LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA
Uji Kromatografi Lapis Tipis Dengan Berbagai Eluen
Nama
: Wika Tanika
NIM/ Kelas : 201510410311120/Farmasi 201510410311120/Farmasi C Kelompok
:2
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2018
I. TUJUAN
Mahasiswa mampu menjelaskan tentang kaitan antara polaritas eluen dengan harga Rf. II. TINJAUAN PUSTAKA
1. Pengertian Kolesterol
Gambar : Struktur Koresterol Kolestrol merupakan sebuah struktur organik yang mempunyai berat molekul 386 Da dan memiliki 27 atom karbon, dimana 17 atom diantaranya tergolong kepada 4 cincin yang tergabung, 2 termasuk kedalam kelompok metil bersegi yang lengket pada pertemuan cincin AB dan CD, dan delapan adalah pada rantai sisi perifer. Kolesterol tersusun oleh karbon hidrogen dan karbon, dengan kelompok hidroksil soliter berlekatan pada C3. Kolesterol juga hampir jenuh secara sempurna, memiliki hanya satu ikatan ganda C5 dan C6 (Dominiczak dan Wallace,2009). Kolesterol (C27H45OH) adalah alkohol steroid yang ditemukan dalam lemak hewani/minyak, empedu, susu, kuning telur. Kolesterol sebagian besar disintesiskan oleh hati dan sebagian kecil diserap dari diet. Keberadaan kolesterol dalam pembuluh darah yang kadarnya tinggi akan membuat endapan / kristal lempengan yang akan mempersempit / menyumbat pembuluh darah (Sutejo, 2006). Kolesterol adalah lipida struktural (pembentuk struktur sel) yang berfungsi sebagai komponen yang dibutuhkan dalam kebanyakan sel tubuh. Kolesterol merupakan bahan yang menyerupai lilin, sekitar 80% dari kolesterol diproduksi oleh hati dan selebihnya diperoleh dari makanan yang kaya kandungan kolesterol seperti daging, telur dan produk berbahan dasar susu. Kolesterol sangat berguna dalam membantu pembentukan hormon, vitamin D, lapisan pelindung sel syaraf,
membangun dinding sel, pelarut vitamin (vitamin A, D, E, K) dan mengembangkan jaringan otak pada anak-anak (Silalahi, 2006). Sumber dari kolesterol tubuh adalah baik dari sintesis kolesterol pada sel – sel tubuh, terutama hati dan juga asupan diet terutama produk hewani seperti, putih telur, daging merah, dan mentega (Sherwood,2007). Biosintesis kolesterol dapat dibagi menjadi 5 tahap, yaitu: a. Sintesis mevalonat dari asetil-CoA. b. Unit isoprenoid dibentuk dari mevalonat melalui pelepasan CO 2. c. Enam unit isoprenoid mengadakan kondensasi untuk membentuk senyawa antara skualen. d. Skualen mengalami siklisasi untuk menghasilkan senyawa ster oid induk, yaitu lanosterol. e. Kolesterol dibentuk dari lanosterol setelah melewati beberapa tahap lebih lanjut, termasuk pelepasan tiga gugus metil (Murray, 2003). 2. Fungsi Kolesterol Kolesterol merupakan salah satu bahan makanan yang dikonsumsi bersama lemak di dalam darah ada bersama-sama lemak. Adapun fungsinya antara lain : a. Membuat hormon seks (untuk perkembangan dan fungsi organ s eksual) b. Membuat hormon adrenalin (untuk metabolisme dan keseimbangan garam dalam tubuh) c. Sintesis vitamin D d.
Sintesis garam empedu (Soeharto, 2001).
