LAPORAN PRAKTIKUM UJI BIOKIMIA (UJI REAKSI SUSU LITMUS)
Disusun oleh : Indra Priawan M 4143220012 Biologi NK A 2014
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS NEGERI MEDAN 2017
I.
JUDUL
:
II.
TUJUAN
:
III.
TINJAUAN TEORITIS
REAKSI SUSU LITMUS
Mengetahui ciri pembentukan gas pada litmus
Mengetahui ciri reduksi litmus
Mengetahui dadih yang terbentuk
Mengetahui ciri proteolisis pada litmus
Mengetahui ciri reaksi alkali pada litmus
:
Mikroorganisme diisolasi dan dideterminasi untuk tujuan tertentu, misalnya untuk menentukan sifat penyebab sakit atau tidak, untuk mencari jenis yang berperan dalam industri, untuk tujuan penentuan jenis dalam taksonomu dan lai lain. Untuk mencapai tujuan tersebut perlu diketahui karakteristik biokimia dari mikroorganisme. Karakteristik biokimia ini berbeda dan spesifik untuk setiap jenis mikroorganisme. Karakteristik biokimia ini dikendalikan oleh enzim yang dihasilkan oleh mikroorganisme yang bersangkutan (Hasanah,2017). Uji biokimia bakteri merupakan suatu cara atau perlakuan yang dilakukan untuk mengidentifikasidan mendeterminasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi melalui sifat sifat fisiologinya. Proses biokimia erat kaitannya dengan metabolisme sel, yakni selama reaksi kimiawi yang dilakukan oleh sel yang menghasilkan energi maupun yang menggunakan energi untuk sintesis komponen komponen sel dam untuk kegiatan seluler seperti pergerakan (Lehninger, 1992). Suatu bakteri tidak dapat dideterminasi hanya berdasarkan sifat morfologinya saja, sehingga perlu diteliti sifat-sifat biokimianya dan faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhannya. Ciri fisiologisnya ataupun biokimianya merupakan kriteria yangamat penting didalam identifikasi spesimen bakteri yang tidak dikenal karena biakanataupun sel bakteri yang berbeda dapat tampak serupa, tanpa hasil pengamatanfisiologis yang memadai mengenai kandungan organik yang diperiksa makanpenentuan spesiesnya tidak mungkin dilakukan (Murray,2005). Karakterisasi dan klasifikasi sebagian mikroorganisme berdasarkan pada reaksi enzimatik maupun biokimia. Mikroorganisme dapay tumbuh pada beberapa tipe media yang memproduksi tipe metabolit yang dapat dideteksi dengan reaksi antara mikroorganisme
dengan reagen test yang dpat mengjasilkan oerubahan warna reagen. Adapun beberapa uji biokimia mikroorganisme ialah : a. Uji hidrolisis pati b. Uji hidrolisis lipid c. Uji reduksi nitrat d. Uji hidrolisis kasein e. Uji litmus milk (Pelczar, 2013). Penyusunan susu yang terbesar digunakan sebagai dasar uji biokimia dalam media litmus milk adalah laktosa, kasein, lacto-albumin dan lactoglobulin. Untuk melihat adanya perubahan metabolisme yang diproduksi dalam medium, digunakan pH indikator yaitu Oxidation Reduction indicator litmus, Indikator ini akan menyatu dalam medium. Saat ini media litmus milk merupakan media yang baik untuk mikroorganisme yang dapat mencerna substrat milk tergantuk dari beberapa komplemen enzimarik bakteri tersebut. Beberapa perubahan biokimia litmus milk adalah : a. Fermentasi laktosa b. Pembentukan gas c. Reduksi litmus d. Pembentukan dadih e. Proteolisis f. Reaksi alkali (Tarigan,1988).
IV.
ALAT DAN BAHAN
NO
NAMA ALAT
1
Bunsen
2
Tabung Reaksi
3
Ose
4
Korek
5
Inkubator
NO
NAMA BAHAN
1
Medium Litmus Milk
:
2
Biakan
Mikroba
susu
kambing 3
Spiritus
V.
PROSEDUR KERJA
NO
Prosedur
1
Mengisi dua tabung dengan media litmus milk
2
Media yang telah dituangkan kemudian diberi label satu sebagai
:
kontrol dan satu lagi ditulis dengan menggunakan bakteri susu kambing 3
Menginokulasikan biakan bakteri susu kambing pada tabung litmus yang telah diberi tanda
4
Menginkubasi media selama 48 jam pada suhu 370C
5
Mengamati reaksi yang terjadi
VI.
HASIL DAN PEMBAHASAN
:
A. Tabel Hasil Pengamatan
NO
SUBJEK
KONTROL
MIKROORGANISME SUSU
1
Pembentukan Gas
+
+
2
Reduksi Litmus
-
+
3
Pembentukan Dadih
Renet
Renet
4
Proteolisis
+
-
5
Alkali
+
-
Keterangan : +
= Ada -
= Tidak Ada
B. PEMBAHASAN
Pembentukan Gas
Organisme mampu menggunakan laktosa sebagai sumber karbon untuk produksi energi, dengan menggunakan induksi enzim
-galactosidase. Degradasi laktosa dirumuskan sebagai
berikut:
Adanya asam laktat dapat dengan mudah dideteksi karena litmus bewarna ungu pada pH netral dan berubah menjadi merah muda ketika medium menjadi asam yaitu pada pH sekitar 4. Produk akhir pada fermentasi laktosa adalah CO 2 dan H2 . Adanya gas ini mungkin dapat
dilihat sebagai pemisahan ‘curd’ atau pembelahan dalam curd sebagai akibat adanya gas yang naik ke permukaan.
