formado por las escamas que se nos desprenden).
Los glóbulos rojos de la sangre, muy golpeados después de viajar muchos kilómetros por el torrente circulatorio, duran unos 120 días. Las células del hígado, que deben procesar todo tipo de sustancias tóxicas, se desgastan también pronto: viven entre 300 y 500 días.
10) PORQUE LA HEMATOXILINA TIÑE AL NÚCLEO DE COLOR AZUL OSCURO Y PORQUE LA EOSINA TIÑE AL CITOPLASMA DE COLOR ROSA
La hematoxilina es un colorante catiónico mientras que la eosina es un colorante aniónico perteneciente a los xantenos. Se teñirán los núcleos de azul, citoplasmas en rosa, músculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glóbulos rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso.La eosina (del griego Eos, "amanecer")es un colorante, en forma de polvo rojo cristalino, de uso ampliamente extendido en el ámbito industrial, desde la industria textil hasta el estudio biológico e histológico. Como curiosidad, también se utiliza en la coloración de la gasolina. Su fórmula es C20H6Br4Na2O5. La eosina es un compuesto ácido cuya propiedad está basada en su polaridad negativa, lo que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva. Por ello colorea componentes y orgánulos citoplasmáticos, colá geno y fibras
musculares, pero no los nucleos (que son básicamente ácidos nucleicos y están cargados negativamente). Aquellos componentes que se tiñen con eosina son conocidos como acidófilos o eosinófilos. La coloración resultante de la tinción con
eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. Es fuertemente fluorescente, aunque esta característica es muy p oco
utilizada.