3. Macam- Macam Kolesterol Kolesterol berdasarkan kepadatan atau ultrasentrifugasi terdiri dari: a. Kilomikron adalah lipoprotein dengan kandungan lemak yang lebih banyak tetapi dengan protein yang sedikit, kilomikron memiliki fungsi sebagai pengangkutan lemak paling penting dalam darah (Heslet,2002). b. VLDL ( Very Low Density Lipoprotein) adalah lipoprotein nomor 2 terbesar dengan protein yang lebih kecil namun terkonsentrasi dengan kandungan lemak terbesar, berfungsi untuk mengangkut trigliserida yang dibentuk oleh hati (Heslet,2002). c. LDL (Low Density Lipoprotein) adalah lipoprotein terkecil tetapi hanya satu kandungan lipoprotein terbesar dan satu lemak yang paling kecil, berfungsi untuk mengangkut kolesterol (Heslet,2002).
d. HDL ( High Density Lipoprotein) adalah lipoprotein paling kecil dengan kandungan protein paling banyak dan konsentrasi lemak paling kecil, berfungsi untuk mengangkut kolesterol dan fosfolipid (Heslet,2002). 4. Metode Pemeriksaan Kolesterol Pemeriksaan kolesterol darah adalah untuk mendeteksi kadar kolesterol dalam tubuh seseorang. Cara pemeriksaan kadar kolesterol terdapat 3 metode yaitu metode kolorimetri, metode kromatografi dan metode enzimatik. a. Metode Kolorimetri (Metode Lieberman-Burchard) Dasarnya adalah kolestrol dengan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat membentuk warna hijau kecoklatan. Absorbansi diukur dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 546 nm. Kelemahan dari metode ini adalah perbedaan penimbunan warna antara reaksi ikatan dari steroid selain kolesterol, interpretasi, hemoglobin, bilirubin, iodida, salisilat, vitamin dan vitamin D (Hardjoeno, 2003). b. Secara enzimatik Metode
CHOD-PAP
(Cholesterol
Oxidase
Diaminase
Peroksidase
Aminoantipyrin). Dasarnya adalah kolesterol ditentukan setelah hidrolisa dan oksidase H2O2 bereaksi dengan 4-aminoantipyrin dan phenol dengan katalisator peroksida membentuk quinoneimine yang berwarna.Absorbance warna ini sebanding dengan kolesterol dalam sampel. Kelebihannya yaitu terjadi reaksi dengan sterol tubuh yang bukan kolesterol. Metode pemeriksaan pada penelitian ini menggunakan CHODPAP dengan prinsip kolesterol ditentukan setelah hidrolisa enzimatik dan oksida.Indikator quinoneimine terbentuk dari hydrogen peroksida dan 4-aminotiphyrine dengan adanya phenol dan peroksidase. Reaksi kimia : Cholesterol ester + H2O → Cholesterol asam lemak Cholesterol + O2 → Cholesterol - 3 - One + H 2O2 2H2O2 + 4 – Aminoantipyrine + Phenol → quinoneimine + 4H 2O Nilai normal : <200 mg/dl (Hardjoeno, 2003). c. Secara kromatografi Metode CHOD-IOD ( Cholesterol Oxidase Diaminase Iodium ). Dasarnya adalah penyabunan kolesterol teresterifikasi dengan hidrolisa alkali,kemudian kolesterol yang tidak teresterifikasi diekstraksi dalam media organik dan dilihat dengan standart internal. Kelebihan metode ini cukup sensitif dan spesifik,serta sejumlah sampel yang dibutuhkan adalah hasil yang diperoleh 3% lebih rendah dibanding dengan kadar kolorimetri (Hardjoeno, 2003).