Reduksi Litmus Fermentasi adalah proses anaerobic yang meliputi biooksidasi yang terjadi karena tidak
ada molekul oksigen. Oksidasi ini mungkin akan terlihat sebagai perpindahan hydrogen (dehydrogenation)
dari
substrat.Karena
ion
hidrogen
tidak
dapat
dalam
bentuk
bebas/melayang-layang,hydrogen memerlukan akseptor elektron yang dapat mengikat ion hydrogen jika hal tersebut tidak terjadi maka reaksi reduksi-oksidasi tidak akan berjalan dan produksi energy tidak dapat dihasilkan. Pada tes litmus milk, litmus berperan sebagai akseptor. Saat berada dalam kondisi oksidasi, litmus berwarna ungu; ketika litmus menerima hydrogen dari substrat, litmus akan tereduksi dan berubah menjadi putih atau warna putih susu. Oksidasi laktosa ini memproduksi asam laktat, asam butirat, gas CO2 dan gas H2. -Lactic acid Lactose
Glucose
Pyruvic acid -Butyric acid
Gas hydrogen dikenal sebagai hydrogen litmus acceptor , yang menyebabkan perubahan menjadi putih dan menandakan bahwa laktosa tereduksi.
Pembentukan Dadih Renet Aktivitas biokimia dari mikroorganisme yang berbeda ditumbuhkan pada litmus milk
menghasilkan produksi 2 tipe curd (clots) yang berbeda. Curd yang terbentuk bergantung pada mekanisme biokimia yang membentuk curd tersebut. Beberapa organisme menghasilkan rennin, enzim yang berperan mengubah casein menjadi bentuk paracasein, selain itu adanya
calcium ion diubah menjadi calcium paracaseinate dan membentuk gumpalan yang tidak larut. Tidak seperti acid curd, curd jenis ini berupa gumpalan semisolid yang lembut. Gumpalan ini akan mengalir perlahan saat tabung dimiringkan.
Proteolisis Ketidakmampuan beberapa mikroorganisme untuk menghasilkan energi melalui jalur
fermentasi laktosa menandakan bahwa mikroorganisme tersebut harus menggunakan sumber nutrisi lainnya sebagai protein untuk menghasilkan energi. Dengan menggunakan enzim proteolitik, organisme menghidrolisis milk protein, terutama casein, menjadi bentuk dasarnya
yaitu asam amino. Proses pencernaan protein disertai dengan perubahan sejumlah besar ammonia yang dihasilkan dalam medium dengan alkaline pH. Litmus berubah warna menjadi lapisan ungu yang berada di atas/ permukaan dari tabung. reaksi sedangkan bagian bawahnya kehilangan strukturnya dan membentuk cairan kecoklatan.
Reaksi alkaline Reaksi alkaline dibuktikan ketika warna pada medium tidak berubah atau berubah
menjadi biru. Reaksi ini mengindikasikan partial degradation dari casein menjadi rantai polipeptida yang lebih pendek, dengan disertai pelepasan produk akhir alkaline yang menyebabkan perubahan warna. Beberapa kemungkinan hasil yang diperoleh dari uji Litmus Milk :
Keterangan gambar : A. Acid/Reduction/Curd B. Reduction/Curd (arrow denotes gas pocket) C. Uninoculated Control D. Acid Formation E. Proteolysis of casein F. Alkaline Reaction
VII.
JAWABAN PERTANYAAN DAN TUGAS
1. Apa fungsi litmus yang digunakan untuk reaksi susu litmus? Litmus berfungsi sebagai pendeteksi pH bakteri. 2. Jelaskan mengapa medium susu litmus dianggap sebagai medium diferensial yang baik? Hal ini dikarenakan medium litmus mengandung banyak komponen yang bisa digunakan oleh banyak bakteri untuk bermetabolisme. Dan setiap reaksi yang
ditimbulkan dari metabolisme menunjukkan hasil yang bervariasi antar speiesnya pada media ini. 3. Apa perbedaan dadih asam dan dadih renet? Pada dadih asam bakteri menyebabkan pengendapan protrin kasein menjadi calsium kasein. Sementara oada dadih rennet bakteri menghasilkan rennin yang mengubah kasein menjadi paracasein.
VIII. KESIMPULAN
Berdasarkan pengamatan dapat disimpulkan bahwa : a. Pada tabung terbentuk gas yang ditandai dengan adanya pemisahan pada dadih b. Reduksi litmus hanya terjadi pada litmus milk dengan mikroba susu kambing dan ditandai dengan adanya warna putih susu pada tabung c. Adapun dadih yang terbentuk pada dua tabung ialah Rennet hal ini dikarenakan endapan yang ada pada tabung tumpah ketika dibalik d. Pada proteolisis hanya kontrol yangterbentuk. Hal ini dilihat dari adanya warna ungu pada media litmus e. Pada reaksi alkali hanya pada kontrol yang terbentuk. Hal ini dapat dilihat dari media yangtetap berwarna ungu tanpa ada perubahan.
IX.
DAFTAR PUSTAKA
Hasanah, Uswatun.2017. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Medan : UNIMED. Lehninger. 1992. Dasar-Dasar Biokimia Jilid 1. Jakarta : Erlangga. Murray, Robert K. Et al . 2005. Biokimia Harper . Jakarta: Penerbit Buku Kedoktera EGC Pelczar, Michael J dan E.C.S. Chan. 2013. Dasar-dasar Mikrobiologi.
Jakarta
:Penerbit
UI.
Tarigan, J. 1988. Pengantar Mikrobiologi. Jakarta : Departemen Pendidikan dan Kebudayaan
