vezba 11

Osnovni princ incipi bakteriol iološke di a nostike infekci a izazvanih ANAE ANAERO ROBN BNIM IM spo sporo roge geni nim mi aspo asporo roge geni nim m bakt bakter erij ijam ama a

Anaerobne sporogene bakterije rod vrste

Clostridium  C. tetani  C. botulinum  C. erfr erfrin in en ens  s  osta ostale le klos klostr trid idije ije uzro uzročnici klostridijalne mionekroze (C. septicum , C. sordellii , C. histolyticum , C. novyi ,...) ,...)

C. difficile 

Anaerobne asporogene bakterije

Anaerobne asporogene bakterije Bacteroides fragilis grupa Porphyromonas spp. Prevotella spp. Fusobacterium nucleatum  Anaerobne koke (Peptostreptococcus spp.) Propionibacterium spp. Actinomyces israelii 

Karakteristike infekcija izazvanih anaerobnim bakterijama endogenog porekla lokalizovane u blizini sluznica na e e po m ro ne najčešće purulentne prisustvo velike količine gasa u uzorku prisustvo neprijatnog mirisa

Tetanus: opistotonus

Gasna gangrena

Infekcije izazvane anaerobnim asporogenim bakterijama

Pseudomonas sp. + anaerobi: infekcija rane

Anaerobni celulitis

Uzimanje materijala punktati i aspirati tkivo uzeto biopsijom likvor krv urin uzet suprapubičnom aspiracijom * edukacija zdravstvenog osoblja * pisano uputstvo za pravilno uzimanje uzorka * odgovarajući instrumenti: najbolje špric i igla * izbeći kontaminaciju normalnom florom

Uzimanje materijala Neprihvatljivi uzorci:

brisevi sputum stolica (osim za C. difficile ) urin dobijen tehnikom srednjeg mlaza ili kateterizacijom

Transport uzorka prioritet u transportu što kraće izlaganje kiseoniku, sušenju i sobnoj temperaturi reme ranspor a ez ranspor ne po oge do 20 minuta bez podloge najbolje transportovati u špricu transportne podloge sa niskim oksidoredukcionim potencijalom

Obrada materijala makroskopski pregled uzorka direktni preparat obojen po Gramu kultivisanje pod anaerobnim uslovima identifikacija izolata

Direktni preparat peritonitis: Clostridium spp. intracelularno

peritonitis: Peptostreptococcus spp. gnoj: polimikrobna infekcija

Kultivisanje nutritivni izbirači (vitamin K, hemin, ekstrakt kvasca) obogaćene podloge sa niskim oksidoredukcionim potencijalom inkubacija: anaerobni uslovi 37°C 48 h (5-7 dana do 3 nedelje)

Tehnike za postizanje anaerobnih uslova fizičke metode (vakuum pumpa) hemijske metode (hemijska reakcija)

sistem za kultivisanje anaerobnih bakterija

• anaerobna komora • lonac za anaerobe • kesa za anaerobe (i za transport uzorka)

Anaerobna komora

unutrašnjost komore

Anaerobna komora

“Lonac” za anaerobe

"lonac" sa svećom: mikroaerofilni uslovi

plava boja:

bela boja:

O

O

Praćenje anaerobnih uslova u loncu za anaerobe: metil plavo indikator

Kesa za anaerobe

Identifikacija ispitivanje mikroskopskih osobina

Sporogene bakterije: lokalizacija spore spora koja ne deformiše telo bacila

- centralna

- subterminalna

spora koja deformiše telo bacila

- terminalna

C. tetani : terminalna spora

C. botulinum u sporulaciji: subterminalna spora

Vizuelizacija spora: tehnike bojenja

prosto bojenje, bojenje po Gramu:

specijalno bojenje za spore: spora obojena drugom bojom

Identifikacija ispitivanje mikroskopskih osobina C. tetani spore

C. botulinum spore

Identifikacija ispitivanje mikroskopskih osobina

spore: specijalno bojenje

Identifikacija ispitivanje kulturelnih osobina

rast u tioglikolat bujonu Bacteroides fragilis  kolonije

Identifikacija ispitivanje fiziološko-biohemijskih osobina

B. fragilis eskulin test

C. perfringens lecitinaza test

Specijalno bojenje spora bakterija po Hauser-u 1. predmetno staklo staviti na metalni držač 2. celu površinu preliti bojom: karbol fuksin 3. zagrevati sa donje strane bakljicom do pojave pare (5 puta) BAKLJICE ugasiti pre vraćanja u bocu sa špiritusom! 4. ostaviti da se ohladi 60 s 5. odliti boju i isprati vodom 6. naliti H2SO4 za odbojavanje 20 s 7. naliti boju: metil-plavo 2 min 8. isprati vodom 9. osušiti filter papirom 10. mikroskopirati pod imerzijom