5. Kromatografi Secara Umum Kromatografi, komponen-komponen terdistribusi dalam dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Transfer massa antara fase bergerak dan fase diam terjadi bila molekulmolekul campuran serap pada permukaan partikel-partikel atau terserap. Pada kromatografi kertas naik, kertasnya digantungkan dari ujung atas lemari sehingga tercelup di dalam solven di dasar dan solven merangkak ke atas kertas oleh daya kapilaritas. Pada bentuk turun, kertas dipasang dengan erat dalam sebuah baki solven di bagian atas lemari dan solven bergerak ke bawah oleh daya kapiler dibantu dengan gaya gravitasi. Setelah bagian muka solven selesai bergerak hampir sepanjang kertas, maka pita diambil, dikeringkan dan diteliti. Dalam suatu hal yang berhasil, solut-solut dari campuran semula akan berpindah tempat sepanjang kertas dengan kecepatan yang berbeda, untuk membentuk sederet noda-noda yang terpisah. Apabila senyawa berwarna, tentu saja noda-nodanya dapat terlihat (Consden, Gordon dan Martin, 1994). Consden, Gordon dan Martin, memperkenalkan teknik kromatografi kertas yang menggunakan kertas saring sebagai penunjang fase diam. Kertas merupakan selulosa murni yang memiliki afinitas terhadap air atau pelarut polar lainnya. Bla air diadsorbsikan pada kertas, maka akan membentuk lapisan tipis yang dapat dianggap analog dengan kolom. Lembaran kertas berpran sebgai penyngga dan air bertindak sebagai fase diam yang terserap diantara struktur pori kertas (Consden, Gordon dan Martin 1994). 6. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) adakah suatu teknik yang sederhana yang banyak digunakan,metode ini menggunakan lempeng kaca atau lembaran plastik yang ditutupi penyerap atau lapisan tipis dan kering. Untuk menotolkan karutan cuplikan pada kempeng kaca, pada dasarya menggunakan mikro pipet atau pipa kapiler. Setelah itu, bagian bawah dari lempeng dicelup dalam larutan pengulsi di dalam wadah yang tertutup ( Bernaseoni, 2005). Kromatografi lapis tipis menggunakan plat tipis yang dilapisi dengan adsorben seperti silika gel, aluminium oksida (alumina) maupun selulosa. Adsorben tersebut berperan sebagai fasa diam. Fasa gerak yang digunakan dalam KLT sering disebut dengan eluen. Pemilihan eluen didasarkan pada polaritas senyawa dan biasanya merupakan campuran beberapa cairan yang berbeda polaritas, sehingga didapatkan perbandingan tertentu. Eluen KLT dipilih dengan cara trial and error.Kepolaran eluen sangat berpengaruh terhadap Rf (faktor retensi) yang diperoleh. Faktor retensi (Rf)
adalah jarak yang ditempuh oleh komponen dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh eluen. Rumus faktor retensi adalah:
Nilai Rf sangat karakterisitik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal tersebut dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam sampel. Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai kepolaran yang rendah, begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa diam bersifat polar. Senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fasa diam, sehingga menghasilkan nilai Rf yang rendah. Rf KLT yang bagus berkisar antara 0,2 - 0,8. Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan adalah mengurangi kepolaran eluen, dan sebaliknya (Ewing Galen Wood, 1985). KLT dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama, dipakai selayaknya sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif, atau preparatif. Kedua, dipakai untuk menjajaki system pelarut dan system penyangga yang akan dipakai dalam kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi. Fase gerak yang dikenal sebagai pelarut pengembang akan bergerak sepanjang fase diam karena pengaruh kapiler pada pengembangan secara menaik (ascending) atau karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun (descending) (Gritter, 1991). Kromatografi lapis tipis dalam pelaksanaannya lebih mudah dan lebih murah dibandingkan dengan kromatografi kolom. Demikian juga peralatan yang digunakan. Dalam kromatografi lapis tipis, peralatan yang digunakan lebih sederhana dan dapat dikatakan hampir semua laboratorium dapat melaksanakan setiap saat secara cepat. Beberapa keuntungan dari kromatografi planar ini (Gholib Gandjar, 2007) :
Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.
Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna, fluorosensi atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet.
Dapat dilakukan elusi secara menaik (ascending), menurun (descending), atau dengan cara elusi 2 dimensi.
Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak.
A. Fase diam Sifat fase diam yang satu dengan fase diam yang lain berbeda karena strukturnya, ukurannya, kemurniannya, zat tambahan sebagai pengikat dll. Fasa diam yang digunakan TLC tidak sama dengan yang digunakan untuk kromatografi kolom, terutama karena ukuran dan zat yang ditambahkan. Fase diam dij ual dengan spesifikasi tertentu, iaitu ukuran (diameter) dalam mesh atau j^m dan untuk kegunaannya (mis: untuk TLC atau kromatografi kolom). (elisa.ugm.ac.id). Beberapa fase diam yang banyak dijual dipasaran: a. Silika gel Silika gel merupakan fase diam yang sering digunakan pada TLC. Dalam perdagangan dijual dengan variasi ukuran (diameter) 10-40µm. Makin kecil diameter akan makin lambat kecepatan alir fase geraknya dengan demikian mempengaruhi kualitas pemisahan. Luas permukaan silica gel bervariasi dari 300-1000 m2/g. Bersifat higroskopis, pada kelembaban relatif 45-75% dapat mengikat air 7-20%. Macam-macam silka gel yang dijual dipasaran: Silika gel dengan pengikat. Pada umumnya digunakan pengikat gypsum, (CaSO4 515%). Jenis ini diberi nama Silika gel G. Ada juga menggunakan pengikat pati (starch) dan dikenal Silika gel S, penggunaan pati sebagai pengikat mengganggu penggunaan asam sulfat sebagai pereaksi penentuan bercak.Silika gel dengan pengikat dan indicator flouresensi. Jenis silica gel ini sama seperti silika gel diatas dengan tambahan zat berfluoresensi bila diperiksa dibawah lampu
UV
A,
panjang
atau
pendek.
Sebagai
indicator
digunakan
timahkadmium sulfida atau mangan-timah silikat. Jenis ini disebut Silika gel GF atau Silika gel GF254 (berflouresensi pada 254nm). -
Silika gel tanpa pengikat, dikenal dengan nama Silika gel H atau Silika gel N.
-
Silika gel tanpa pengikat tetapi dengan indicator flouresensi.
-
Silika gel untuk keperluan pemisahan preparative (elisa.ugm.ac.id).
b. Alumina Banyak digunakan setelah silika gel, alumina termasuk kelompok fase diam yang beraktifitas tinggi. Alumina yang digunakan TLC bersifat sedikit basa (pH 9), ada juga yang bersifat netral (pH 7) dan alumina yang bersifat asam (pH 4). Juga digunakan CaSO4 sebagai pengikat yang dapat menurunkan bebasaan pada tinggkat tertentu. Sepertihalnya Silica gel, alumina dikenal
dengan atau tanpa pengikat dan bahan indicator. Pemberian namapun identik dengan silika gel dengan code G.H.P.F (elisa.ugm.ac.id). c. Selulosa Menggunakan selulosa sebagai fase diam maka mekanisme pemisahannya sama seperti mekanisme pemisahan pada kromatografi kertas. Perbedaannya hanya serat selulosenya pada TLC/KLT lebih pendek dari pada serat selulosa kromatografi kertas. Panjang serat bervariasi 2-20 µ. Serat lebih pendek menyebabkan difusi rendah selama elusi dan menghasilkan bercak yang sempit (lebih kecil). Selulosa untuk TLC terdapat dim bentuk selulosa serat asli (contohnya MN 300) dan selulosa mikrokristal (contohnya Avicel). Fase diam selulosa biasanya digunakan senyawa yang bersifat polar (elisa.ugm.ac.id). B. Fase gerak Yang digunakan sebagai fase gerak biasanya adalah pelarut organik. Dapat digunakan satu macam pelarut organic saja ataupun campuran. Bilamana fase gerak merupakan campuran pelarut organik dengan air maka mekanisme pemisahan adalah partisi. Pemilihan pelarut organic ini sangat penting karena akan menentukan keberhasilan pemisahan. Pendekatan polaritas adalah yang paling sesuai untuk pemilihan pelarut. Senyawa polar akan lebih mudah terelusi oleh fase gerak yang bersifat polar dari pada fase gerak yang non polar. Sebaliknya, senyawa non polar lebih mudah terelusi oleh fase gerak non polar dari pada fase gerak yang polar (elisa.ugm.ac.id). Tabel : Pelarut organik yang sering digunakan sebagai fase gerak (deret eluotropik)
C. Konstanta dielektrik Kepolaran pelarut tergantung dari nilai konstanta dielektriknya. Nilai konstanta dielektrik beberapa pelarut: . Tabel : Nilai konstanta dielektrik beberapa pelarut
Pelarut heksana, eter, petroleum eter, dan kloroform digunakan untuk mengambil senyawa dengan kepolaran rendah sedangkan pelarut yang lebih polar misalnya alkohol dan etil asetat digunakan untuk mengambil senyawa yang lebih polar (Rusdi, 1990). a. Kloroform Terpenoid lakton diperoleh dengan ekstraksi berturut-turut dari nheksana, kloroform dan metanol dengan konsentrasi aktivitas tertinggi dalam fraksi kloroform. Kadang-kadang tanin dan terpenoid akan ditemukan dalam fase polar, tetapi tanin dan terpenoid lebih sering diperoleh dengan pelarut semi polar (Tiwari, et al., 2011). b. Etil asetat Etil asetat adalah pelarut yang paling populer dan merupakan pelarut yang penting untuk konsentrasi dan pemurnian antibiotik. Etil asetat juga digunakan sebagai perantara dalam pembuatan berbagai obat. Etil asetat biasanya digunakan untuk mengekstraksi senyawa semi polar. c. n-heksana Nama lain dari n-heksana (hexane) adalah kaproil hidrida, metil n-butil metan dengan rumus molekul CH3(CH2)B4CH3. n-Heksana mempunyai karakteristik sangat tidak polar, volatil, mempunyai bau khas yang dapat menyebabkan pingsan. Berat molekul n-heksana adalah 86,2 gram/mol dengan titik leleh -94,3 sampai -95,3°C. Titik didih n-heksana pada tekanan 760 mmHg adalah 66 sampai 71°C (Daintith, 1994). n-Heksana adalah pelarut
yang memiliki banyak kegunaan dalam industri kimia dan makanan, baik dalam bentuk murni atau sebagai komponen dari campuran n-heksana komersial. n-Heksana digunakan sebagai pelarut dalam ekstraksi secara sokletasi yang bertujuan untuk menghilangkan lemak. Ikatan pada n-heksana yang tunggal dan sifat yang kovalen menjadikan n-heksana tidak reaktif sehingga sering digunakan pelarut inert pada reaksi organik. d. Metanol Metanol adalah senyawa alkohol dengan 1 rantai karbon. Rumus kimia CH3OH, dengan berat molekul 32. Titik didih 640 -650 C (tergantung kemurnian), dan berat jenis 0,7920-0,7930 (juga tergantung kemurnian). Secara fisik metanol merupakan cairan bening, berbau seperti alkohol, dapat bercampur dengan air, etanol, chloroform dalam perbandingan berapapun, hygroskopis, mudah menguap dan mudah terbakar dengan api yang berwarna biru (Spencer,1988). Metanol merupakan pelarut yang bersifat universal sehingga dapat melarutkan analit yang bersifat polar dan nonpolar. Metanol dapat
menarik alkaloid, steroid, saponin, dan flavonoid dari tanaman
(Thompson, 1985). Penelitian Suryanto dan Wehantouw (2009) menunjukkan bahwa metanol mampu menarik lebih banyak jumlah metabolit sekunder yaitu senyawa fenolik,
flavonoid, dan tanin dalam daun Artocarpus altilis F.
dibandingkan dengan etanol. Tabel : Indeks Polaritas Pelarut
(Sholeh, 2009)
D. Nilai Rf Nilai Rf didefinisikan sebagi perbandingan jarak yang ditempuh oleh senyawa pada permukaan fase diam dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut sebagai fase gerak. Semakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula jarak bergeraknya senyawa tersebut pada plat kromatografi lapis tipis. Saat membandingkan dua sampel yang berbeda di bawah kondisi kromatografi yang sama, nilai Rf akan besar bila senyawa tersebut kurang polar dan berinteraksi dengan adsorbent polar dari plat kromatografi lapis tipis (Handayani, 2008). Nilai Rf sangat karakterisitik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal tersebut dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam sampel. Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai kepolaran yang rendah, begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa diam bersifat polar. Senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fasa diam, sehingga menghasilkan nilai Rf yang rendah. Rf KLT yang bagus berkisar antara 0,2 - 0,8. Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan adalah mengurangi kepolaran eluen, dan sebaliknya (Ewing Galen Wood, 1985). Ada beberapa faktor yang menentukan harga Rf yaitu (Underwood, 1999): a. Pelarut, disebabkan pentingnya koefisien partisi, maka perubahan perubahan yang sangat kecil dalam komposisi pelarut dapat menyebabkan perubahan-perubahan harga Rf. b. Suhu, perubahan dalam suhu merubah koefisien partisi dan juga kecepat an aliran. c. Ukuran dari bejana, volume dari bejana mempengaruhi homogenitas dari atmosfer jadi mempengaruhi kecepatan penguapan dari komponenkomponen pelarut dari kertas. Jika bejana besar digunakan, ada tendensi perambatan lebih lama, seperti perubahan komposisi pelarut sepanjang kertas, maka koefisien partisi akan berubah juga. Dua faktor yaitu penguapan dan kompisisi mempengaruhi harga Rf. d. Kertas, pengaruh utama kertas pada harga Rf timbul dari perubahan ion dan serapan, yang berbeda untuk macam-macam kertas. Kertas mempengaruhi kecepatan aliran juga mempengaruhi kesetimbangan partisi.
e. Sifat dari campuran, berbagai senyawa mengalami partisi diantara volume-volume yang sama dari fasa tetap dan bergerak. Mereka hampir selalu mempengaruhi karakteristik dari kelarutan satu terhadap lainnya hingga terhadap harga Rf mereka.
III.
ALAT DAN BAHAN
A. Alat 1. Hotplate 2. Plat KLT 3. Vial 4. Beaker glass 5. Chambe
B. Bahan 1. Ekstrak kolesterol 2. n-Heksana 3. Kloroform 4. Etil asetat 5. Methanol 6. Anisaldehida asam sulfat
IV. PROSEDUR KERJA
1. Laurtkan sedikit kolestrol ke dalam kloroform 2. Totolkan pada 4 plat KLT (Kiesel Gel 254) 3. Siapkan 4 macam eluen (fase gerak) yaitu : a. n-Heksana - etil asetat (1 : 1) b. n-Heksana - etil asetat (4 : 1) c. Kloroform – metanol (4 : 1) d. Kloroform – etil asetet (4 : 1) 4. Eluasi 4 plat KLT tersebut dengan eluen yang dibuat 5. Semprot dengan penampak noda anisaldehida asam sulfat 6. Panaskan pada suhu 100 ℃ sampai timbul noda berwarna merah ungu/ungu 7. Hitung harga Rf pada masing-masing KLT 8. Diskusikan, mengapa harga Rf pada masing-masing pleat berbeda
V. BAGAN ALIR
Laurtkan sedikit kolestrol ke dalam kloroform
Totolkan pada 4 plat KLT (Kiesel Gel 254)
Siapkan 4 macam eluen (fase gerak) yaitu : a. n-Heksana - etil asetat (1 : 1) b. n-Heksana - etil asetat (4 : 1) c. Kloroform – metanol (4 : 1) d. Kloroform – etil asetet (4 : 1)
Eluasi 4 plat KLT tersebut dengan eluen yang Semprot dengan penampak noda anisaldehida asam sulfat
Panaskan pada suhu 100 ℃ sampai timbul noda berwarna merah ungu/ungu
Hitung harga Rf pada masing-masing KLT
VI.
SKEMA KERJA
VII.
HASIL PENGAMATAN
Fase diam
: Kiesel Gel 254
Fase gerak
: - n-Heksana - etil asetat (1 : 1) - n-Heksana - etil asetat (4 : 1) - Kloroform – metanol (4 : 1) - Kloroform – etil asetet (4 : 1)
Penampak noda
: Anisaldehida asam sulfat (dipanaskan)
a. UV 254 nm
Sampel 1
Sampel 2
Sampel 3
Sampel 4
b. UV 365 nm
Sampel 3 Sampel 2 Sampel 1
Sampel 4
c. Derivatisasi Anisaldehida asam sulfat pada UV 365 nm
Sampel 1
Sampel 2
Sampel 3
Sampel 4
d. Derivatisasi Anisaldehida asam sulfat secara visual
Sampel 1
Sampel 2
Sampel 3
Sampel 4
Keterangan : a. Sampel 1 : Sampel yang dieluasi dengan fase gerak n-Heksana - etil asetat (1 : 1) b. Sampel 2 : Sampel yang dieluasi dengan fase gerak n-Heksana - etil asetat (4 : 1) c. Sampel 3 : Sampel yang dieluasi dengan fase gerak Kloroform – metanol (4 : 1) d. Sampel 4 : Sampel yang dieluasi dengan fase gerak Kloroform – etil asetet (4 : 1)
Tabel hasil nilai Rf Warna Bercak Noda Dengan Sinar UV
Sampel
Fase Gerak
Harga Rf (cm)
1
Sampel 1
n-Heksana- etil asetat (1 : 1)
0,9
Merah keunguan
2
Sampel 2
n-Heksana- etil asetat (4 : 1)
0,46
merah
3
Sampel 3
Kloroform – metanol (4 : 1)
0,88
Merah keunguan
4
Sampel 4
Kloroform – etil asetet (4 : 1)
0,64
Ungu merah
No.
VIII.
PEMBAHASAN
IX.
KESIMPULAN
DAFTAR PUSTAKA
Hardjoeno, H. 2003. Interprestasi Hasil Tes Laboraturium Diagnostik . Jakarta : EGC. Sutedjo, A.Y. (2006 ). Mengenal Penyakit Melalui Hasil Pemeriksaan Laboratorium. Jakarta: Amara Books. Murray, R.K., dkk. (2003). Biokimia Harper . Edisi 25. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Silalahi J. 2006. Antioksidan dalam Diet dan Karsinogenesis. Cermin Dunia Kedokteran. Sherwood L.2007. Human Physiology From Cells to Systems. 7th edition. Canada: Brooks/Cole Cengage learning. Soeharto. 2001. Pencegahan dan Penyembuhan Penyakit Jantung Koroner, Edisi Kedua . Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. Heslet, L. 1996. Kolesterol . Terjemahan Anton Adiwijoto. PT.Kesaint Blanc Indah: Jakarta. Hardjoeno. 2003. Interpretasi hasil Tes Laboratorium Diagnostik, Bagian dari Standar Pelayanan Medik . Lembaga Penerbitan. Universitas Makasar. Gritter, Roy J, dkk. 1991. Pengantar Kromatografi. Bandung: Penerbit ITB Rohman, Abdul. 2009. Kromatografi untuk Analisa Obat . Yogyakarta : Graha Ilmu Sastrohamidjojo, H. 1985. Kromatografi. Edisi I. Cetakan I. Yogyakarta : Liberty. Serma, J and Bernard F., 2003. Handbook of Thin-Layer Chromatography Third edition , Revised and Expanded. Marcell Dekker Inc. New York. Sudjadi, Drs. 1986. Metode Pemisahan. Yogyakarta: UGM Press Underwood, AL dan JR. Day R.A. 1988. Analisa Kimia Kuantitatif Edisi Keempat . Jakarta: Erlangga. Consden, Gordon dan Martin 1994. Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Istilah. Gramedia, Jakarta. Bernaseoni,G. 2005. Teknologi Kimia. PT Padya Pranita. Jakarta. Ewing, Galen Wood. 1985. Instrumental of Chemical Analysis Fifth edition. McGraw Hill. Singapore. Gholib, Ibnu.2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
